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文檔簡(jiǎn)介

新診斷技術(shù)及其在NTP中的應(yīng)用江蘇省結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室NTP中現(xiàn)行實(shí)驗(yàn)室技術(shù)涂片:萋尼染色顯微鏡檢培養(yǎng):固體培養(yǎng)基:簡(jiǎn)單法、離心法藥敏:固體培養(yǎng)基:絕對(duì)濃度法、比例法菌種鑒定:鑒別培養(yǎng)基+生化試驗(yàn)傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)不能適應(yīng)不斷深入的結(jié)核病防治工作的需要實(shí)驗(yàn)室新診斷技術(shù)總覽細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法發(fā)光二極管熒光顯微鏡(LED)液體培養(yǎng)分子生物學(xué)檢測(cè)方法GenexpertHAINGenechip免疫學(xué)檢測(cè)方法ELISOPT&TSPOT和Quantiferon血清學(xué)診斷方法BACTECTB460原理:標(biāo)本經(jīng)前處理接種至含有14C-棕櫚酸的12B培養(yǎng)基,37C培養(yǎng)。分枝桿菌分解14C-棕櫚酸,產(chǎn)生14CO2,BACTECTB460儀自動(dòng)檢測(cè),14CO2含量,并換算成生長(zhǎng)指數(shù)(GI)。優(yōu)點(diǎn):快速:將分離培養(yǎng)的陽性檢出時(shí)間由常規(guī)培養(yǎng)所需的2-8周縮短至3-14天,將藥敏試驗(yàn)的報(bào)告時(shí)間由常規(guī)方法的4周縮短至1周。操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,可進(jìn)一步做藥敏試驗(yàn)、菌種初步鑒定。缺點(diǎn):放射性同位素污染。儀器與試劑價(jià)格昂貴。未實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化污染率高原理:是BACTECTB460的換代產(chǎn)品。標(biāo)本經(jīng)前處理后接種到系統(tǒng)配套的液體培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基中包被有對(duì)氧濃度敏感的熒光物質(zhì),當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)代謝消耗培養(yǎng)基中的氧時(shí),氧濃度降低,熒光被激發(fā),系統(tǒng)可以連續(xù)檢測(cè)熒光水平,自動(dòng)報(bào)告結(jié)果。優(yōu)點(diǎn):系統(tǒng)進(jìn)一步優(yōu)化,操作更簡(jiǎn)便、自動(dòng)化更強(qiáng)。解決了BACTECTB460的同位素污染問題。24小時(shí)連續(xù)檢測(cè),有利于早期報(bào)告陽性結(jié)果。缺點(diǎn):儀器與試劑價(jià)格更昂貴。未能解決高污染率的問題BACTECMGIT960

分枝桿菌生長(zhǎng)指示管液體培養(yǎng)1CrucianiM,etal.JCM2004;42:2321-23252

Meanof14studiesinMGIT960=10.7%(2.0-30.0)[]=acceptablerangeLED顯微鏡發(fā)光二級(jí)管(LED)技術(shù)提供價(jià)廉、穩(wěn)定的光源壽命150,000h反復(fù)開關(guān)不影響壽命不釋放有毒氣體不需要暗室操作人員工作負(fù)荷減輕快速藥敏-商業(yè)化線性探針檢測(cè)(LPAs)

GenoType?MTBDRplus,HAIN檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群以及利福平、異煙肼耐藥相關(guān)的突變檢測(cè)XDR的試劑盒也已經(jīng)發(fā)布INNO-LipaRifTB檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群以及于利福平耐藥相關(guān)的突變大多數(shù)利福平耐藥的菌株同時(shí)也耐異煙肼WHO鼓勵(lì)使用的工具可使用涂陽痰標(biāo)本和培養(yǎng)物進(jìn)行操作快速、簡(jiǎn)便易用,僅需基本PCR技術(shù)然而,價(jià)格比較昂貴,且不能檢測(cè)造成耐藥突變的熱點(diǎn)區(qū)域外的突變11rpoB

野生型探針:WT1-WT8rpoB

突變探針:MUT1-3:D516V,H526Y,H526D,S531L→野生型缺失→野生型突變MTBDRplus

rpoB511513516518522526531533rpoBWT2rpoBWT4rpoBWT6rpoBWT8rpoBWT7rpoBMUT1(D516V)rpoBMUT3(S531L)rpoBMUT2A(H526Y)rpoBMUT2B(H526D)514515rpoBWT1rpoBWT3rpoBWT5509508505katG

基因突變MTBDRplus

katGMTBDRplus

inhAinhA

基因突變南非的經(jīng)驗(yàn):GenotypeMTBDRplusassay:直接從涂片陽性標(biāo)本中檢測(cè)rpob基因突變(耐利福平),katG基因(高濃度異煙肼耐藥),inhA基因(低濃度異煙肼耐藥)靈敏度、特異度,陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值耐利福平98.9,99.4,97.9,和99.7耐異煙肼94.2,99.7,99.1,和97.9耐MDR-TB98.8,100,100,和99.7BarnardM,etal.AmJRespirCritCareMed2008;177:787-92結(jié)核耐藥檢測(cè)基因芯片激光共焦掃描儀軟件判讀結(jié)核耐藥檢測(cè)芯片獲北京市自主創(chuàng)新產(chǎn)品證書樣品制備儀雜交儀通

量:兩個(gè)一線抗結(jié)核藥速

度:

6小時(shí)(比傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)法快50-100倍)靈敏度:103CFU/反應(yīng)特異性:對(duì)照設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn);自動(dòng)判讀基于rpoB/katG/inhA的基因突變,快速檢測(cè)分離株或者痰樣本中結(jié)核桿菌多藥耐藥(利福平、異煙肼)。InternationalJournalofTuberculosisandLungDisease,13:914-920,2009(IF=2.3)18獲國(guó)家醫(yī)療器械證書和歐盟CE認(rèn)證XpertMTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)利福平耐藥直接標(biāo)本檢測(cè)100分鐘可獲得結(jié)果報(bào)告結(jié)果時(shí)間:1h45minGeneXpertDNA分子與PCR試劑混合樣本自動(dòng)過濾和清洗超聲裂解捕獲的生物體,釋放DNA半嵌套實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增

&檢測(cè)集成反應(yīng)管456濃縮細(xì)菌去除抑制劑12標(biāo)本液化和作用15分鐘后轉(zhuǎn)移2ml3結(jié)束手工工作7結(jié)果可打印XpertMTB/RIF單中心評(píng)估研究(初步結(jié)果)不同研究設(shè)計(jì)和研究人群,肺結(jié)核和肺外結(jié)核標(biāo)本檢測(cè)結(jié)核匯總的未經(jīng)校正的敏感性

92%匯總的未經(jīng)校正的特異性

98%檢測(cè)利福平耐藥匯總的未經(jīng)校正的敏感性

98%匯總的未經(jīng)校正的特異性

99%操作方面廢棄物管理–如痰標(biāo)本容器儲(chǔ)存和供應(yīng)–反應(yīng)盒龐大,2-28°C,有效期12個(gè)月

電力供應(yīng)–UPS(400VA)或電池組

培訓(xùn)–需求不高(使用計(jì)算機(jī)、預(yù)防污染)生物安全–與涂片鏡檢相同每年校正–模塊更換安全–防盜(計(jì)算機(jī))WHO對(duì)XpertMTB/RIF的建議摘要:高度推薦用于懷疑MDR-TB以及合并HIV感染的結(jié)核病病人的初診診斷對(duì)于MDR-TB、HIV不嚴(yán)重的地區(qū),可以在涂片之后考慮使用XpertMTB/RIF,特別是用于診斷涂陰病人(取決于費(fèi)用)肺外標(biāo)本的有關(guān)證據(jù)尚有限增加檢測(cè)次數(shù)可能增加敏感性,但需考慮費(fèi)用增加適用于兒童不能替代傳統(tǒng)涂片、培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)步驟

1:特異抗原激發(fā)淋巴細(xì)胞IFN-

釋放陰性對(duì)照ESAT-6或CFP-10孵育孵育顯影步驟

2:用ELISA檢測(cè)

IFN-

YYYYYYYYYYYY洗滌YYYYYY

洗滌YYYQuantiFERONTBGold?實(shí)驗(yàn)T-SPOTTB(ELISPOT)技術(shù)

單核細(xì)胞分離TB抗原刺激,IFN-

釋放一抗捕獲IFN-

與標(biāo)記的二抗結(jié)合

酶作用標(biāo)記物-顯色每一斑點(diǎn)代表釋放IFN-的一個(gè)細(xì)胞YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYIFN-抗原國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議液體培養(yǎng)用于:

結(jié)核病可疑癥狀者檢查,可以作為結(jié)核?。退帲┑脑\斷依據(jù)和結(jié)核病患者治療效果判斷,液體培養(yǎng)可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)培養(yǎng)推薦理由:液體培養(yǎng)在已經(jīng)在我國(guó)注冊(cè);國(guó)內(nèi)外研究顯示其敏感性和TAT優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng);數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性,符合成本效果;推薦使用層級(jí):

區(qū)縣、地市和省級(jí)(醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防機(jī)構(gòu))國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議GenXpert即將可以用于:

結(jié)核病可疑癥狀者檢查,可以作為結(jié)核病的輔助診斷方法和結(jié)核病患者治療效果判斷,它有望代替?zhèn)鹘y(tǒng)的培養(yǎng)和利福平的藥敏試驗(yàn)(可疑耐藥結(jié)核病患者)推薦理由:即將在我國(guó)獲得注冊(cè)證書;國(guó)內(nèi)外研究顯示其敏感性和特異性,陽性結(jié)果報(bào)告時(shí)間優(yōu)于傳統(tǒng)方法;WHO在全球推薦數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性,符合成本效果;可能使用層級(jí):

區(qū)縣(?)、地市和省級(jí)(醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防機(jī)構(gòu))國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議LPA可以用于:

可疑耐藥結(jié)核病患者查,它有望代替利福平和異煙肼的傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)推薦理由:在我國(guó)獲得注冊(cè)證書;國(guó)內(nèi)外研究顯示其敏感性和特異性(TAT)較好;WHO在全球推薦數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性,符合成本效果;可能使用層級(jí):

地市和省級(jí)(醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防機(jī)構(gòu))國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議基因芯片可以用于:

可疑耐藥結(jié)核病患者查,它有望代替利福平和異煙肼的傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)推薦理由:在我國(guó)獲得注冊(cè)證書;國(guó)內(nèi)研究顯示其敏感性和特異性和(TAT)較好;民族品牌數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性,符合成本效果;可能使用層級(jí):

地市和省級(jí)(醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防機(jī)構(gòu))國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室推薦建議γ干擾素釋放試驗(yàn)可以用于:

結(jié)核菌潛伏感染篩查,兒童和老年人以及免疫力低下者結(jié)核病的輔助診斷(參考)推薦理由:在我國(guó)獲得注冊(cè)證書,國(guó)家對(duì)一些特殊診斷試劑的規(guī)定;國(guó)內(nèi)外研究顯示其敏感性和(特異性)較好;數(shù)據(jù)顯示在我國(guó)具有可行性可能使用層級(jí):

縣區(qū)、地市和省級(jí)(醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾

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