標準解讀

《LY/T 2347-2014 剛竹屬DNA擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)分析方法》是一項針對剛竹屬植物的分子標記技術(shù)標準，旨在通過AFLP技術(shù)對不同種類或個體間的遺傳差異進行鑒定。該標準詳細規(guī)定了從樣品采集到數(shù)據(jù)分析的整個流程，確保實驗結(jié)果的準確性和可重復(fù)性。

首先，在樣品采集階段，標準明確了如何選擇和處理用于提取DNA的竹子材料。要求選取健康、無病蟲害的新鮮葉片作為樣本，并且在采集后盡快進行低溫保存以防止DNA降解。

接下來是DNA提取部分，提供了具體的步驟來獲得高質(zhì)量的基因組DNA。這一步驟對于后續(xù)的酶切反應(yīng)至關(guān)重要，因為只有純度高且完整的DNA才能保證酶切效果良好。

然后進入AFLP核心操作環(huán)節(jié)——限制性內(nèi)切酶消化與接頭連接。通過使用特定的限制性內(nèi)切酶切割DNA，形成具有粘性末端的小片段；隨后將特制的人工合成接頭連接到這些片段上，為下一步的選擇性擴增做準備。

選擇性擴增是指利用帶有選擇性堿基的引物對已連接接頭的DNA片段進行PCR擴增。這一過程能夠放大那些攜帶特定序列信息的目標片段，從而使得即使是非常細微的遺傳變異也能被檢測出來。

最后，擴增產(chǎn)物需要經(jīng)過電泳分離，并采用銀染法或其他合適的方法顯色，以便于觀察和記錄。根據(jù)條帶的位置及數(shù)量差異，可以構(gòu)建出各個樣品之間的親緣關(guān)系圖譜。

此標準還強調(diào)了實驗過程中需要注意的一些細節(jié)問題，比如嚴格控制反應(yīng)條件（溫度、時間等），以及合理設(shè)置對照實驗以排除假陽性或假陰性的干擾。通過遵循這套標準化的操作流程，研究人員能夠更有效地利用AFLP技術(shù)開展剛竹屬植物分類學(xué)研究、種質(zhì)資源評價等工作。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2014-08-21 頒布
  • 2014-12-01 實施
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文檔簡介

ICS6502020

B65..

中華人民共和國林業(yè)行業(yè)標準

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴增片段長度多態(tài)性AFLP

()

分析方法

MethodofDNAamlificationframentlentholmorhismAFLP

pggpyp()

forPhyllostachysbamboo

2014-08-21發(fā)布2014-12-01實施

國家林業(yè)局發(fā)布

LY/T2347—2014

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準的附錄為規(guī)范性附錄

。

本標準由全國竹藤標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC263)。

本標準起草單位國際竹藤中心北京林業(yè)大學(xué)中國林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所

:、、。

本標準主要起草人李雪平高志民牟少華陳敏袁金玲

:、、、、。

Ⅰ

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴增片段長度多態(tài)性AFLP

()

分析方法

1范圍

本標準規(guī)定了剛竹屬Phyllostachys竹種的提取酶切連接擴增實驗步驟及采用的儀器

()DNA、、、

設(shè)備

。

本標準適用于剛竹屬竹種多態(tài)性的分析

DNA。

2試劑

21所用化學(xué)試劑如沒有特殊說明均為分析純

.,。

22提取液細胞裂解液

.DNA:1mol/LTris-HClpH8.2、(1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED-

氯化鈉與按混合在使用前加入亞硫酸鈉至終濃

TApH8.0,5mol/L,2%CTAB)5%SLS5∶5∶2,

度為

0.02mol/L。

23三氯甲烷異戊醇

.∶=24∶1。

24異丙醇

.。

25乙醇無水乙醇加蒸餾水定容到

.70%:70mL100mL。

26氯化鈉稱取氯化鈉用蒸餾水溶解后定容到

.5mol/L:29.22g,100mL。

27溴化乙錠稱取溴化乙錠用蒸餾水溶解后定容到

.0.5mg/mL:5mg,10mL。

28變性緩沖液去離子甲酰胺二甲苯青溴酚

.:50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL,FF0.125g,

藍

0.125g。

29硼酸定容到

.10×TBE:Tris108.0g,55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL,1000mL。

210丙烯酰胺溶液甲叉雙丙烯酰胺丙烯酰胺混合加水定容到

.40%:2.0g,38.0g100mL。

211過硫酸胺溶液過硫酸胺加水定容到

.10%:1.0g10mL。

3儀器

31儀具有功能溫度精度

.PCR(touchdown,±0.2℃)。

32移液器

.。

33低溫離心機以上

.4℃(max14000r/min)。

34水浴鍋

.。

35電泳儀可滿足測序

.(DNA)。

36紫外分光光度計

.。

37分析天平

.。

38搖床

.。

4試驗步驟

41DNA提取

.

按照附錄的方法提取和檢測竹子基因組電泳檢測主帶完整

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