何為增效減毒

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發(fā)酵對(duì)中藥減毒增效的實(shí)用性

發(fā)酵對(duì)中藥減毒增效的實(shí)用性1發(fā)酵在毒性動(dòng)物類(lèi)中藥中的應(yīng)用事實(shí)上，與植物類(lèi)中藥相比，發(fā)酵應(yīng)用于毒性動(dòng)物類(lèi)中藥的研究報(bào)道很少。斑蝥主要含斑蝥素、脂肪等成分，臨床用于破血消?L，功毒蝕瘡，引赤發(fā)泡。斑蝥素對(duì)多種測(cè)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤有確定抑制作用，尤其當(dāng)腹水型腫瘤接種的瘤細(xì)胞數(shù)較少時(shí)，可見(jiàn)小鼠生存期延長(zhǎng)。其作用機(jī)制可能是抑制蛋白質(zhì)與核酸的合成。臨床上對(duì)皮膚、粘膜有猛烈的刺激性，能引起充血，起泡，口服毒性很大，米炒能降低其毒性及矯正其氣味。李曉飛等[29]從鋸角豆芫菁EpicautagorhamiMarseul幼蟲(chóng)蟲(chóng)體身上分開(kāi)得到的白色真菌，經(jīng)鑒定為球孢白僵菌Beauveriabassian，球孢白僵菌可以有效地降解斑蝥素，降解率達(dá)90.45%，可以利用這一研究來(lái)安好合理地應(yīng)用斑蝥素，并可以深入研究斑蝥素的生物降解產(chǎn)物的藥物活性。葉敏等[30]往桔梗懸浮培養(yǎng)體系中參與斑蝥素培養(yǎng)6d，培養(yǎng)液分開(kāi)純化得到混合存在的兩個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，鑒定為一對(duì)差向異構(gòu)體1β-羥基斑蝥素和1α-羥基斑蝥素，且均為未見(jiàn)報(bào)道的新化合物。水蛭素（hirudin）因最早從水蛭中分開(kāi)得到而得名。自然水蛭素由65個(gè)氨基酸殘基組成，相對(duì)分子質(zhì)量7000。水蛭素能同凝血酶的催化中心及纖維蛋白原結(jié)合中心發(fā)生不成逆的結(jié)合，使凝血酶失活，為目前察覺(jué)的最強(qiáng)有力的凝血酶抑制劑。研究說(shuō)明，水蛭素在腫瘤治療中也能發(fā)揮作用，它能防止腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，已證明有效的腫瘤有纖維肉瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、黑素瘤、淋巴瘤和白血病細(xì)胞等。水蛭素合作化學(xué)治療和放射治療，可促進(jìn)腫瘤中的血流從而鞏固療效。然而，水蛭素能阻攔凝血酶的作用，引起內(nèi)臟廣泛出血。有腎毒性，可導(dǎo)致腎臟損害。

莫煒等[31]構(gòu)建了重組雙功能水蛭素（r-RGD-Hirudin）cDNA的表達(dá)質(zhì)粒RGD-Hirudin.pPIC9K，轉(zhuǎn)化入畢赤酵母中，經(jīng)篩選得到高表達(dá)的陽(yáng)性克隆。種子菌經(jīng)過(guò)3d發(fā)酵培養(yǎng)，其培養(yǎng)液上清液經(jīng)超濾濃縮、凝膠過(guò)濾層析和離子交換層析后，得到純度大于97%、比活性為12000ATU/mg的r-RGD-Hirudin，回收率大于60%，發(fā)酵產(chǎn)率為1g/L。純化后r-RGD-Hirudin經(jīng)過(guò)SDS，抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、質(zhì)譜分析及等電聚焦分析等方法鑒定，證明該表達(dá)產(chǎn)物為水蛭素的衍生物，具有抗凝血酶和抗血小板聚集雙重功能。周祥山等[32]研究重組畢赤酵母高密度發(fā)酵表達(dá)水蛭素過(guò)程中產(chǎn)生了4種具有較高比活的水蛭素異構(gòu)體，畢赤酵母發(fā)酵過(guò)程中水蛭素存在降解，Hir65降解產(chǎn)生了Hir62和Hir63。劉高強(qiáng)等[33]研究了幾種藥用昆蟲(chóng)對(duì)靈芝深層培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞生長(zhǎng)和三萜產(chǎn)物形成的影響。結(jié)果說(shuō)明，蜣螂蟲(chóng)粉的添加，能顯著促進(jìn)靈芝胞外三萜的形成（P<0.01）。劉高強(qiáng)等[34]還研究了幾種昆蟲(chóng)的水提物和醇提物對(duì)靈芝深層發(fā)酵生產(chǎn)菌體和多糖的影響。結(jié)果表明，松毛蟲(chóng)水提物能促進(jìn)靈芝菌體的生長(zhǎng)，其中斑蝥提取物對(duì)靈芝菌體的生長(zhǎng)表現(xiàn)出明顯的抑制作用。蜣螂水提物能顯著提高靈芝胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量，地鱉蟲(chóng)醇提物以及松毛蟲(chóng)醇提物對(duì)胞內(nèi)多糖的生產(chǎn)也具有促進(jìn)作用。此外，蜣螂醇提物對(duì)胞外多糖的生產(chǎn)具有促進(jìn)作用。

劉高強(qiáng)等[35]采用體外高通量篩選技術(shù)檢測(cè)了補(bǔ)加藥用昆蟲(chóng)蜣螂前后靈芝發(fā)酵產(chǎn)物的體外抗腫瘤活性。在補(bǔ)加蜣螂發(fā)酵后，胞外三萜樣品對(duì)BEL7402細(xì)胞的抑制作用得到了增強(qiáng)，提示lucidoneC可能增強(qiáng)了補(bǔ)加蜣螂后靈芝胞外總?cè)茖?duì)BEL7402細(xì)胞的抑制作用。以上都是研究昆蟲(chóng)對(duì)靈芝發(fā)酵后的影響，中藥很多毒類(lèi)藥材都有毒性，如斑蝥、青娘子、紅娘子、全蝎和蜈蚣等，這方面的發(fā)酵解毒研究值得期待。

2發(fā)酵在毒性礦物類(lèi)中藥中的應(yīng)用要不是通過(guò)商業(yè)產(chǎn)品的生物浸出而回收金屬的技術(shù)，發(fā)酵應(yīng)用于毒性礦物類(lèi)中藥幾乎不可能[36]。雄黃是常用的礦物藥，雄黃和含雄黃中成藥有多種療效，在中藥中具有舉足輕重的地位。但是雄黃常以未溶解狀態(tài)的粗糙礦物原粉入藥，造成用量大、毒性嚴(yán)重超標(biāo)，常有使用雄黃造成不良反應(yīng)者。

因而雄黃和含雄黃中成藥在國(guó)際市場(chǎng)上受到了限制。杜文靜利用分離鑒定的一株高活性的氧化亞鐵硫桿菌（Acidithiobacillusferrooxidans，簡(jiǎn)稱(chēng)At.f）對(duì)礦物藥雄黃進(jìn)行浸出處理，比較普通氧化亞鐵硫桿菌和經(jīng)耐砷馴化后的氧化亞鐵硫桿菌對(duì)雄黃的浸出效果，測(cè)定雄黃微生物浸出液的急性毒性，并初步研究雄黃微生物浸出液的體外、體內(nèi)抑菌作用。謝親建研究采用微生物對(duì)雄黃進(jìn)行生物浸出處理以提高其溶解度和生物利用度；

以白血病K562和K562ADM細(xì)胞為模型，研究了雄黃的浸出液對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用；

采用毛細(xì)管電泳分析法對(duì)雄黃生物浸出液進(jìn)行分離分析以期確定它的藥效成分；

對(duì)雄黃生物浸出液的急性毒性和藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行考察。李紅玉研究的雄黃微生物浸出液在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用已經(jīng)申請(qǐng)專(zhuān)利。朱砂是常用的鎮(zhèn)靜安神藥，在中藥中具有舉足輕重的地位。但是朱砂常以未溶解狀態(tài)的粗糙礦物原粉入藥，造成用量大、毒性嚴(yán)重超標(biāo)，常有使用朱砂造成不良反應(yīng)者。因而朱砂和含朱砂中成藥在國(guó)際市場(chǎng)上受到了限制。蘇麗春[35]利用分離鑒定的一株高活性的At.f對(duì)礦物藥朱砂進(jìn)行浸出處理，研究其搖瓶浸出的最佳實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)朱砂浸出液的鎮(zhèn)靜安神和抗驚厥藥效實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了初步的探討，并初步檢驗(yàn)了朱砂浸出液的抑菌效果。

3展望中藥經(jīng)過(guò)發(fā)酵有很多優(yōu)點(diǎn)，目前對(duì)優(yōu)良菌種的篩選、優(yōu)化發(fā)酵終點(diǎn)的判斷，對(duì)已有活性成分和新成分的提取分離等研究較多，而對(duì)發(fā)酵減毒增效機(jī)理研究較少，建立發(fā)酵制品推廣應(yīng)用大規(guī)模生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚屬空白。天然培養(yǎng)基中添加適量中藥成分的混合培養(yǎng)基研究有望成為未來(lái)的研究熱點(diǎn)。我們認(rèn)為對(duì)發(fā)酵中藥的研究可以從以下幾個(gè)方面開(kāi)展工作：1）加強(qiáng)功能性微生物的菌種選育工作；

2）毒性中藥發(fā)酵減毒增效分子機(jī)理研究；

3）中藥發(fā)酵技術(shù)及設(shè)備的研究；

4）復(fù)合微生物發(fā)酵技術(shù)的研究；

5）研究在發(fā)酵中藥過(guò)程中如何實(shí)現(xiàn)中醫(yī)理論的指導(dǎo)并采納現(xiàn)代中醫(yī)藥的新技術(shù)、新成果。對(duì)中藥的成分進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，通過(guò)藥理篩選模型來(lái)確定轉(zhuǎn)化前后藥效的變化，需要中藥學(xué)、微生物學(xué)、分析化學(xué)、藥理學(xué)等多學(xué)科參與。隨著多學(xué)科的交叉發(fā)展，微生物發(fā)酵在有毒中藥的研究中必將取得長(zhǎng)足的發(fā)展，微生物發(fā)酵中藥也必將表現(xiàn)出強(qiáng)大的生命力。應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)大規(guī)模提取中藥的有效成分、將發(fā)酵技