第七章 細胞介導的免疫應答

第七章細胞介導的免疫應答教學內(nèi)容1、掌握免疫應答的基本概念學時：42、掌握免疫應答的基本過程3、了解細胞凋亡和免疫免疫系統(tǒng)的主要功能是識別自身和非自身的抗原物質(zhì)，并對識別的物質(zhì)產(chǎn)生免疫應答，從而保證機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。免疫應答是由抗原引發(fā)的，由多種免疫細胞參與的一系列反應。首先是APC將經(jīng)過加工的抗原提呈給相應的T細胞(Th或CTL)，使之活化，通過細胞膜上的分子或分泌的細胞介素進一步活化諸如B細胞、NK細胞、粒細胞、CTL、巨噬細胞等細胞，產(chǎn)生相應的免疫效應。還可直接通過CTL殺傷靶細胞或誘導靶細胞凋亡。并通過補體成分及細胞因子介導炎癥反應，促進對抗原和靶細胞吞噬，最終清除抗原。

一、免疫應答的非特異性和特異性二、主動免疫、被動免疫和過繼免疫三、無應答第一節(jié)免疫應答的基本概念一、免疫應答的非特異性和特異性1、非特異性免疫應答

凡在生物進化過程中形成的、相對穩(wěn)定、無特殊針對性的對病原菌的天生抵抗力，稱為非特異性免疫或先天免疫或自然免疫。

非特異性免疫的特點：

無特異性、天生性。非特異性免疫屏障結構

炎癥反應吞噬細胞的吞噬作用

正常組織和體液中的抗菌物質(zhì)

機體的非特異性免疫主要包括四個方面：2、特異性免疫應答是機體受到抗原刺激后，激活相應的淋巴細胞，從而導致一系列的免疫應答反應。反應過程中由于抗原提呈細胞對抗原進行限制性加工處理及特異性提呈以使相應的B細胞和T細胞克隆產(chǎn)生特異性識別，所以稱為特異性免疫應答。

特異性免疫應答又稱適應性免疫應答，它具有針對不同抗原(包括病原生物)的侵入而作出的相應應答的特征。由于是后天獲得的，不能遺傳給后代，又稱為獲得性免疫或后天免疫。特異性免疫的特點：

獲得性、特異性和記憶性。特異性免疫應答可分為兩種類型：由抗原提呈和T細胞特異識別開始，經(jīng)過效應T細胞、巨噬細胞等效應細胞介導的免疫應答稱為細胞免疫應答。特異性免疫的類型體液免疫細胞免疫由B細胞上的抗原受體(mIg)識別抗原，誘發(fā)產(chǎn)生抗體的應答稱為體液免疫應答。能特異性識別抗原的T細胞克隆，是因為它有特異性抗原受體TCR。受到抗原刺激后T細胞開始活化，活化的T細胞大多分化發(fā)育成效應T細胞(如CTL)。少數(shù)活化的T細胞分化為記憶T細胞。記憶T細胞保持其原有的特異性，當再次接觸到相同抗原時能迅速作出免疫應答反應。記憶T細胞可在個體之間人工轉(zhuǎn)移。二、主動免疫、被動免疫和過繼免疫

特異性免疫依其來源可分為三類：主動免疫被動免疫過繼免疫1、主動免疫

是機體在自然條件下因病原菌侵染或通過人工預防接種后在體內(nèi)形成的特異性免疫力。當受免疫的個體再遇到相同的抗原刺激時便會作出強烈的免疫應答。主動免疫的有效免疫時間不等，如白喉、天花和流行性腮腺炎可誘導長期的免疫力，而流行性感冒只能產(chǎn)生短期的免疫力。2、被動免疫是通過輸血、輸入淋巴細胞、注射血清組分或哺乳將現(xiàn)成的特異性抗體輸入未經(jīng)免疫的個體，而使其獲得的免疫力。例如注射破傷風抗毒素、注射乙肝疫苗等。被動免疫隨著輸入的抗體在體內(nèi)被代謝消失，免疫力也消失。

3、過繼免疫

過繼免疫是通過轉(zhuǎn)移免疫的淋巴細胞將免疫性轉(zhuǎn)移到一個未免疫的個體，使其具有與供體相同的特異免疫性。所轉(zhuǎn)移的T細胞是具有特異性的、活化的淋巴細胞，包括記憶性淋巴細胞。過繼免疫也是被動的，但與被動免疫不同的是過繼免疫轉(zhuǎn)移免疫性是通過淋巴細胞而不是通過抗體。

抗原不是任何情況下都會誘導機體產(chǎn)生免疫應答。當淋巴細胞缺失時，機體不會產(chǎn)生免疫應答，這可能是機體本來有免疫缺陷，也可能是誘導發(fā)生的淋巴細胞生理性凋亡造成的。三、無應答

無應答是免疫耐受現(xiàn)象，是指淋巴細胞雖然存在，但由于受到抑制，對免疫原的再刺激不能作出反應。自身抗原、腫瘤抗原有時會表現(xiàn)無應答。當條件改變之后自身抗原可能誘發(fā)免疫應答而發(fā)生自身免疫病。機體有時對一些腫瘤和慢性病毒表現(xiàn)無應答，這是病理性的無應答。因此，打破病理性無應答在免疫治療方面具有重要的意義。第二節(jié)免疫應答的基本過程

免疫應答的基本過程包括機體中抗原提呈細胞對抗原攝取、加工、并將抗原提呈給T、B淋巴細胞，使淋巴細胞活化、增殖、分化、并成為效應細胞，發(fā)生免疫反應，最終清除抗原物質(zhì)。這是一個過程十分復雜的動態(tài)過程。一、抗原提呈細胞二、T細胞活化三、外源性抗原免疫應答四、內(nèi)源性抗原免疫應答一、抗原提呈細胞

抗原提呈細胞是指能表達MHC-Ⅱ類分子，并能將抗原加工提呈給免疫應答細胞的細胞。主要有：單核細胞、各種巨噬細胞，B細胞、樹突細胞及內(nèi)皮細胞等。

免疫應答是從抗原提呈細胞對抗原的攝取、加工、并提呈給其他淋巴細胞開始啟動的?？乖岢始毎加幸粋€共同的特征，即都能表達MHC-Ⅱ類分子，這是抗原提呈的重要分子。

單核細胞和巨噬細胞都來源于骨髓干細胞，骨髓中的髓樣干細胞在多種集落刺激因子(CSF)、IL-2、IL-4以及IFN等因子的作用下，誘導分化成單核細胞，并進入血液循環(huán)，然后，穿過內(nèi)皮細胞層移行至全身各種組織，形成具有組織特異性的巨噬細胞。1、單核細胞和巨噬細胞樹突細胞是一類非常重要的抗原提呈細胞，無吞噬功能，但其表面表達較高密度的MHC-Ⅱ分子，且由于有較多樹狀突起，表面積較大，有利于抗原提呈。2、樹突細胞

隨著抗原的來源和性質(zhì)不同，其加工和提呈的途徑也不同，蛋白質(zhì)抗原可分為內(nèi)源性抗原和外源性抗原兩大類，這兩類抗原的免疫應答過程是不同的。3、內(nèi)源性抗原和外源性抗原外源性抗原：是指外來的抗原，包括各種微生物體、各種蛋白質(zhì)分子等。內(nèi)源性抗原：主要由自身細胞器合成，如病毒抗原、腫瘤抗原及自身分子突變的抗原等。但同樣是病毒，滅活的，無感染性的病毒抗原通過外源性抗原加工提呈途徑，而活病毒則通過內(nèi)源性抗原提呈途徑。二、T細胞活化

免疫應答的重要過程是淋巴細胞的活化，而T細胞的活化是細胞介導的免疫應答中不可缺少的內(nèi)容。T細胞活化主要表現(xiàn)為細胞分裂增殖，克隆擴增，分化為效應細胞并執(zhí)行各種功能。如Th輔助B細胞分泌抗體的功能，Tc有殺傷靶細胞和誘導靶細胞凋亡的功能。（1）抗原提呈細胞(或靶細胞)表面MHC/抗原肽復合物與T細胞表面的TCR結合為第一信號；（2）抗原提呈細胞表面B7分子與T細胞表面CD28分子結合形成第二信號；（3）IL-1和IL-2等細胞因子是T細胞活化的第三信號。三種信號對T細胞活化過程缺一不可。1、T細胞抗原誘導活化T細胞抗原誘導活化的三個基本條件：CD3作為與TCR緊密聯(lián)系在一起的輔助分子，是將TCR信號傳入T細胞的不可缺少的分子。IL-1是巨噬細胞等APC產(chǎn)生的細胞因子。它與其他信號一起可以刺激T細胞分泌IL-2。IL-2是T細胞生長因子，IL-2和T細胞表面IL-2受體的產(chǎn)生是T細胞活化的重要標志。T細胞抗原誘導活化的其它因素：因此，T細胞既分泌IL-2，又具有IL-2受體，就形成了自分泌活化擴增信號的正反饋放大，使被活化的T細胞克隆得到快速擴增活化。

T細胞除可經(jīng)抗原特異性途徑誘導活化外，還可以經(jīng)過非抗原途徑誘導活化或抑制。2、T細胞非抗原誘導活化（1）植物凝集素：如植物血凝素(PHA)，伴刀豆蛋白A(ConA)及商陸有絲分裂素(PWM)等可以使大量休止期T細胞克隆活化。（3）小分子物質(zhì)：對T細胞活化具有較大的影響，如鈣離子載體A23187和離子霉素可以加強T細胞活化，而環(huán)孢素A和糖皮質(zhì)激素則可抑制T細胞活化，并作為重要的免疫抑制藥用于臨床。（2）單克隆抗體：可以與TCR的不同結構域結合并產(chǎn)生T細胞活化效應或相反效應，阻斷抗原對T細胞的活化。（2）TCR蛋白激酶C(PKC)途徑。（1）CD28蛋白酪氨酸激酶(PTK)途徑。3、T細胞活化的主要過程T細胞接受抗原刺激后，膜信號通過蛋白激酶系統(tǒng)傳向胞內(nèi)，可分別通過兩條途徑激活：兩條途徑均可激活JNK蛋白激酶(JNK-1)。TCR途徑激活磷脂酶C(PLC)導致IP3增高，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca+2釋放導致胞質(zhì)鈣增高，進一步激活鈣調(diào)磷酸酶，它與JNK通過DNA結合蛋白啟動IL-2基因的轉(zhuǎn)錄，分泌IL-2作為T細胞生長因子，又可與T細胞自身IL-2受體結合，形成正反饋增殖放大，從而活化T細胞。外源性Ag是通過MHC-Ⅱ分子提呈的。三、外源性Ag免疫應答

APC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上新合成的MHC-Ⅱ分子，在無抗原肽時，是與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的恒定鏈分子結合的。1、MHC-Ⅱ分子的表達外源性Ag經(jīng)過APC的內(nèi)吞作用，形成內(nèi)粒體進入胞質(zhì)。內(nèi)粒體中含多種水解酶，可將抗原水解成含12-20氨基酸的肽段。隨后，恒定肽被降解，囊泡繼續(xù)向胞質(zhì)外移動，最終與細胞外膜融合，從而使結合有抗原肽的MHC-Ⅱ分子表達于APC表面。MHC-Ⅱ與恒定鏈的復合物隨著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜移動，形成囊泡，并與內(nèi)粒體融合，然后，MHC分子上的恒定鏈被抗原肽取代，形成MHC-Ⅱ與抗原肽的復合物。（1）MHC-抗原肽-TCR復合物：APC表面MHC-Ⅱ與抗原肽結合形成復合表位，共同被Th識別，T細胞表面的TCR及其共受體CD4以及膜內(nèi)信號傳遞分子CD3在Th細胞膜上形成復合物，APC上MHC-肽復合物與TCR結合，同時被CD4識別結合，形成MHC-抗原肽-TCR復合物，稱為第一信號，從而將細胞活化信號傳入Th細胞內(nèi)。2、Th的活化

MHC-抗原肽-TCR復合物的形成具有高度的特異性，MHC對抗原的結合具有一定的選擇性，而這兩者結合后形成的復合表位對TCR又有高度選擇性識別和結合，這種識別又稱MHC限制性識別。（2）B7-CD28復合物：Th活化還需要APC表面的B7分子與T細胞表面的CD28分子結合形成復合物，稱為第二信號。只有當MHC-肽-TCR信號與B7-CD28兩種信號共同存在時，才能刺激T細胞活化、增殖。（3）細胞因子：T細胞活化增殖分化還需要各種細胞因子的作用，稱為第三信號。細胞因子對促進細胞表面受體的表達，對應答的啟動和放大非常重要。

這三種信號缺一不可，如只有第一信號沒有第二信號，則可導致被刺激的T細胞死亡或出現(xiàn)免疫耐受，而只有第二信號則無反應。Th細胞被APC激活后，開始分裂增殖，并產(chǎn)生一些細胞因子，如IL-2、4、5、6、IFN-γ，并表達一些膜分子，如IL-2受體(IL-2R)、CD40L等。CD40L可以與巨噬細胞、B細胞等表面表達的CD40分子結合、使巨噬細胞和B細胞活化。3、B細胞的活化巨噬細胞活化后分泌IL-1、7、10，并與Th細胞分泌的IL-4、5、6和IFN-γ共同對B細胞增殖分化成漿細胞，分泌抗體起重要作用。抗體的特異性來自于BCR對抗原的特異性親和力，以致特異性B細胞才能得以接受并加工、處理特異性Ag，但是作為TD-Ag，被B細胞或巨噬細胞加工后，只剩下一些MHC-Ⅱ分子結合的抗原寡肽段被提呈給Th細胞，以產(chǎn)生反饋性的活化該特異性B細胞克隆的信號，并使B細胞分化成漿細胞，產(chǎn)生Ab。特異性的Ab產(chǎn)生后，可引起一系列的免疫效應。（1）中和抗原Ab與抗原特異性結合形成免疫復合物沉淀，可被吞噬細胞吞噬清除。4、Ab的免疫效應

由于巨噬細胞、嗜中性粒細胞表面均有Fc受體表達，當抗體的Fab區(qū)與Ag決定簇結合，而Fc端與Fc受體結合后，吞噬細胞可以準確的吞噬Ag物質(zhì)，并將其消滅，這個過程稱為調(diào)理作用。（2）抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用即ADCC。多種白細胞如Tc、NK細胞、單核巨噬細胞及嗜中性、嗜酸性粒細胞表面都有Ab的Fc受體，當Ab與這些細胞表面Fc受體結合后，在遇到細胞性抗原時，白細胞通過Ab與靶細胞緊密結合，并將靶細胞裂解。（3）抗體介導的補體依賴的細胞毒作用即CDC。Ab可以通過經(jīng)典激活途徑激活補體，最終使補體成分在靶細胞膜上形成孔洞，使靶細胞裂解。內(nèi)源性Ag在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成后，在胞質(zhì)中被多蛋白酶復合物(LMP)水解成8-11肽，然后被依賴ATP的抗原肽載體(TAP)運送至MHC-Ⅰ分子，與MHC-Ⅰ分子及β2m分子結合，隨著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體膜移動，最后與細胞外膜融合而表達于細胞表面。四、內(nèi)源性Ag免疫應答

內(nèi)源性Ag包括病毒、腫瘤和自身突變抗原等，是通過MHC-Ⅰ分子完成免疫應答的。1、MHC-Ⅰ分子的表達

當MHC分子α鏈(重鏈)剛合成時，首先與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣聯(lián)蛋白分子結合，當抗原肽和β2m分子到達時，鈣聯(lián)蛋白解離。鈣聯(lián)蛋白與MHC-Ⅰ分子上的恒定鏈功能相似，有分子伴侶作用。MHC-Ⅰ類分子與抗原肽結合后形成復合表位，共同被CD8+的Tc表面TCR識別和結合?？乖谋砦慌cTCR的結合具有高度特異性，只有具有與抗原肽相匹配的TCR的Tc細胞克隆才能與提呈抗原的細胞結合而發(fā)生免疫應答。2、Tc細胞的活化具有獨特型的Tc細胞克隆數(shù)量少，處于休止狀態(tài)。當攜帶有MHC-Ⅰ分子和抗原肽的APC與Tc的TCR結合并在復合刺激信號B7-CD28的協(xié)同作用下可激活前體Tc細胞。巨噬細胞分泌的IL-1也起一定作用，可激活T細胞表達IL-2受體。

CD4+Th細胞分泌的細胞因子如IL-2、4、12、INF-γ等對Tc細胞增殖、分化、成熟起著重要作用，當前體Tc細胞活化后，其細胞內(nèi)基因表達調(diào)控發(fā)生一系列的變化，如細胞內(nèi)合成許多顆粒酶、穿孔素、TNF、IFN-γ及Fas配體(CD95L)。Tc發(fā)揮效應依賴于與MHC-Ⅰ分子介導的含有特異抗原肽的靶細胞的接觸，及一些非特異性粘附分子與靶細胞相互作用。當Tc與靶細胞通過膜緊密接觸時，Tc細胞內(nèi)的裂解顆粒將細胞毒素顆粒定向釋放至靶細胞，顆粒內(nèi)的穿孔素，可集中到靶細胞膜上，形成直徑16nm的孔道，使細胞內(nèi)外相通，造成靶細胞內(nèi)含物外泄而死亡。Tc細胞每次僅裂解一個靶細胞，當殺傷一個靶細胞后，又指向另一個靶細胞，而自身不受損傷，也不損傷其他細胞。Tc細胞殺傷靶細胞的另一個機理是通過其表面表達的FasL與靶細胞表面的Fas(CD95)分子的結合，從而啟動靶細胞凋亡。Tc細胞對靶細胞殺傷有以下三個特點：（1）具有抗原特異性和MHC-Ⅰ分子限制性。由于MHC-Ⅰ分子表達于所有有核細胞，防御范圍廣；但在效應期，Tc又受自身MHC-Ⅰ分子約束，只對自身表達MHC-Ⅰ分子的細胞內(nèi)感染、突變抗原、自身抗原起到監(jiān)視作用，不殺傷異體MHC-Ⅰ分子介導的靶細胞。（2）直接接觸。殺傷過程需要與靶細胞直接接觸，不傷害其他無關細胞。（3）反復殺傷?？煞磸蜌磉_MHC-Ⅰ分子及相應特異抗原的多個靶細胞而不損傷自身。少數(shù)MHC-Ⅱ分子介導的Th也可通過表達FasL以誘導靶細胞凋亡。

第三節(jié)細胞凋亡與免疫

一、細胞凋亡二、細胞凋亡的檢測

三、細胞凋亡與免疫

因環(huán)境因素突變或病原物入侵而造成的細胞死亡，稱為病理死亡，或細胞壞死。

因個體正常生命活動的需要，一部分細胞必定在一定階段死去，稱細胞凋亡。

細胞凋亡是免疫應答和免疫調(diào)控的重要形式之一，免疫細胞的增殖與分化是與免疫細胞正常死亡相統(tǒng)一的，而免疫應答的效應過程是與靶細胞死亡相伴隨的。1972年，Kerr等提出細胞凋亡不同于壞死、是主動的、自我破壞的過程。1980年，Wyllie等用糖皮質(zhì)激素誘導T細胞死亡時，觀察到細胞發(fā)生的一系列變化與細胞壞死不同，認為這是細胞內(nèi)基因調(diào)控引起的、有序的死亡過程，并提出了細胞程序性死亡(PCD)（或細胞凋亡）的概念。凋亡是多細胞生物生長發(fā)育、協(xié)調(diào)體內(nèi)環(huán)境，完成一定生理機能的需要，對于機體免疫具有特殊意義。免疫系統(tǒng)識別功能的形成，必須刪除對自身起反應的淋巴細胞，而這種刪除過程主要是通過細胞凋亡來完成的。淋巴細胞對靶細胞的殺傷過程部分也是通過誘導靶細胞凋亡來實現(xiàn)的。一、細胞凋亡細胞凋亡過程如出現(xiàn)紊亂，機體可能出現(xiàn)嚴重的病理狀態(tài)，如腫瘤、白血病、自身免疫性疾病(類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡)、免疫缺陷等。1、細胞凋亡a、細胞形態(tài)變圓失去微絨毛，與周圍細胞脫離；（1）細胞凋亡的特征b、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張呈泡狀并與細胞膜融合；e、細胞體積變小，細胞膜內(nèi)陷將細胞分割為凋亡小體。c、染色質(zhì)壓縮呈半月形，凝聚于核膜周邊，核仁裂解。d、DNA被核酸內(nèi)切酶降解為大小不一、呈梯度變化的寡核苷酸片段。a、脫落離開生物體；（2）細胞凋亡的結局b、被吞噬細胞及周鄰細胞吞噬清除。凋亡是在生理因素的誘導下發(fā)生的，不會引起炎癥反應。凋亡過程需要新的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成，是一個需要能量的主動過程。2、細胞壞死a、細胞膜通透性增加，細胞腫脹或發(fā)生不規(guī)則變化。b、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細胞器擴張、溶酶體破壞。d、細胞膜破裂、胞質(zhì)外溢、并釋放到周圍。c、細胞核DNA和胞質(zhì)內(nèi)容被無規(guī)律的隨機降解。（1）細胞壞死的特征f、崩潰的細胞碎片被巨噬細胞吞噬清除。（2）細胞壞死的結局細胞壞死是非生理因素造成的損傷過程，可引起正常細胞嚴重的炎癥反應。細胞凋亡與壞死的主要區(qū)別

細胞凋亡細胞壞死誘因為生理因素非生理因素造成的損傷需要能量不需能量有新的基因轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)合成無基因調(diào)控DNA呈梯度降解DNA無序降解細胞膜內(nèi)陷分割形成凋亡小體細胞腫脹溶解細胞器完整，染色質(zhì)均一凝集細胞器破裂，染色質(zhì)不均一不發(fā)生炎癥反應發(fā)生嚴重炎癥反應二、細胞凋亡的檢測

應用形態(tài)學、生物化學、分子生物學、免疫學方法都可將凋亡細胞與活細胞及壞死細胞區(qū)分開來，部分方法可對凋亡細胞進行定量分析，常用的方法包括:細胞凋亡的檢測形態(tài)學檢測方法

免疫學檢測方法

生物化學檢測方法

1、形態(tài)學檢測方法（1）利用光學顯微鏡直接觀察細胞大小、形態(tài)、細胞器、凋亡小體及核染色質(zhì)結構等。（2）染料拒染試驗臺盼藍：可使死細胞著色，活細胞不著色。熒光染料：碘化丙啶(PI)可使死細胞染色，在紫外光下發(fā)紅熒光，而活細胞和凋亡細胞不被染色。二乙基熒光素和雙苯胼咪唑(Ho)可被活細胞及凋亡細胞吸收，水解后二乙基熒光素在紫外光下發(fā)綠熒光，Ho發(fā)藍熒光，經(jīng)流式細胞儀分析，可將PI和Ho染色分開，從而可以區(qū)分凋亡細胞和壞死細胞。2、生物化學檢測方法細胞凋亡時染色質(zhì)濃縮，DNA在核小體之間的連接處被核酸內(nèi)切酶切斷，形成相差180~200bp長度左右的DNA梯度片段，經(jīng)瓊脂糖電泳，再用溴化乙啶染色后，在紫外光下可以觀察到典型DNA梯度片段。也可先以3H-TdR在細胞培養(yǎng)時摻入標記DNA，再將細胞處理，用離心法將大分子DNA和小分子DNA分開，分別測定其放射活性，計算凋亡細胞百分率。

3、免疫學檢測方法有時凋亡細胞數(shù)較少，用DNA梯度分析法難以檢測，必須用更靈敏的方法。酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)：是將抗組蛋白抗體吸附于酶標測定板，再加入待測細胞裂解物的上清液，使核小體與抗組蛋白抗體結合，洗去未結合的各種分子，最后加入酶交聯(lián)標記的抗DNA抗體——過氧化物酶，此抗體與核小體上DNA結合，再加入過氧化物酶的底物如二氨基聯(lián)苯，過氧化物酶可催化其脫氫氧化而顯棕色，在酶標分析儀上測定OD405值，與對照相比可定量分析凋亡細胞。ELISA的優(yōu)點：(1)靈敏度高、需要的細胞數(shù)少、最低可檢測到50個細胞凋亡，且可同時對多份樣品進行檢測。(2)抗體無種屬特異性，可測定不同種屬的細胞凋亡。(3)測定方法簡便，不需要預先標記細胞。細胞凋亡的檢測方法還有許多，基本原理主要有以下幾方面：（1）形態(tài)學改變；（2）細胞通透性改變；（3）DNA梯度降解分析；（4）細胞凋亡相關的膜表面分子的檢測。三、細胞凋亡與免疫

免疫系統(tǒng)中的細胞和分子具有高度多樣性，以應付自然界千差萬別的抗原物質(zhì)，發(fā)揮免疫效應。這些免疫細胞和分子能精確的識別和區(qū)分外來物和自身物質(zhì)，從而清除外來抗原物，維持自身的穩(wěn)定。機體對外來抗原的選擇識別能力來源于免疫系統(tǒng)分化發(fā)育過程中對淋巴細胞的選擇和刪除。通過基因重排產(chǎn)生各種T細胞和B細胞克隆，而通過細胞凋亡消除對自身有反應的淋巴細胞克隆，從而形成對自身的免疫耐受，如果此過程出錯，則可能引起對自身抗原的免疫應答或?qū)ν鈦砜乖瓱o應答。1、細胞凋亡與淋巴細胞發(fā)育及克隆選擇

T細胞來源于骨髓造血干細胞，造血干細胞在骨髓中分化為原T細胞，再發(fā)育成前T細胞。前T細胞為雙陰性細胞(CD4-CD8-)，CD3也為陰性。前T細胞進入胸腺后，在胸腺微環(huán)境作用下，發(fā)育成雙陽性細胞(CD4+CD8+)，同時細胞內(nèi)TCR基因發(fā)生重排，形成各種TCR并表達于CD4+和CD8+T細胞表面。（1）T細胞的發(fā)育和克隆選擇如果這些重排的TCR不能與MHC匹配，則不被選擇，并發(fā)生細胞凋亡，這個過程稱為陽性選擇，胸腺中陽性選擇使T細胞獲得MHC限制性識別能力，從而刪除了不受MHC限制的T細胞。T細胞與胸腺皮質(zhì)上皮細胞表達的MHC-Ⅰ或Ⅱ類分子結合則被