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課題2

月季的花藥培養(yǎng)

一、基礎(chǔ)知識(shí)（一）被子植物的花粉發(fā)育花瓣雄蕊雌蕊花萼花托花柄柱頭花柱子房花藥花絲雄蕊雌蕊

花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂形成的，是單倍體的生殖細(xì)胞。

被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段。（花粉母細(xì)胞）減數(shù)分裂有絲分裂營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞（控制花粉萌發(fā)，提供營(yíng)養(yǎng)）生殖細(xì)胞有絲分裂2個(gè)精子（小孢子四分體時(shí)期）彼此分離（一）被子植物的花粉發(fā)育（雙核期）（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑花藥中的花粉花藥中的花粉①②胚狀體愈傷組織叢芽叢芽脫分化脫分化分化再分化生根移栽誘導(dǎo)幼小植株形成之后才需要光照

兩種途徑之間沒有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇

①采集花藥：月季的初花期②花粉發(fā)育時(shí)期：一般選單核期，

細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期；③花蕾：完全未開放的花蕾

（易選到單核期的花藥）

主要是材料的選擇和培養(yǎng)基的組成2、培養(yǎng)基的組成3、其他因素：

親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等MS培養(yǎng)基相應(yīng)的激素二、實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選取1.選擇花藥時(shí)，一般通過(guò)鏡檢來(lái)確定花粉是否處于適宜的發(fā)育期。2.最常用的方法有醋酸洋紅法，將花粉細(xì)胞核染成紅色。3.某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。（二）材料的消毒1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精浸泡30秒2、無(wú)菌水清洗3、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5、無(wú)菌水沖洗3~5次

(用于培養(yǎng)的花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。)（三）接種和培養(yǎng)1.剝離花藥（盡量不損傷花藥）2.接種（每瓶7~10個(gè)）4.分化培養(yǎng)基培養(yǎng)

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