GB/T 38165-2019人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測(cè)基于Alu序列實(shí)時(shí)熒光PCR法

ICS07080

A40.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T38165—2019

人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測(cè)

基于Alu序列實(shí)時(shí)熒光PCR法

Detectionofcirculatingcell-freeDNAconcentrationinhumanperipheralblood—

Real-timePCRmethodbasedonAlusequence

2019-10-18發(fā)布2019-10-18實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T38165—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省腫瘤醫(yī)院上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人何洋肖洪濤宋瑱李燕聞艷麗冷平劉剛李東梅

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38165—2019

人體外周血中循環(huán)游離DNA濃度檢測(cè)

基于Alu序列實(shí)時(shí)熒光PCR法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人體外周血中循環(huán)游離脫氧核糖核酸基于序列的實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)?/p>

(DNA)Alu

反應(yīng)定量檢測(cè)方法

(PCR)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于循環(huán)游離樣品中序列的定量檢測(cè)

DNAAlu。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

循環(huán)游離DNAcirculatingcell-freeDNAcfDNA

;

血液中來源于細(xì)胞凋亡和壞死的細(xì)胞外游離狀態(tài)的短片段

DNA。

32

.

實(shí)時(shí)熒光PCRreal-timePCR

在反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)通過熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)控整個(gè)擴(kuò)增過程實(shí)現(xiàn)對(duì)起始

PCR,PCR,

模板的定量及定性分析

。

33

.

Ct值cyclethreshold

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

。

34

.

Alu序列Alusequence

散在分布于靈長(zhǎng)類動(dòng)物基因組中的中度重復(fù)序列

。

注序列具有同源性占人類基因組序列的每個(gè)元件長(zhǎng)度約為

:Alu70%~98%,5%~10%,300bp。

4原理

以提取的外周血循環(huán)游離作為檢測(cè)目標(biāo)樣品以符合要求的人基因組定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為

DNA,DNA

標(biāo)準(zhǔn)品采用實(shí)時(shí)熒光技術(shù)設(shè)計(jì)特異性引物分別擴(kuò)增序列中長(zhǎng)度為和的片

,PCR,Alu115bp219bp

段以標(biāo)準(zhǔn)品起始模板濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

,DNA,Ct,。