標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 38133-2019 轉(zhuǎn)基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，專門針對轉(zhuǎn)基因苜蓿的檢測制定。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了使用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）技術(shù)來定性和定量分析轉(zhuǎn)基因苜蓿的方法。它適用于轉(zhuǎn)基因苜蓿及其制品中特定目標(biāo)序列的存在與否及含量測定。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，首先需要準(zhǔn)備樣品DNA提取，采用適合于植物材料的標(biāo)準(zhǔn)程序從待測樣本中分離出高質(zhì)量的DNA。隨后，通過設(shè)計特異性引物和探針來進(jìn)行目標(biāo)序列的擴(kuò)增與識別。這些引物和探針應(yīng)能夠準(zhǔn)確地靶向所關(guān)注的轉(zhuǎn)基因成分，并且具有高度的特異性和靈敏度以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在實際操作過程中，將含有目標(biāo)DNA片段的樣品加入到含有適當(dāng)濃度的dNTPs、Taq DNA聚合酶等反應(yīng)體系中，在熱循環(huán)儀上按照設(shè)定好的溫度曲線進(jìn)行多次循環(huán)擴(kuò)增。每次循環(huán)后都會產(chǎn)生新的雙鏈DNA分子，從而實現(xiàn)目標(biāo)序列的數(shù)量級增長。同時，由于采用了熒光標(biāo)記技術(shù)，可以在每次循環(huán)結(jié)束時通過監(jiān)測熒光信號強(qiáng)度變化來間接反映產(chǎn)物累積情況，進(jìn)而實現(xiàn)對起始模板量的精確定量。

整個過程還需要設(shè)立陽性對照、陰性對照以及內(nèi)參基因等多個控制組別，以確保實驗的有效性和可靠性。此外，對于不同批次之間的結(jié)果比較，還需注意標(biāo)準(zhǔn)化處理，比如采用相同的標(biāo)準(zhǔn)品作為參考物質(zhì)，保證數(shù)據(jù)間的一致性和可比性。

該標(biāo)準(zhǔn)還詳細(xì)列出了實驗所需的具體條件參數(shù)設(shè)置、儀器設(shè)備要求以及質(zhì)量控制措施等內(nèi)容，為實驗室開展相關(guān)檢測工作提供了全面指導(dǎo)。


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....

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  • 2019-10-18 頒布
  • 2019-10-18 實施
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文檔簡介

ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T38133—2019

轉(zhuǎn)基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法

Geneticallymodifiedalfalfadetectionmethodbyreal-timePCR

2019-10-18發(fā)布2019-10-18實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T38133—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國檢驗檢疫科學(xué)研究院廣州海關(guān)技術(shù)中心廣西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫

:、、

技術(shù)中心遼寧出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人付偉朱鵬宇劉津魏霜杜智欣王晨光朱水芳黃文勝鄭秋月曹際娟

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38133—2019

轉(zhuǎn)基因苜蓿實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了苜蓿轉(zhuǎn)基因成分的實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)定性檢測方法

(PCR)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于種子飼料中的轉(zhuǎn)基因苜蓿以及品系的實時熒光方法檢測

、J101、J163KK179PCR。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義

GB/T19495.1

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求

GB/T19495.2

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法

GB/T19495.3

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測抽樣和制樣方法

GB/T19495.7

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

ACC基因acetylCoAcarboxylase

編碼乙酰輔酶羧化酶的基因

A。

注在本標(biāo)準(zhǔn)中作為苜蓿的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因

:。

32

.

18S核糖體RNA18SrRNA

編碼真核生物核糖體的基因

18SRNA。

注1在本標(biāo)準(zhǔn)中作為苜蓿的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因

:。

注2實際檢測中和選擇一種使用即可

:,3.13.2。

33

.

FMV35S啟動子35SpromoterfromamodifiedFigwortmosaicvirus

編碼玄參花葉病毒的啟動子的基因

35S。

注在本標(biāo)準(zhǔn)中作為轉(zhuǎn)基因苜蓿和的啟動子

:J101J163。

34

.

E9終止子3'terminationregionfrompearibulose15-bisphosphatecarboxylase

,

來源于源自豌豆核酮糖二磷酸羧化酶小亞基RbcSE9基因的非翻譯區(qū)存在于轉(zhuǎn)基因苜

-1,5-()3',

蓿與品系中

J101J163。

35

.

CP4-EPSPS基因5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthasegene

源自AgrobacteriumCP4菌株用于編碼莽草酸途徑中的關(guān)鍵酶的基因存在于轉(zhuǎn)基因苜蓿

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