乙肝病毒檢測的方法學評價教案資料

乙肝病毒檢測(jiǎncè)——方法學評價(píngjià)第一頁，共34頁。乙肝病毒結構(jiégòu)第二頁，共34頁。（一）乙型肝炎病毒結構(jiégòu)特點HBsAg：是HBV感染的主要標志HBsAb：保護性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細胞核內，一般(yībān)不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復制狀態(tài)HBeAg：HBV復制及強感染性的指標HBeAb：有一定的保護作用，預后良好第三頁，共34頁。患者血清(xuèqīng)中存在三種基本形態(tài)大球型顆粒(kēlì)，又稱Dane顆粒(kēlì)；小球型顆粒(kēlì)；管型顆粒(kēlì)小球型顆粒(kēlì)；管型顆粒(kēlì)管型顆粒(kēlì)第四頁，共34頁。乙型肝炎病毒(bìngdú)的實驗室診斷（一）血清學檢查(jiǎnchá)（二）生化學檢查(jiǎnchá)（三）HBVDNA、基因型和變異檢查(jiǎnchá)

第五頁，共34頁。血清學檢查(jiǎnchá)項目(xiàngmù)：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)第六頁，共34頁。HBsAg–感染的標志Anti-HBs–既往感染/接種疫苗Anti-HBcIgM–急性感染標志Anti-HBcIgG–既往或慢性感染HBeAg–急性病毒(bìngdú)復制，有傳染性Anti-HBe–病毒(bìngdú)不再復制HBV-DNA–急性病毒(bìngdú)復制，比HBeAg更準確；主要用于監(jiān)測治療反應第七頁，共34頁。HBV血清學標志物的臨床意義感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗HBc(IgG)抗HBe抗HBs臨床意義1+-----急性乙肝潛伏期后期，攜帶者。2++----急性乙肝早期或潛伏期3+++---急性乙肝早期4++-++--急性乙肝后期5++-+----急性或慢性乙肝，有HBV復制6+++-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或無癥狀攜帶者7+-+-++-陰性慢性乙肝8+---+-慢性乙肝，無或低度HBV復制，乙肝恢復期，既往感染，隱匿性9---+-+乙肝恢復期，既往感染，隱匿性10-----+慢性乙肝，接種過乙肝疫苗。第八頁，共34頁。兩對半的意義(yìyì)—乙型肝炎的診斷(zhěnduàn)—判斷傳染性—判斷預后—篩查獻血員—流行病學調查第九頁，共34頁。乙肝三系定性檢查是用來(yònɡlái)判斷是否感染乙肝或粗略估計病毒復制水平的初步檢查，對患者病情程度的評估參考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性檢查的時候，應結合肝功能檢查、乙肝病毒DNA檢查、B超檢查等來判定病情的輕重，第十頁，共34頁。ELISA檢測靈敏低的原因(yuányīn)及局限ELISA法受其自身敏感性和特異性的限制;HBVS和前C基因區(qū)出現(chūxiàn)位點突變導致HBsAg和HBeAg表達缺陷。影響因素多,如加樣時間,試劑平衡時間,樣本溶血程度等等。特別是低濃度樣本易導致假陰性結果,使弱陽性樣本漏檢。急性感染的窗口期;HBsAg檢測方法靈敏度不足;血清亞型的漏檢等。標本中病毒顆粒少;第十一頁，共34頁。血清學檢測(jiǎncè)的局限性HBV具有“檢測窗口期假陰性結果無法(wúfǎ)檢測突變株及抗體第十二頁，共34頁。乙肝病毒的定量(dìngliàng)檢測1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量檢測：1）參考值：0-0.05IU/mL2）臨床意義：（1）可作為HBV攜帶者乙肝病毒復制的參考指標（2）評價拉美呋定的治療效果（3）監(jiān)測應用alpha-干擾素治療病人(bìngrén)的乙肝病毒復制（4）確定肝移植病人(bìngrén)免疫球蛋白的使用劑量第十三頁，共34頁。2.乙肝表面(biǎomiàn)抗體（抗-HBs）定量測定：是HBsAg刺激機體產生(chǎnshēng)的特異性抗體，是一種保護性抗體，能中和HBV。（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保護性，需要注射乙肝疫苗（3針：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保護性，但較弱，需要乙肝疫苗強化注射（1針）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很強的保護性，不需要注射乙肝疫苗。第十四頁，共34頁。3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高說明病毒復制，具有很強的傳染性。4、乙肝病毒e抗體(kàngtǐ)（抗-HBe）抗-HBe陽性說明病毒復制減少，傳染性弱，但并非沒有傳染性?？笻Be不是保護性抗體(kàngtǐ)。第十五頁，共34頁。5、乙肝病毒核心抗體（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗體，有IgG和IgM兩種形式(xíngshì)。IgM在早期出現，而IgG在恢復期出現，可持續(xù)多年或終身存在。第十六頁，共34頁。乙肝五項定量檢測(jiǎncè)的優(yōu)點由于乙肝病毒容易(róngyì)發(fā)生變異，再加上乙肝定性檢測方法的局限性，會出現假陰性結果，導致不能及時發(fā)現乙肝的感染，也就不能得到及時的治療，對醫(yī)護人員和其他患者也存在著被感染的威脅。乙肝五項定量應用目前最先進的化學發(fā)光法檢測，避免了假陰性和漏檢的問題，而且準確，尤其對乙肝病人的療效觀察提供了依據，這是檢驗發(fā)展的趨勢。第十七頁，共34頁。兩對半定量檢測極大地提高了檢測的靈敏度，LiCa技術檢測HBsAg靈敏度可達0．5ng/ml，而ELISA檢測HBsAg達到2ng/ml時才會陽性。急性乙肝早期定量能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，幾乎能與PreSi同時檢測，在病程觀察中大大縮短了“窗口期”，而酶標檢測在乙肝早期往往HBsAg呈陰性。慢性乙肝一些患者由于機體常缺乏對HBV包膜蛋白的免疫應答，HBsAg表達較低，酶標檢測可出現HBsAg和HBsAb均陰性的情況，而定量檢測則可避免這些情況的出現，為正確判斷病情(bìngqíng)提供依據。靈敏度如病毒發(fā)生變異后，表達量較低，常規(guī)ELISA測不出抗原，而定量檢測具有極高的靈敏度，可發(fā)現極有可能同時檢測出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量與病人對HBsAg細胞免疫成反比關系，而肝功能改變則與此種細胞免疫成正比。定量HBsAg是反映這一關系的唯一手段?？砂l(fā)現低濃度的HBsAg攜帶者，特別是一些群體如醫(yī)務工作者及病人家屬等。第十八頁，共34頁。定量(dìngliàng)檢測意義監(jiān)測疾病發(fā)展評估藥物療效(liáoxiào)指導疫苗接種第十九頁，共34頁。國內疫苗(yìmiáo)評價標準無應答(yìngdá)者:無抗體產生(5%)----加強計量復種低應答(yìngdá)者:<10IU/L(10%)----加強計量復種中應答(yìngdá)者:10-100IU/L(65%)----無須復種高應答(yìngdá)者:>100IU/L(20%)----無須復種第二十頁，共34頁。PCR技術在乙肝方面(fāngmiàn)的應用乙型肝炎病毒(bìngdú)屬嗜肝DNA病毒(bìngdú)科（hepadnaviridae），基因組長度3.2kb目前感染人類最小的DNA病毒(bìngdú)部分雙鏈環(huán)狀DNA。第二十一頁，共34頁。定量(dìngliàng)PCR的特點可定量結果，準確(zhǔnquè)靈敏地反應了病原體的感染和治療恢復情況光譜分析儀直讀結果，自動分析，增強了靈敏性和客觀性。第二十二頁，共34頁。第二十三頁，共34頁。HBV基因及編碼蛋白第二十四頁，共34頁。HBV-DNA定量檢測(jiǎncè)的臨床應用慢性乙肝診斷(zhěnduàn)治療監(jiān)測和療效評價跟蹤隨訪預后判斷第二十五頁，共34頁。（二）HBV-DNA與“兩對半”1.“兩對半”：機體的免疫反應狀態(tài)；FQ-PCR：檢測的是HBV本身(běnshēn)的遺傳物質—DNA，是病毒存在和復制的最可靠、最直接的指標。2.“攜帶者”、“大三陽”、“小三陽”等免疫學指標不能反應體內病毒復制水平與感染程度。第二十六頁，共34頁。3.血清學指標(－)不能排除HBV感染(gǎnrǎn)。4.也可能出現HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。5.HBsAb(＋)、HBcAb(＋)、HBeAb(＋)三抗體陽性與HBVDNA2.5×103copy/ml結果解釋。第二十七頁，共34頁。HBV-DNA檢測(jiǎncè)的臨床意義⒈診斷方面(fāngmiàn)：⑴HBVDNA是HBV存在最直接的依據⑵HBVDNA是HBV復制的標志⑶HBVDNA是患者具有傳染性的標志⑷對HBV-M起補充作用：①HBeAg(﹣)/抗HBe(﹢)乙型肝炎（前C區(qū)變異）②HBsAg(﹣)乙型肝炎（S區(qū)變異）③低水平感染單項抗HBc(﹢)乙型肝炎第二十八頁，共34頁。⒉療效判斷：HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物(yàowù)療效最敏感的指標⒊預后判斷HBVDNA水平與病情有一定的關系第二十九頁，共34頁。一、乙肝病毒DNA檢查可檢查乙肝病毒的復制狀況。如乙肝病毒DNA測定值>1000copies/ml，就提示乙肝病毒有復制，而且病毒數量的高低與病毒復制的程度成正相關。若結果陰性(yīnxìng)，則表明病毒處于不活躍階段，病情比較平穩(wěn)。二、乙肝病毒DNA檢查還是判斷乙肝病毒傳染性的重要指標。如果乙肝病毒DNA測定值>1000copies/ml，常提示具有傳染性，且檢測值越高就說明乙肝病毒復制越活躍，傳染性越強。第三十頁，共34頁。三、乙肝病毒DNA檢查可以作為肝病患者確診病情的主要依據。乙肝病毒DNA陽性者，即使肝功能正常，必要時也應考慮進行抗病毒治療。乙肝抗病毒治療的標準就是乙肝病毒DNA>1000copies/ml，且患者轉氨酶超過正常值兩倍，此時是肝病患者抗病毒治療的最佳時機。四、乙肝病毒DNA檢查結果還可以在一定程度上輔助判斷乙肝病毒是否產生了變異，如在治療過程中乙肝病毒DNA檢測結果由陰性轉為陽性時，則提示病毒已發(fā)生(fāshēng)變異，應結合具體病情重新選擇抗病毒藥物。第三十一頁，共34頁?；?jīyīn)檢測在乙肝診療各階段的應用藥物治療方案(fāngàn)的確定（用藥：干擾素、拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋）藥物(yàowù)治療（療效評價）前C區(qū)1896位點突變檢測跟蹤隨訪乙肝病毒定量檢測確診病毒學分析乙肝病毒分型檢測拉米夫定耐藥檢測阿德福韋耐藥檢測共價閉合環(huán)狀DNA(cccD