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文檔簡介

第五章生物反應(yīng)器

目錄第一節(jié)生物反應(yīng)器的基本知識第二節(jié)培養(yǎng)基預(yù)處理設(shè)備

第三節(jié)菌種制備設(shè)備全國高等學(xué)校高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十一五”規(guī)劃教材《生物制藥設(shè)備》第四節(jié)發(fā)酵設(shè)備第五節(jié)動植物細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備學(xué)習(xí)目標(biāo)

學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)和工作原理,培養(yǎng)生物反應(yīng)器操作技能,為發(fā)酵操作、細(xì)胞培養(yǎng)操作打下知識和技能基礎(chǔ)。

知識要求掌握機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐、氣升式發(fā)酵罐、鼓泡塔式發(fā)酵罐、膜反應(yīng)器的結(jié)構(gòu);熟悉機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐、氣升式發(fā)酵罐、常用動植物細(xì)胞培養(yǎng)器的工作原理;了解滅菌、無菌操作基本原理,了解生物反應(yīng)器參數(shù)檢測與自動控制原理;了解參數(shù)檢測儀器的工作原理。

能力要求熟練應(yīng)用機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐、氣升式發(fā)酵罐的基本操作技術(shù);學(xué)會培養(yǎng)基滅菌與無菌操作。生物反應(yīng)在狹義上是指活細(xì)胞中的各種生物化學(xué)反應(yīng)。廣義的生物反應(yīng)是指生物體的新陳代謝過程。一、生物反應(yīng)過程(一)概述第一節(jié)生物反應(yīng)基本知識1.生物反應(yīng)2.影響生物反應(yīng)的因素環(huán)境溫度、酸堿度、營養(yǎng)物質(zhì)濃度、氧氣濃度、二氧化碳濃度、機(jī)械尺寸、流體湍流程度、細(xì)胞的生長濃度、產(chǎn)物的生成速度等3.生物藥物的產(chǎn)生細(xì)胞在新陳代謝過程中不斷地同化物質(zhì)和能量,并異化自身物質(zhì)。細(xì)胞的分解產(chǎn)物,部分能用于人類疾病的診斷、預(yù)防和治療,稱之為生物藥物。

另外,細(xì)胞在生命活動過程中對環(huán)境物質(zhì)進(jìn)行了轉(zhuǎn)化,部分轉(zhuǎn)化產(chǎn)物也是生物藥物;還有用酶工程技術(shù)轉(zhuǎn)化后的部分產(chǎn)物也是生物藥物。(二)分批培養(yǎng)中的細(xì)胞生長模式將培養(yǎng)基一次性投入反應(yīng)器中,接入細(xì)胞并維持細(xì)胞生長的過程叫分批培養(yǎng)。在分批培養(yǎng)過程中,隨著時間的延長,營養(yǎng)物逐漸被消耗,新的細(xì)胞不斷增加,產(chǎn)物的數(shù)量在逐漸累積,細(xì)胞生長過程處于動態(tài)變化的環(huán)境中。減速生長期指數(shù)生長期分批培養(yǎng)細(xì)胞生長的六個階段停滯期加速生長期平衡生長期負(fù)生長期

接種后,細(xì)胞需要適應(yīng)環(huán)境后才開始加速生長,隨后增長速度不斷加快,以指數(shù)的數(shù)量關(guān)系擴(kuò)大繁殖。但隨著時間的延長,容器內(nèi)新生細(xì)胞增多,細(xì)胞的增長速度逐漸降低。

并且部分細(xì)胞死亡,擴(kuò)大繁殖速度減小,死亡速度增大,死亡與生長速度達(dá)到平衡。隨后死亡速度不斷加快,打破平衡后成為負(fù)增長,直至培養(yǎng)過程結(jié)束。(三)生物反應(yīng)過程的氧氣供給1.氧氣的傳遞過程空氣被通入反應(yīng)液后即分散成大量氣泡,氧分子從氣泡內(nèi)穿過氣液界面進(jìn)入到反應(yīng)液內(nèi)成為溶解氧。(1)氧的氣液傳遞過程溶解氧穿過液固界面進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的過程。(2)氧的液固傳遞過程2.提高氧氣傳遞速度的途徑雙膜理論

氣液界面上的傳質(zhì)阻力主要集中在氣膜和液膜的滯流底層,滯流底層越厚阻力越大,液體的黏度越大,滯流底層越厚,傳質(zhì)阻力也越大具體措施:(1)增強(qiáng)攪拌

機(jī)械攪拌可以增加反應(yīng)液的湍流程度,促使分散的氣泡變得更小、分布更均勻,減少液膜厚度、降低傳質(zhì)阻力;增強(qiáng)攪拌還可增加氣液接觸面積,延長氣泡在反應(yīng)液中的停留時間。機(jī)械攪拌產(chǎn)生的剪切力會傷害細(xì)胞,可通過改變?nèi)~片減小剪切力。(2)提高通氣速率

通氣量越大,反應(yīng)液中的氣泡就越多,溶解氧的濃度就越高。通氣能起到一定的攪拌效果。

通氣量過大,則容易產(chǎn)生大量的泡沫,造成溢罐,產(chǎn)生氣泡“過載”現(xiàn)象。(3)控制反應(yīng)液體積在同樣攪拌強(qiáng)度下,反應(yīng)液體積增大,會降低攪拌的效果。(4)改善反應(yīng)液的性質(zhì)

反應(yīng)液的黏度影響液膜的表面張力,進(jìn)而影響液體中氣泡合并的難易度。液體中氣泡液膜的表面張力加劇氣泡的合并傾向。隨著生物反應(yīng)的進(jìn)行,反應(yīng)液中細(xì)胞分泌物增加,黏度變大,小氣泡合并成大氣泡,出現(xiàn)起沫現(xiàn)象。加入消泡劑,可以降低液膜的表面張力,阻止氣泡的合并。

二、生物反應(yīng)器(一)生物反應(yīng)器的分類進(jìn)行生物化學(xué)反應(yīng)的空間統(tǒng)稱為生物反應(yīng)器1.生物反應(yīng)器2.分類(1)按反應(yīng)器內(nèi)有機(jī)體種類微生物反應(yīng)器植物細(xì)胞反應(yīng)器動物細(xì)胞反應(yīng)器酶反應(yīng)器生物反應(yīng)器(2)按結(jié)構(gòu)特征罐式反應(yīng)器管式反應(yīng)器塔式反應(yīng)器膜式反應(yīng)器生物反應(yīng)器生物反應(yīng)器在生物制藥過程中的作用(二)生物反應(yīng)器的操作類型1.簡單分批培養(yǎng)

培養(yǎng)液一次性全部加入,接種培養(yǎng)一段時間后,將培養(yǎng)液一次性全部放出2.補(bǔ)料分批培養(yǎng)

開始培養(yǎng)時,培養(yǎng)液沒有一次性加足,在培養(yǎng)一定時間后,根據(jù)培養(yǎng)液營養(yǎng)成分的消耗情況將部分營養(yǎng)成分連續(xù)加入反應(yīng)器內(nèi)(稱之為補(bǔ)料),培養(yǎng)結(jié)束后一次性全部放出。3.反復(fù)分批培養(yǎng)

在簡單分批培養(yǎng)即將結(jié)束時,放出大部分的培養(yǎng)液,余下少量作為種子液,補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液后再重新培養(yǎng),如此反復(fù)直至培養(yǎng)不能再延續(xù)時,再將發(fā)酵液全部放出。4.反復(fù)補(bǔ)料分批培養(yǎng)

又稱為半連續(xù)發(fā)酵,指在補(bǔ)料分批培養(yǎng)中進(jìn)行一段時間、反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)液體積達(dá)到最大無法再繼續(xù)補(bǔ)料時,將培養(yǎng)液放出一部分,再繼續(xù)補(bǔ)料,隔一段時間后再放出同樣體積,如此反復(fù)操作,直到最后將培養(yǎng)液一次性全部放出。第二節(jié)培養(yǎng)基預(yù)處理設(shè)備一、培養(yǎng)基滅菌設(shè)備(一)蒸汽滅菌原理蒸汽能深入到液體內(nèi)部,并迅速穿透細(xì)胞壁,使細(xì)胞整體升溫,致使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固失去生物活性,從而終止了細(xì)胞的新陳代謝過程。(二)高壓蒸汽滅菌鍋1.高壓蒸汽滅菌鍋的結(jié)構(gòu)

高壓蒸汽滅菌鍋由內(nèi)鍋、外鍋、門蓋、壓力表、溫度計、排氣閥、安全閥、電熱管、蒸汽發(fā)生器等部件構(gòu)成。

2.高壓蒸汽滅菌鍋的操作與維護(hù)(1)使用前應(yīng)清洗干凈,進(jìn)氣閥及排氣閥有效,加注水。(2)裝入滅菌物品:間隔合適,扣上門蓋,旋緊密封。(3)預(yù)熱及排氣:加熱升溫,排除冷空氣,當(dāng)排氣閥有蒸汽排出時,關(guān)閉排氣閥。(4)升壓保溫:待蒸汽壓力升至額定值時,調(diào)節(jié)熱源,或者微開排氣閥,使鍋內(nèi)蒸汽壓力恒定在額定值。維持規(guī)定時間后,停止加熱。(5)取出滅菌物品:緩慢排氣,待其壓力下降至零時,方可打開取物。(三)培養(yǎng)基連續(xù)滅菌設(shè)備1.加熱器(1)連消塔的結(jié)構(gòu)

套管式連消塔,全塔高2~3m,由蒸汽導(dǎo)管和外套管組成。蒸汽導(dǎo)管上開設(shè)有很多小孔,小孔的分布呈下密上疏,蒸汽可從小孔中噴出。小孔的總截面積等于或小于導(dǎo)入管的截面積。(2)噴射器結(jié)構(gòu)蒸汽和培養(yǎng)液在噴射器的吸入室中混合均勻,在喉管和擴(kuò)大段進(jìn)一步混合均勻后排出。(3)維持罐結(jié)構(gòu)

主要由筒體、夾套、進(jìn)料管、出料管、排盡管和測溫口組成.

維持罐設(shè)計安裝有無菌呼吸口,以保證外界微生物不能進(jìn)入維持罐內(nèi)。維持罐的有效體積應(yīng)能滿足維持時間8~25的需要,填充系數(shù)為85%~90%。2.連續(xù)滅菌流程(1)連消塔加熱連續(xù)滅菌流程

待滅菌的培養(yǎng)基由泵送入連消塔的底部,料液在此被蒸汽加熱到滅菌溫度,再由頂部流出,進(jìn)入維持罐,停留一定時間后,再送入噴淋冷卻器,冷卻至常溫。(2)噴射加熱連續(xù)滅菌流程

當(dāng)蒸汽從噴嘴中高速噴出時,與生培養(yǎng)液瞬間混勻并將其加熱到滅菌溫度。混合液進(jìn)入維持段管道中繼續(xù)保溫滅菌,管道越長滅菌時間也越長,可根據(jù)培養(yǎng)基的性質(zhì)和滅菌要求確定管道的長度。滅菌后的培養(yǎng)基經(jīng)過膨脹閥進(jìn)入真空冷卻器瞬間冷卻。滅菌后的培養(yǎng)基經(jīng)過膨脹閥進(jìn)入真空冷卻器瞬間冷卻

噴射加熱連續(xù)滅菌流程是目前常用的培養(yǎng)基滅菌方法,其特點(diǎn)是加熱、冷卻過程極為短暫,所以將溫度升高到140℃而不引起培養(yǎng)液的嚴(yán)重破壞。因維持設(shè)備是管道,如果設(shè)計合理,則返混程度很小,可保證物料的先進(jìn)先出,避免了培養(yǎng)基在滅菌過程中局部過熱或滅菌不充分的現(xiàn)象發(fā)生。(3)薄板連續(xù)滅菌流程

培養(yǎng)液在薄板換熱器中可以同時完成預(yù)熱、加熱滅菌、維持及冷卻過程。二、淀粉糖化設(shè)備糊化糖化單糖糊化階段,淀粉水解轉(zhuǎn)化成糊精;在糖化階段,糊精被淀粉糖化酶轉(zhuǎn)化成單糖或二糖。(一)糊化鍋

糊化鍋用來加熱煮沸淀粉原料使其液化和糊化的設(shè)備。

糊化鍋的關(guān)鍵部件有鍋蓋、鍋體、夾套和攪拌器等。

淀粉類原料從下粉管放入鍋內(nèi)溶液中,蒸汽進(jìn)入夾套釋放熱量成冷凝水排出,鍋內(nèi)產(chǎn)生的水蒸氣沿升氣管上升,部分蒸汽形成冷凝水沿升氣管內(nèi)壁流入環(huán)型槽后由排水管排出,為防止鍋內(nèi)局部過熱,開啟電動機(jī)對溶液進(jìn)行攪拌,促使溶液體系受熱均勻。糊化鍋的工作過程(二)糖化鍋

糖化鍋是糊精水解成單糖或二糖的反應(yīng)容器,其結(jié)構(gòu)與糊化鍋基本相同,單體積更大,約為糊化鍋體積的兩倍。

將糊化后的漿狀料液輸送到糖化鍋中,加水稀釋混合,并加入糖化酶,將溫度保持在一定的范圍內(nèi),經(jīng)一段時間后料漿即可糖化完畢。三、雙酶制糖工藝

淀粉液化酶作用于淀粉α-1,4葡萄糖苷鍵,將長鏈的淀粉水解成短鏈糊精,使淀粉液化,產(chǎn)物以短鏈的糊精為主,含有少量的葡萄糖。糖化酶可作用于α-1,4或α-1,6葡萄糖苷鍵,可將糊精完全水解為葡萄糖或麥芽糖,即淀粉的糖化。

雙酶制糖工序有調(diào)漿、液化、糖化和過濾。生產(chǎn)設(shè)備主要有糊化鍋、糖化噴射器、維持罐、冷卻裝置等。第三節(jié)發(fā)酵罐發(fā)酵罐是微生物大量生長繁殖的空間,是一類重要的生物反應(yīng)器。發(fā)酵罐厭氧式發(fā)酵罐不需要通入氧氣好氧式發(fā)酵罐通氧氣好氧發(fā)酵罐機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐氣升式發(fā)酵罐自吸式發(fā)酵罐鼓泡塔式發(fā)酵罐一、機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐的主要部件有罐體、攪拌器、擋板、空氣分布器、換熱器、消泡器、人孔、視鏡等。1.罐體罐體是空心圓柱體上下兩底焊接封頭后所構(gòu)成的容器。圓柱體高徑之比為1.7~3。

罐體一般采用衛(wèi)級不銹鋼,要求能耐受130℃的高溫和的絕對壓力。

封頭上設(shè)置有進(jìn)料管、無菌呼吸口、接種管、人孔、視鏡、壓力表和取樣管等。罐側(cè)壁上設(shè)計有各種檢測儀器接口以及換熱器的進(jìn)出口。無菌壓縮空氣從罐底部通入,經(jīng)空氣分布管進(jìn)入發(fā)酵液。2.攪拌器

攪拌器安裝在攪拌軸上,起著將空氣分散成氣泡并與發(fā)酵液充分混合,提高溶氧速率的作用。攪拌器的葉輪有多種形式,有渦輪式和螺旋槳式兩種。(1)渦輪式攪拌器

中央圓盤上設(shè)置六個葉片,可分為平葉式和彎葉式兩種。(2)螺旋槳式攪拌器

采用類似螺旋推進(jìn)器的結(jié)構(gòu),在發(fā)酵罐內(nèi)形成由下向上的軸向螺旋運(yùn)動。(3)兩類攪拌器的攪拌效果

可產(chǎn)生較強(qiáng)的渦流擴(kuò)散效果,氣泡分散性好,但主體對流混合較差,容易產(chǎn)生層流。渦輪式攪拌器

可在軸向產(chǎn)生較好的主體對流混合,但渦流擴(kuò)散效果較差,即氣泡分散性較弱。螺旋槳式攪拌器兩類攪拌器組合使用,既強(qiáng)化氣泡的分散,又增強(qiáng)了發(fā)酵液的整體混合效果。3.軸封

連接攪拌器的攪拌軸在電動機(jī)的驅(qū)動下轉(zhuǎn)動,攪拌軸與罐體間的縫隙通過軸封實(shí)現(xiàn)密閉。發(fā)酵罐上常采用端面機(jī)械軸封。端面機(jī)械軸封由動環(huán)和靜環(huán)構(gòu)成靜環(huán)由聚四氟乙烯制成動環(huán)由碳化鎢鋼制成,動環(huán)和靜環(huán)具有導(dǎo)熱性能好,摩擦系數(shù)小等特性。4.空氣分布器

通常有單管式和環(huán)管式兩種結(jié)構(gòu),管上密布了直徑約2~3㎜的噴氣孔,其作用是使空氣分布均勻。

單管式是大型發(fā)酵罐中經(jīng)常采用的形式,管口正對發(fā)酵罐的底部,與罐底距離約40㎜。

環(huán)管式結(jié)構(gòu)簡單,由一根環(huán)形管道制成,其上也分布有噴氣孔,常固定在罐體底部,其噴氣孔應(yīng)向下,以減少發(fā)酵液在分布管上滯留。5.消泡器

通氣攪拌條件下的發(fā)酵經(jīng)常會產(chǎn)生大量的泡沫,嚴(yán)重時會導(dǎo)致發(fā)酵液外溢,增加染菌機(jī)會。消泡法化學(xué)消泡法機(jī)械消泡法

耙式消泡器渦輪消泡器離心式消泡器

耙式和渦輪式消泡器安裝在罐內(nèi)上部,離心式消泡器則安裝于發(fā)酵罐的排氣口處。耙式消泡器渦輪消泡器6.換熱器換熱器有夾套式和豎管式兩種。小型罐采用夾套式,以減少罐內(nèi)的結(jié)構(gòu),但傳熱效果差。大型罐中,常采用豎管式,分組對稱安裝在罐內(nèi)壁上。依據(jù)豎管的排列結(jié)構(gòu),可分為蛇管和列管等形式。二、氣升式發(fā)酵罐氣升式發(fā)酵罐由罐體、導(dǎo)流筒、循環(huán)管、空氣噴嘴等部件組成。在氣升式發(fā)酵罐中沒有機(jī)械攪拌器及相關(guān)裝置,采用高速氣流和密度差帶動發(fā)酵液流動、混合。有環(huán)流式、鼓泡式、空氣噴射式等氣升發(fā)酵罐。

按發(fā)酵液流動方式,環(huán)流式發(fā)酵罐又可分為內(nèi)循環(huán)和外循環(huán)兩種。內(nèi)循環(huán)方式中,又有中央導(dǎo)流筒式和雙帶導(dǎo)流式。1.氣升式發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)

潔凈空氣以250~300m/s,的速度從噴嘴噴出,并以氣泡的形式分散于液體中。含大量氣泡的發(fā)酵液沿循環(huán)管上升。在上升過程中,氣泡中的氧氣溶解于發(fā)酵液內(nèi),過量的氣泡在罐的頂部釋放出來,發(fā)酵液氣含率下降,形成富含溶氧和較少氣泡的液體。由于發(fā)酵罐上部液體氣泡少密度大,下部液體氣泡多密度小,在密度差和重力作用下,上部液體沿循環(huán)管下降,下部液體上升,形成發(fā)酵液在發(fā)酵罐內(nèi)的循環(huán)流動,空氣噴嘴高速噴出的空氣也推動發(fā)酵液沿循環(huán)管流動。氣升式發(fā)酵罐的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單、能耗低、液體中的剪切作用小。在同樣的能耗下,氧的傳遞能力比機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐要高得多。氣升式發(fā)酵罐不適用于黏度高或固含量大的發(fā)酵液。三、自吸式發(fā)酵罐

不需要壓縮空氣,利用特殊的機(jī)械攪拌吸氣裝置或液體噴射吸氣裝置,將無菌空氣吸入罐中,同時實(shí)現(xiàn)發(fā)酵液的混合與溶氧傳質(zhì)。攪拌器的關(guān)鍵部件是吸氣轉(zhuǎn)子,吸氣轉(zhuǎn)子由三棱空心葉輪與固定導(dǎo)輪組成,攪拌軸為中空,與進(jìn)氣管相連,在電動機(jī)的驅(qū)動下,軸上的空心葉輪快速旋轉(zhuǎn),液體被甩出,在葉輪中心形成負(fù)壓,將罐外的無菌空氣吸到罐內(nèi)。隨著葉輪的轉(zhuǎn)動,吸入的氣體在葉輪周圍分散成細(xì)碎的氣泡,形成了強(qiáng)烈的氣液湍流,氣泡中的氧氣隨之?dāng)U散到發(fā)酵液中,在攪拌的同時完成了氧氣的溶解過程。自吸式發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)和工作原理優(yōu)點(diǎn):抽吸力不強(qiáng),吸程不高,適用于對氧氣需要量較低的醋酸和酵母的發(fā)酵生產(chǎn)。機(jī)械攪拌自吸式發(fā)酵罐的葉輪轉(zhuǎn)速較高,在轉(zhuǎn)子周圍形成較強(qiáng)烈的剪切區(qū),不適用于對剪切力敏感的微生物。缺點(diǎn)氣液固三相混合均勻,分散度高,溶氧速率高,傳熱性能好,結(jié)構(gòu)簡單,附屬設(shè)施少,投資省,能耗低。四、鼓泡塔式發(fā)酵罐

鼓泡塔式發(fā)酵罐由塔體、篩板、空氣分布器、降液管組成

泡塔式發(fā)酵罐的高徑比約為7左右,罐內(nèi)安裝有篩板和空氣分布器,降液管具有液封的作用。壓縮空氣由罐底導(dǎo)入,經(jīng)空氣分布器后,穿過篩板氣孔,逐板上升。發(fā)酵液充滿塔體。在空氣泡上升的過程中,密度小的含氣發(fā)酵液也隨之上升,上升后的發(fā)酵液釋放空氣泡,密度增大,在密度差和重力作用下又沿降液管下降,從而形成循環(huán)。空氣泡的上升和發(fā)酵液的循環(huán)流動,產(chǎn)生氣液混合效果,促進(jìn)了氧氣的溶解。

鼓泡式發(fā)酵罐省去了機(jī)械攪拌裝置,造價低,又不會產(chǎn)生液封導(dǎo)致的染菌問題,因而使用范圍較廣。如果培養(yǎng)液濃度適宜,操作得當(dāng),在不增加空氣流量的情況下,基本上可達(dá)到通用發(fā)酵罐的發(fā)酵水平。第四節(jié)發(fā)酵罐信號控制系統(tǒng)生物反應(yīng)是一個動態(tài)的過程,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,營養(yǎng)成分、新的細(xì)胞以及代謝過程產(chǎn)物等因素都在改變。必須對反應(yīng)過程進(jìn)行監(jiān)控,適時調(diào)節(jié)各參數(shù)。需要監(jiān)控的內(nèi)容:①物理參數(shù),包括溫度、壓力、攪拌速度等;②化學(xué)參數(shù),包括液相pH、氧氣和二氧化碳的濃度;③生化參數(shù),生物體量、生物體營養(yǎng)和代謝產(chǎn)物濃度等。一、發(fā)酵罐的信號傳遞在線檢測:將檢測儀器安裝在系統(tǒng)中直接測試生產(chǎn)過程各參數(shù)的過程。發(fā)酵過程在線檢測儀器:溫度傳感器、pH電極、溶氧電極、轉(zhuǎn)速測定儀等。1.發(fā)酵液中溫度的調(diào)控溫度傳感器感應(yīng)罐內(nèi)溫度,將信號傳遞至溫度控制儀,經(jīng)與設(shè)定溫度進(jìn)行比較后,由溫度控制儀發(fā)出調(diào)節(jié)信號,冷卻水閥門和加熱裝置相機(jī)動作,調(diào)節(jié)發(fā)酵液溫度。2.發(fā)酵液中pH的調(diào)控發(fā)酵罐pH的控制是依靠向罐內(nèi)滴加酸或者堿來完成。

pH電極感知酸堿性,以電信號傳遞到放大控制儀,啟動并控制酸、堿泵動作,向罐內(nèi)滴加酸、堿液,實(shí)時調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值。3.發(fā)酵液溶氧濃度的調(diào)控

發(fā)酵過程中通過改變參數(shù)影響溶氧的可變因素主要是攪拌轉(zhuǎn)速和通氣量。罐壓影響發(fā)酵液中溶氧濃度。

在發(fā)酵過程中,通過調(diào)節(jié)控制通風(fēng)量和攪拌轉(zhuǎn)速的方法達(dá)到對溶氧濃度的調(diào)控。二、發(fā)酵罐的檢測儀器條件:無污染BECDA耐高壓F反應(yīng)靈敏快速結(jié)構(gòu)簡潔無死角選擇性高耐腐蝕耐高溫1.溫度計培養(yǎng)基滅菌和發(fā)酵過程溫度的檢測范圍是0~150℃熱電偶半導(dǎo)體熱敏電阻鉑電阻溫度傳感器鉑電阻溫度傳感器是當(dāng)前生物反應(yīng)器的標(biāo)準(zhǔn)配置。鉑金屬的電阻值與溫度的變化成正比關(guān)系,具有精度高、穩(wěn)定性強(qiáng),輸出線性好的優(yōu)點(diǎn)。2.壓力表發(fā)酵罐一般采用隔膜式壓力表。

為了便于遠(yuǎn)距離監(jiān)控,常把壓力表上的壓力信號轉(zhuǎn)換成電信號。3.pH電極

發(fā)酵罐pH值檢測電極是玻璃氫電極,是復(fù)合電極。在使用玻璃電極時要加裝不銹鋼保護(hù)套,電極與發(fā)酵罐壁之間使用“O”形環(huán)密封。金屬外套電極金屬安裝附件耐高溫pH玻璃電極在線pH顯示器耐高溫pH電極4.溶氧濃度(Do)電極原電池溶氧電極采用一對不同金屬材質(zhì)制作的兩個電極,將其浸沒在發(fā)酵液中,溶解氧得電子所產(chǎn)生的電流強(qiáng)度與氧氣的濃度成正比,電信號經(jīng)變送器輸送,并在顯示器上顯示出溶解氧濃度。有原電池溶氧電極和極譜溶氧電極溶氧電極

原電池電極在測量之前無需預(yù)熱就可對溶液中的溶解氧濃度改變作出快速響應(yīng),系統(tǒng)只需40~50秒就可以達(dá)到實(shí)際讀數(shù)的95%。極譜溶氧電極采用金、鉑等金屬和Ag/AgCl

構(gòu)成的電解池系統(tǒng),需要在電極兩端加上一恒定的極化電壓。當(dāng)氧分子滲透過隔膜后,在陰極被還原,從陽極到陰極的電流與電解液中溶解氧的濃度成正比。溶氧電極在使用前,必須進(jìn)行原位標(biāo)定。在發(fā)酵罐的安裝位置上,取發(fā)酵過程中最大和最小的氧飽和條件作為溶氧值的零及飽和濃度條件進(jìn)行校正稱為原位校正。常用工業(yè)溶氧電極5.消泡電極

常用的消泡電極有電容電極和電阻電極。電容電極由兩部分組成,分別安裝于罐內(nèi)反應(yīng)液的上方,當(dāng)泡沫出現(xiàn)時,在兩個電極之間產(chǎn)生與泡沫量呈正比關(guān)系的電容變化,從而可以定量測出泡沫量;電阻電極利用泡沫與電極接觸構(gòu)成電流回路的特點(diǎn)來檢測泡沫,只能定性檢測泡沫的生成與否。6.流量計測定酸、堿和培養(yǎng)基的流量時,采用是橢圓齒輪流量計和科里奧利質(zhì)量流量計,流量信號可轉(zhuǎn)換成電信號而被顯示。橢圓齒輪流量計科里奧利質(zhì)量流量計檢測氣體的流量計有質(zhì)量流量型和體積流量型兩類。體積流量型用的是轉(zhuǎn)子流量計,轉(zhuǎn)子流量計可以直接讀數(shù),不能輸出電信號。玻璃轉(zhuǎn)子流量計發(fā)酵罐中用的質(zhì)量流量計是熱式氣體質(zhì)量流量計。無氣體流過時,沿測量管軸向的溫度分布左右對稱,有氣體流過時,進(jìn)入端的溫度降低,流出端溫度升高。溫度差通過變送器轉(zhuǎn)變?yōu)榕c質(zhì)量流量成線形關(guān)系的電信號,從而獲得流量測定值。熱式氣體質(zhì)量流量計7.尾氣成分分析儀發(fā)酵罐排放氣體含有O2、CO2和其他氣體成分。測定O2含量廣泛采用的是順磁氧分析儀。順磁氧分析儀的工作原理是:O2分子有很強(qiáng)的順磁性,容易被磁場吸引而造成磁場強(qiáng)度的變化;氣體中O2含量越高,氣體的磁效應(yīng)越強(qiáng)。磁效應(yīng)可以通過抗磁性物體受到的排斥扭力表現(xiàn)出來,兩者間具有線性關(guān)系,因而可以測出氣體中O2含量。CO2含量可以用紅外線二氧化碳測定儀測定。第五節(jié)動植物細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備動植物細(xì)胞培養(yǎng)是指動物或植物細(xì)胞在離體的條件下增殖的過程,所產(chǎn)生的是細(xì)胞。動物細(xì)胞無細(xì)胞壁,耐受剪切力弱,動物細(xì)胞要貼附在固體或半固體壁上才能生長。動物細(xì)胞培養(yǎng)器要能提供大面積的固體壁,在溶氧傳質(zhì)時不產(chǎn)生或產(chǎn)生弱小的剪切力。適合于動物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器有貼壁培養(yǎng)反應(yīng)器、懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器和貼壁—懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器。(一)貼壁培養(yǎng)設(shè)備有培養(yǎng)瓶和膜反應(yīng)器兩種形式1.培養(yǎng)瓶滾瓶及培養(yǎng)架2.膜反應(yīng)器

中空纖維膜是半透性多孔膜,氧氣與二氧化碳等小分子可以自由地穿過膜進(jìn)行雙向擴(kuò)散,細(xì)胞和其他大分子有機(jī)物則不能通過。將成束的中空纖維管以列管方式密封在一矩形容器中,再從容器的兩端分別安裝管程和殼程流體的進(jìn)出口,即可制成培養(yǎng)細(xì)胞的膜反應(yīng)器。中空纖維膜反應(yīng)器實(shí)驗室中空纖維膜細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器中空纖維膜細(xì)胞培養(yǎng)器模型(二)懸浮培養(yǎng)設(shè)備籠式通氣攪拌反應(yīng)器

籠式通氣攪拌反應(yīng)器內(nèi)有一個電磁驅(qū)動的圓筒狀旋轉(zhuǎn)攪拌籠,攪拌籠由中空的攪拌內(nèi)筒、內(nèi)筒頂端3個中空的吸管攪拌槳葉、和內(nèi)筒外側(cè)由不銹鋼絲網(wǎng)構(gòu)成網(wǎng)狀籠壁組成的環(huán)狀區(qū)。吸管攪拌槳葉在旋轉(zhuǎn)中使內(nèi)筒頂部形成負(fù)壓,將反應(yīng)液從內(nèi)筒底部吸入。(三)微載體培養(yǎng)設(shè)備

在攪拌式通氣發(fā)酵罐、氣升式通氣發(fā)酵罐、中空纖維培養(yǎng)裝置、多級流化床和固定床等反應(yīng)器中,放入不銹鋼、玻璃、光面陶瓷、塑料等材料做成多孔載體,即構(gòu)成細(xì)胞懸浮培養(yǎng)反應(yīng)器。多孔載體對動物細(xì)胞有很好的親和性,可使動物細(xì)胞貼附在載體上。貼附了細(xì)胞的多孔載體懸浮在培養(yǎng)液中,細(xì)胞吸收

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