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文檔簡介

海藻凝集素提取工藝材 料：孔石莼爭論方法：正交試驗法具體步驟：一、樣品處理采集、洗凈〔過濾海水、并把水吸干冷凍100oC、110oC研磨成粉〔未使用時冷凍〕二、凝集素粗提取液1.6g2. 按〔質(zhì)量體積比〕1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30溶于含緩沖溶液1：0.15mol/LNaCl的PBS〔0.015mol/L，Na2

HPO—4NaHPO，PH7.2〕2 43. 在緩沖溶液浸泡5101525354oC〕4. 離心〔4oC，7000r/min，30min〕5. 200ml三、凝集素提取的單因素試驗分別檢測烘干溫度、液料比、緩沖溶液、浸泡時間等對凝血效價的影響。因素溫度因素溫度緩沖液時間水平液料比123因素溫度因素溫度緩沖液時間試驗號1液料比效果23456789101112131415161718192021222324252627其次階段試驗四、MNL硫酸銨分級范圍確實定1、在冰水浴條件下，取320ml粗提液平均分成1616210%、1520%、2530%、35%、4045505560657580859016個硫酸銨分級范圍進(jìn)展鹽析3、離心〔4℃，7000rmin-1，30min，得到的沉淀物溶于適量的生理鹽水中，用生理鹽水透析至無 集活性。

，測4

和凝280nm4.選擇純化倍數(shù)最高的鹽析范圍作為硫酸銨分級范圍。對生理鹽水充分透析。五、DEAE-52DEAE-52纖維素經(jīng)處理后裝柱，層析柱為1.6cm×30cm，用pH7.0.01molL-1Tris-HCl2ml70上柱，用pH7.5，0.01mol·L-1Tris-HClA

<0.01，280nm然后，梯度洗脫〔A300mlB300ml0.8molL-1NaCl的平衡液，流速為18m·h-1,每管3ml,A 測定280nm蛋白含量，對蒸餾水透析至無Cl-，用0.9%的NaCl的PBS(0.015mol·L-1，Na

，pH7.2)緩沖液反透析，用兔紅細(xì)胞檢測2 4 2 4活性，收集有活性局部，透析、凍干得凝集素離子交換層析樣品。六、SephadexG-200分子篩凝膠層析ephadexG-2001.6cm×90cm，所上的樣品為經(jīng)過濃縮的離子交換層析得到的活力峰局部，洗脫液為含0.02%0.9%的NaCl的PBS(0.015mol·L-1，-NaHPOpH7.218ml·h

-13ml。用

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