半夏的組培快繁

半夏

的組培快繁

半夏屬天南星科草本植物，半夏是一種重要的中藥材，其塊莖入藥，有祛痰、鎮(zhèn)咳及消腫等功效。半夏半夏有毒半夏植物全株有毒，塊莖毒性較大，生食0.1—1.8g即可引起中毒。對(duì)口腔、喉頭、消化道粘膜均可引起強(qiáng)烈刺激；服少量可使口舌麻木，多量則燒痛腫脹、不能發(fā)聲、流涎、嘔吐、全身麻木、呼吸遲緩而不整、痙攣、呼吸困難，最后麻痹而死。有因服生半夏多量而永久失音者。半夏解毒治療半夏中毒，用生姜搗汁服下，其毒解。前景廣闊在自然界中，半夏主要由生于葉柄下的珠芽進(jìn)行繁殖，生長(zhǎng)緩慢，采集困難，不能廣泛栽培，因此藥源十分緊張，市場(chǎng)供不應(yīng)求，2005年冬藥市有沽55～65元/千克，出口和內(nèi)銷(xiāo)俱緊俏，應(yīng)用組培快繁技術(shù)加速半夏種苗生產(chǎn)前景廣闊。(一)無(wú)菌培養(yǎng)物的建立1．外植體采集與消毒滅菌采集半夏塊莖或珠芽，用清水洗凈，剝?nèi)K莖外皮，外植體消毒滅菌在超凈工作臺(tái)上先用70％酒精浸泡30—60s，用無(wú)菌水沖洗1次，倒掉無(wú)菌水，加入0.1％氯化汞液，塊莖浸泡殺菌10min，或葉片浸泡滅菌7min,用無(wú)菌蒸餾水沖洗3～5次，除去氯化汞，防止毒害培養(yǎng)物。2．塊莖啟動(dòng)培養(yǎng)A、將經(jīng)過(guò)消毒的珠芽和塊莖取出，在無(wú)菌濾紙上切成小塊，每個(gè)塊莖可縱切為4～8塊，使每個(gè)小塊上都有芽原基。B、將切塊分別放到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。C、啟動(dòng)培養(yǎng)基:MS+2,4-D0.3～1.0mg／L+BA0.5～2.0mg／L。D、培養(yǎng)情況2—3周即可見(jiàn)愈傷組織形成，形成的愈傷組織：①如果致密、堅(jiān)硬，綠色或淺綠色，易形成類(lèi)似珠芽的組織塊，可分化產(chǎn)生芽。②如果疏松，白色透明或半透明，則不易分化產(chǎn)生芽，應(yīng)丟棄。E、培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度白天25℃土2℃，晚上18℃土2℃，有利于半夏的分化和愈傷組織形成；光照強(qiáng)度為1000～2000Lx，光照時(shí)間為8～10h／d。(二)繼代增殖培養(yǎng)

1．塊莖誘導(dǎo)叢生芽在啟動(dòng)培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)3周左右，即可見(jiàn)塊莖切塊表層變?yōu)榫G色，塊莖體積也發(fā)生膨大，再經(jīng)3～4周，就可見(jiàn)不定芽出現(xiàn)，每個(gè)切塊上可產(chǎn)生5—10個(gè)芽。而且，在這種培養(yǎng)基上芽可繼續(xù)生長(zhǎng)，不需要再轉(zhuǎn)到壯苗培養(yǎng)基上。也可將帶有小芽的切塊重新切割再接種到芽分化培養(yǎng)基上，令其產(chǎn)生更多的新芽。這種培養(yǎng)方法簡(jiǎn)便易行，周期短，但繁殖速度受原始接種材料數(shù)量的限制，需大量采集塊莖。

2．愈傷組織誘導(dǎo)叢生芽在啟動(dòng)培養(yǎng)基上接種的塊莖，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，便可產(chǎn)生較多的愈傷組織，再將愈傷組織轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基MS+6-BA1.0～1.5mg／L+NAA0.5～1.0mg／Ｌ上，放在25～30℃的溫度下培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)20d左右，就可看到從愈傷組織上分化形成的許多不定芽，每塊愈傷組織上可形成10個(gè)左右不定芽。(三)生根培養(yǎng)

將從塊莖切塊上產(chǎn)生的不定芽和由愈傷組織產(chǎn)生的不定芽轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基是MS+IBA1.0mg／L+NAA0.03mg/L，或1／2MS+NAA0.3～0.5mg／L。在兩種生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)20d左右，不定根從小芽的基部產(chǎn)生，多者每小芽可產(chǎn)生5～6條根。根生長(zhǎng)到1.0cm左右，可移至培養(yǎng)室外光線(xiàn)比較充足的室內(nèi)煉苗，約15d便可移栽到生長(zhǎng)基質(zhì)中。(四)試管苗移植

從培養(yǎng)瓶中取出帶根小苗，應(yīng)特別注意不要損傷根系。取出的小苗先放到自來(lái)水中，用柔軟的小刷子輕輕刷掉根上的瓊脂，越徹底越好，要盡量不傷根。清洗完成后，從自來(lái)水中取出小苗，放在比較干凈的報(bào)紙或草紙上，待根、葉上沒(méi)有多余的水分再移栽入生長(zhǎng)基質(zhì)中。移栽移栽基質(zhì)的組成是5份腐殖土(草炭或山上樹(shù)木周?chē)募?xì)土)、3份蛭石、1份細(xì)沙、1份珍珠巖。移栽完成后轉(zhuǎn)入溫室或大棚中，注意溫度不可太高，相對(duì)濕度應(yīng)盡量保持在90％以上，初期要適當(dāng)遮陽(yáng)，經(jīng)20～30d，新根就可形成，此時(shí)即可移栽到種植田中，進(jìn)行正常的田間管理。當(dāng)年移栽的試管苗當(dāng)年則可收獲塊莖，千粒重約2kg。(五)試管塊莖的培養(yǎng)將半夏莖尖接種到MS+KT0.5mg／L+NAA0.2mg／L的固體培養(yǎng)基上，獲得小植株后，再用其葉柄作外植體，在MS+2,4-D+KT的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織，繼而通過(guò)形成小塊莖的途徑產(chǎn)生完整植株，其移栽成活率可達(dá)100％。由此所得的試管苗塊莖產(chǎn)量(鮮重)比常規(guī)小塊