cn.6a利用酒糟發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻和轉(zhuǎn)化四甲基吡嗪的方法

(19)中民國家知識(shí)(21)(22)(71)214122(72)發(fā)明人(74)專利機(jī)構(gòu)無錫市大為專利商人時(shí)C12P7/26(2006.01)C12P17/12C12R1/125

(10)申請(qǐng)公布號(hào) (43)C12RC12R1/1015附圖2(57)酒糟中補(bǔ)充適量葡萄糖0～100g/kg，加入枯草芽孢桿菌（OM208157）或地衣芽孢桿菌A（CGMCC396139623963養(yǎng)物37℃發(fā)1～3天，能夠大量產(chǎn)生生物香AA權(quán)利要求1/10.1-1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)酸度0～50～100g/kg酒糟，加入菌株培養(yǎng)物發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻；在發(fā)酵產(chǎn)物中另外補(bǔ)充銨鹽10～30g/kg酒糟，所述的菌株培養(yǎng)物為枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）CCTCCNOM208157Bx利用酒糟發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻和轉(zhuǎn)化生產(chǎn)四甲基吡嗪的方 其重要的作用。目前全球各類食品添加劑的總消費(fèi)量已接近1000萬噸品種有25000多種而香精和香料則是其中用量最大種類最多的一類食品添加劑。目前在人們對(duì)食品添加劑營養(yǎng)健康安全性的強(qiáng)烈要求下采用工業(yè)生物技術(shù)開發(fā)綠色安全的香精香料等食品和飼料添加劑已成為該行業(yè)實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展的重要途徑對(duì)于催生我國高安全健康天然的香精香料產(chǎn)業(yè)帶動(dòng)我國食品行業(yè)整體水平的發(fā)展具有極其重要的意義。[0003] 乙偶姻即3-羥基-2-丁酮天然存在于乳品黃油干酪酒類玉米葡萄蘋果草莓可可等各類食品中是一種應(yīng)用廣泛的食用香料其具有明顯的奶酪香脂香特征主要用于奶油乳品酸奶等香料的生產(chǎn)。GB2760-86規(guī)定其為容許食用的香料美國食品和萃取FEMA安全號(hào)為2008。此外乙偶姻作為一種平臺(tái)化合物廣泛應(yīng)用于食品制藥化工IT等行業(yè)乙偶姻的生產(chǎn)法主要分為兩類化學(xué)合成法與生物合成法?；瘜W(xué)法生產(chǎn)乙偶姻存在著產(chǎn)品收率低高能耗高污染且產(chǎn)品質(zhì)量難以達(dá)到食用香料的要求生物合成法生產(chǎn)的乙偶姻有效地避免了上述問題產(chǎn)品綠色天然反應(yīng)條件溫和污染少能耗低是一種十分具有發(fā)展前景的合成方法目前有應(yīng)用微生物采用合成培養(yǎng)基液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻的方法但是存在原料成本高發(fā)酵廢液處理等問題至今還沒有采用酒糟等作為原料培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻的。 [0007]（1）本發(fā)明要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供了一種以酒糟為原料生產(chǎn)生物香料乙偶姻和四[0008]（2）本發(fā)明的技術(shù)方案乙偶姻的發(fā)酵生產(chǎn)：培養(yǎng)基的新鮮酒0.1-1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為0～5充葡萄糖0～100g/kg酒糟。M01芽孢（Bacilluslicheniformis）CGMCC3961，CGMCC3962，CGMCC3963中任一株[0010]所述枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）CCTCCNOM208157已在申請(qǐng)?zhí)?00810235366.1申請(qǐng)日2008年12月8日，發(fā)明名稱“一株高產(chǎn)四甲基吡嗪的枯草芽孢桿[0011]所述地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）CGMCC3961，CGMCC3963已在申請(qǐng)?zhí)?01010238685.5申請(qǐng)日2010年7月28發(fā)明名稱“一種生產(chǎn)四甲基吡11～4（w/v）的比例混合后，蒸1-5h冷卻后加10～50gBx后，80～100℃蒸煮30min。 四甲基吡嗪的發(fā)酵生產(chǎn)：培養(yǎng)基的新鮮酒0.1-1mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為0～5充葡萄糖0～100g/kg酒糟。[0016]菌株培養(yǎng)物：枯草芽孢桿菌（CCTCCNOM208157）和地衣芽孢桿菌（91929316～48h11～4（w/v）的比例混合后，蒸1-5h冷卻后加10～50gBx固體培養(yǎng)基制作方式為原料樣品經(jīng)后與水按1︰0.5～2（w/v）的比例混合后，80～100℃蒸煮30min。培養(yǎng)基2～10（w/w接種接種后37培養(yǎng)1～3d后；補(bǔ)加銨鹽10～30g/kg酒化生產(chǎn)條件為30～90℃1～3d。[0020][0021]固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)11～2（w/v）加入水或乙醇，再60℃水浴中超聲保1h，50～80℃二次減壓蒸餾除去水分，得到液態(tài)乙偶姻產(chǎn)物。[0022]2（w/v[0023]（3）本發(fā)明的有益效果（1可通過是否添加銨鹽來有選擇的控制生產(chǎn)乙偶姻或四甲基吡嗪，在生物香料的生（2（3（4）3.02g/kgM20815 2.CGMCC3961 3. 4. M239613962396348h Bx 式為：原料樣品經(jīng)后，與水按1︰0.5～2（w/v）的比例混合后，80～100℃蒸煮 10%(v/w) 實(shí)施例2白酒糟發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)四甲基吡嗪 菌株培養(yǎng)物：枯草芽孢桿菌（CCTCCNOM208157）和地衣芽孢桿菌116～48h Bx 式為：原料樣品經(jīng)后，與水按1︰0.5～2（w/v）的比例混合后，80～100℃蒸煮551～3d3.02g/kg[0038]31kg固態(tài)發(fā)酵1:1～2（w/v）加入蒸餾60℃水浴中超聲1h浸出8000rpm10min所得上清液經(jīng)70℃減壓蒸餾除去不揮發(fā)收集餾分經(jīng)80℃[00