槐米中蘆丁含量的測(cè)定

槐米中蘆丁含量的測(cè)定

槐樹(shù)原產(chǎn)于中國(guó)。它用途廣泛，功能大，是一種集藥用、食用、保健、觀賞于一身的優(yōu)良樹(shù)種?；睒?shù)自古是治病的重要藥源植物，被譽(yù)為“金藥樹(shù)”槐樹(shù)依據(jù)其花色分為白、青、黃、金槐等4個(gè)類(lèi)別.除了國(guó)槐外，槐樹(shù)還有龍爪槐、蝴蝶槐、金葉國(guó)槐、五色槐、黃金槐、雙季米槐、香花槐和金花槐等變種。它全身都是藥，花、葉、枝、根、果實(shí)及種子均可入藥，以槐花入藥最普遍。洋槐五月開(kāi)花，其花一般食用，國(guó)槐七八月才開(kāi)花，其花入藥。故我國(guó)藥用槐米多出自國(guó)槐。金藥樹(shù)—槐樹(shù)槐米2010年《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，槐樹(shù)的藥用部分為干燥的花朵及花蕾。前者習(xí)稱(chēng)“槐花”，后者習(xí)稱(chēng)“槐米”?；泵字泻刑J丁、槲皮素、皂甙、多糖黏液質(zhì)等成分，其中,蘆丁是主要藥用成分,因此對(duì)其研究有非?，F(xiàn)實(shí)的意義。蘆丁

蘆丁是一種黃酮類(lèi)化合物?；泵字械奶J丁隨槐花的產(chǎn)地及收取時(shí)間的不同其含量在10%～28%之間，我國(guó)蘆丁生產(chǎn)主要以槐米為原料。

蘆丁的藥理作用抗炎作用抗氧化作用抗菌作用抗癌作用對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用對(duì)腎臟缺血損傷的保護(hù)作用降血壓作用胃腸粘膜保護(hù)作用蘆丁的化學(xué)特性蘆丁分子式C27H30O16，分子量610.51，為淺黃色針狀結(jié)晶，難溶于冷水，可溶于熱水、甲醇、乙醇、吡啶，易溶于堿水。

蘆丁提取技術(shù)概述13245醇溶劑浸提法熱水提取法堿提酸沉降法

超聲輔助提取法

微波提取法超聲波輔助提取法利用超聲波的空化效應(yīng)、湍流效應(yīng)、微擾效應(yīng)、界面效應(yīng)和聚能效應(yīng)等物理作用，加速被破碎物細(xì)胞壁的破裂，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)含物的溶出，從而實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物低溫、快速提取的目標(biāo)。具有雜質(zhì)含量低、有效成分含量高、提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。蘆丁為細(xì)胞中的次生代謝產(chǎn)物，存在于細(xì)胞質(zhì)中；通過(guò)粉碎，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，也就使蘆丁易于被提取出來(lái)。堿液對(duì)蘆丁有增溶作用，用堿液浸泡后，能使更多的蘆丁溶解出來(lái)，同樣也有利于蘆丁的提取。因素設(shè)計(jì)查正交實(shí)驗(yàn)表，根據(jù)L9（34）設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程槐米粉碎過(guò)40篩目按一定料液比混合加入亞硫氫鈉、硼砂,用氫氧化鈉調(diào)PH至9超聲提取酸沉用鹽酸將PH調(diào)至3離心過(guò)濾蘆丁粗提產(chǎn)品濾液靜置、干燥蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱(chēng)取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品200mg，置100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻即得（每1mL中含無(wú)水蘆丁0.2mg）。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL與6.0mL分別置25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亞硝酸鈉溶液1mL使混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1mL搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；按照分光光度法，在500nm的波長(zhǎng)處比色測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取干燥蘆丁粗品約1g，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解后移入100mL容量瓶，再加甲醇洗滌并入容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻。精取10mL置100mL容量瓶，加水至刻度，搖勻。精密量取3mL置25mL容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度，計(jì)算即得槐米中蘆丁的提取得率。蘆丁的提取率測(cè)定蘆丁的純化——大孔樹(shù)脂減法測(cè)定法樹(shù)脂的預(yù)處理

新鮮樹(shù)脂先用乙醇浸泡2次，每次12h，濾去浮游物和破碎樹(shù)脂，再用甲醇浸泡2～3次至上清液澄清，最后用去離子水清洗1～2次.采用濕法上柱，并用和洗脫劑同濃度的甲醇水溶液沖洗2～3柱體積，以達(dá)到該濃度下的平衡狀態(tài)。用過(guò)的樹(shù)脂，用足量甲醇浸泡使吸附物解吸達(dá)到再生的目的。如果反復(fù)使用樹(shù)脂吸附效果下降，可用3%NaOH及10%NaCl混合液浸泡清洗12h，濾去溶劑并用去離子水充分洗滌至呈中性時(shí)即可。提純方法將粗品溶于75%的75℃甲醇溶液中(m:v≈1:7)，待完全溶解趁熱過(guò)濾；濾液緩慢加入大孔樹(shù)脂色譜柱中(粗品蘆丁與樹(shù)脂質(zhì)量比1:10)，待濾液完全浸入大孔樹(shù)脂后，分別以75%的甲醇溶液為洗脫劑自然流速進(jìn)行洗脫，待洗脫液顏色由無(wú)色變深后，開(kāi)始第一次收集，至顏色由深變淺結(jié)束，將收集的洗脫液在常溫下自然靜置析晶，過(guò)濾并用少量甲醇洗滌濾餅后真空干燥，獲取最終產(chǎn)品;第一次收集結(jié)束后，改用純甲醇溶液進(jìn)行洗脫，待顏色有淺變深開(kāi)始第二次收集，直顏色變無(wú)色結(jié)束，將第二次收集的洗脫液減壓蒸餾獲取浸膏，干燥后獲得的產(chǎn)品用作下次純化工藝過(guò)程的粗品蘆丁原料。蘆丁對(duì)超氧陰離子O2÷清除作用用鄰苯三酚自氧化法,利用O2÷清除劑能使鄰苯三酚自氧化產(chǎn)物在325nm處的吸收峰受到抑制這一特點(diǎn),用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),間接測(cè)得O2÷生成及O2÷的清除率。原理用實(shí)驗(yàn)純化所制的蘆丁配置成20、40、60、80、100μmol/L的溶液.取0.05mmol/LpH8.2的Tris-HCl緩沖液4.5mL于試管中,25℃預(yù)熱20min，加入0.1mmol/L鄰苯三酚0.2mL，不同濃度藥物0.2mL，蒸餾水0.1m