微生物第八章病原學(xué)診斷與防治

微生物第八章病原學(xué)診斷與防治第一頁，共三十二頁，2022年，8月28日診斷病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測防治特異性防治：人工主動(dòng)免疫、人工被動(dòng)免疫非特異性防治：抗生素、抗病毒藥物、抗真菌藥物第二頁，共三十二頁，2022年，8月28日第一節(jié)細(xì)菌學(xué)診斷細(xì)菌學(xué)診斷——檢測病原菌及其抗原，產(chǎn)物或核酸血清學(xué)診斷——檢測患者血清中特異性抗體第三頁，共三十二頁，2022年，8月28日一、病原菌檢測標(biāo)本采集與送檢原則：根據(jù)不同疾病和不同病期，采取不同標(biāo)本。無菌操作，避免雜菌污染。應(yīng)在使用抗菌藥物前采集標(biāo)本。盡可能采集病變明顯部位的材料。標(biāo)本必須新鮮，采集后盡快送檢。送檢過程中要采取適當(dāng)?shù)谋４娣绞健Ｗ龊脴?biāo)記，詳細(xì)填寫化驗(yàn)單，保證各環(huán)節(jié)準(zhǔn)確無誤。第四頁，共三十二頁，2022年，8月28日致病菌的檢驗(yàn)程序標(biāo)本形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測

其它檢測光鏡、電鏡、染色法形態(tài)特征培養(yǎng)特征生化反應(yīng)藥敏試驗(yàn)血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細(xì)菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）PCR查細(xì)菌核酸噬菌體分型細(xì)菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動(dòng)物試驗(yàn)第五頁，共三十二頁，2022年，8月28日人體受致病菌感染后，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體?？贵w的量常隨病程而增加，表現(xiàn)為效價(jià)（滴度）升高。用已知的細(xì)菌或抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為感染性疾病的輔助診斷。由于一般采取病人血清進(jìn)行試驗(yàn)，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。血清學(xué)診斷試驗(yàn)最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清，當(dāng)后者的抗體效價(jià)比前者升高大于等于4倍時(shí)方有意義。常用方法：直接凝集試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、ELISA。二、血清學(xué)診斷第六頁，共三十二頁，2022年，8月28日第二節(jié)病毒學(xué)診斷

一、標(biāo)本的采集與送檢早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標(biāo)本病毒室溫易失活，應(yīng)低溫保存，快速送檢無菌采集與抗生素處理（防止細(xì)菌污染）血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢查抗體應(yīng)采集雙份血清第七頁，共三十二頁，2022年，8月28日二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（一）病毒的分離動(dòng)物接種：選擇易感動(dòng)物及適宜接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)：不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細(xì)胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細(xì)胞—來源于動(dòng)物、雞胚、人胚組織細(xì)胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細(xì)胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細(xì)胞，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。（3）傳代細(xì)胞—能在體外無限傳代的細(xì)胞，多由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來，不能用于疫苗生產(chǎn)。第八頁，共三十二頁，2022年，8月28日病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)細(xì)胞的變化細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）：即某些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起的特有的細(xì)胞病變（細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解、脫落等）細(xì)胞融合：形成多巨核細(xì)胞包涵體：某些病毒在培養(yǎng)細(xì)胞胞漿或核內(nèi)形成的嗜酸或嗜堿性的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。紅細(xì)胞吸附干擾現(xiàn)象細(xì)胞代謝改變（pH）第九頁，共三十二頁，2022年，8月28日正常細(xì)胞病變細(xì)胞第十頁，共三十二頁，2022年，8月28日（二）病毒的數(shù)量與感染性測定滴定：測定單位體積中感染性病毒的數(shù)量蝕斑測定法病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑。蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位來表示。

50%組織細(xì)胞感染量雞胚動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%

發(fā)生死亡或病變的最小量。第十一頁，共三十二頁，2022年，8月28日（三）新分離病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)觀察血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比第十二頁，共三十二頁，2022年，8月28日三、病毒感染的血清學(xué)診斷用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾病。中和試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗(yàn)第十三頁，共三十二頁，2022年，8月28日

四、病毒感染的快速診斷

（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒普通光鏡——觀察包涵體第十四頁，共三十二頁，2022年，8月28日第十五頁，共三十二頁，2022年，8月28日第十六頁，共三十二頁，2022年，8月28日第十七頁，共三十二頁，2022年，8月28日第十八頁，共三十二頁，2022年，8月28日第十九頁，共三十二頁，2022年，8月28日（二）檢測病毒蛋白抗原用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用方法：免疫熒光技術(shù)（IF）

固相放射免疫測定（SPRIT）酶免疫技術(shù)（EIA）等。（三）檢測病毒特異性IgM抗體檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染。第二十頁，共三十二頁，2022年，8月28日（四）檢測病毒核酸

1核酸雜交

斑點(diǎn)雜交（dothybridization）

原位雜交（insitehybridization）

DNA印跡雜交（Southernblot）

RNA印跡雜交（Northernblot）2

核酸擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng)

（polymerasechainreaction，PCR）連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，LCR）反轉(zhuǎn)錄PCR（ReversetranscrptasePCR，RT-PCR）3

基因芯片技術(shù)（genechip）

第二十一頁，共三十二頁，2022年，8月28日第三節(jié)真菌學(xué)診斷標(biāo)本直接鏡檢深部標(biāo)本染色標(biāo)本G染色G+圓形大小不均有芽生孢子分離培養(yǎng)沙氏培養(yǎng)基菌落觀察角質(zhì)標(biāo)本不染色10%KOH觀察菌絲、孢子類型大小顏色皺摺鑒定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（致病性真菌）接種觀察發(fā)病情況死亡后取標(biāo)本進(jìn)一步鑒定皮膚超敏反應(yīng)快速診斷血清學(xué)實(shí)驗(yàn)核酸檢測真菌毒素檢測第二十二頁，共三十二頁，2022年，8月28日第二十三頁，共三十二頁，2022年，8月28日新生隱球菌腦脊液涂片第二十四頁，共三十二頁，2022年，8月28日假菌絲第二十五頁，共三十二頁，2022年，8月28日第四節(jié)特異性預(yù)防與治療一、人工主動(dòng)免疫(artificialactiveimmunity)將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。第二十六頁，共三十二頁，2022年，8月28日疫苗死疫苗活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗治療性疫苗類毒素

外毒素

0.3%~0.4%甲醛類毒素用于人工主動(dòng)免疫的生物制劑第二十七頁，共三十二頁，2022年，8月28日第二十八頁，共三十二頁，2022年，8月28日二、人工被動(dòng)免疫(artificialpassitiveimmunity)注射含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫。人工被動(dòng)免疫作用作用發(fā)揮迅速，但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生，故維持時(shí)間短。主要用于治療或緊急預(yù)防。第二十九頁，共三十二頁，2022年，8月28日抗毒素抗菌血清胎盤丙種球蛋白、血清丙種球蛋白其他免疫制劑用于人工被動(dòng)免疫的生物制劑第三十頁，共三十二頁，2022年，8月28日兩種人工免疫的比較區(qū)別要點(diǎn)人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或