血紅蛋白檢測的臨床意義word版本

血紅蛋白檢測的臨床意義血紅蛋白的化學(xué)特性及酶活性

與氧氣的結(jié)合:

通過將氧氣分子固定在二價鐵原子上，血紅蛋白是將氧氣從肺部運輸?shù)饺梭w組織中。CO2

的運輸:

與CO的結(jié)合:

碳氧血紅蛋白的形成(Carboxyhemoglobinformation)。血紅蛋白的氧化作用:

形成高鐵血紅蛋白酶活性:氧化酶特性,過氧化酶特性,脆化酶特性...

血紅蛋白的電泳條帶正常范圍Formsobtainedbyglycation5to8%HbA1:a2b2新生嬰兒體內(nèi)的血紅蛋白主要成分<2%(traces)HbF:a2g2微量組成部分<3.5%HbA2:a2d2主要組成部分>96.5%HbA:a2b2-9-6-30369

出生前出生后months

血紅蛋白的多肽鏈合成曲線

血紅蛋白遺傳病

遺傳性疾病基因?qū)W圖譜：正?；虍惓；蜓t蛋白遺傳病(HEMOGLOBINOPATHIES)非正常血紅蛋白的含量測定:珠蛋白鏈合成異?；蛘吆铣蛇^程中的調(diào)控異常

地中海貧血?。═halassemia）非正常血紅蛋白的檢測:結(jié)構(gòu)異常,一個或數(shù)個氨基酸變異或缺失,都將會導(dǎo)致血紅蛋白分子的電性發(fā)生改變

血紅蛋白分子?。℉bVariants）血紅蛋白疾病的區(qū)域分布圖Thalassemias全世界范圍內(nèi)經(jīng)結(jié)構(gòu)分析證實的異常血紅蛋白日益增多，至90年代初期已達600多種，但僅不到1／3的異常血紅蛋白伴有臨床癥狀。世界衛(wèi)生組織估計，全球約有1.5億人攜帶血紅蛋白病基因，并已將血紅蛋白病列為嚴重危害人類健康的6種常見病之一。:a-地中海貧血病:b-地中海貧血病:一組遺傳性的珠蛋白鏈的合成不對稱.地中海貧血病abdgNormalHbA=a22HbA2=a22HbF=a22abdga-Thalassemiab4=HbH血紅蛋白H病

臨床表現(xiàn)：有輕、中度貧血，2／3以上病例有肝脾腫大，常反復(fù)出現(xiàn)黃疸。父母雙方常有α－地中海貧血。

實驗室檢查：有溶血性貧血的特征，骨髓中紅細胞系統(tǒng)增生極度活躍.HbH明顯增高(2.5％～40％)，HBA2及HbF含量正常。Hb電泳可出現(xiàn)HbH區(qū)帶。紅細胞滲透脆性試驗降低，紅細胞包含體陽性。=HbBart’sabdgb-ThalassemiaIncreasedHbA2(4-6%)血紅蛋白疾病的研究：

疾病的區(qū)域性特征較強。在檢測中發(fā)現(xiàn)異常: (小紅細胞癥,血紅蛋白過少,Heinzcorps,...)出現(xiàn)無法解釋的異常溶血現(xiàn)象....對全部家族成員進行血紅蛋白的檢測.血紅蛋白疾病的檢測方法Electrophoresis:醋酸纖維素薄膜電泳／瓊脂糖凝膠電泳)HPLC:高效液相色譜法Capillarys:高效毛細管電泳法

血紅蛋白檢測是測量正常血紅蛋白的量或異常血紅蛋白當(dāng)醫(yī)生懷疑患者有血紅蛋白病或貧血查因時將血紅蛋白置于電場中，由于帶電量不同，各組分分離開形成不同的、特異性的“bands”

將這些“帶”與正常人樣本比較，得出診斷傳統(tǒng)電泳Agarose電泳Cellulose電泳

研究報告已指出這二種方法對α、β型地中海型貧血的區(qū)別診斷只有95%的能力，尚有5%的模糊地帶。(HbA2cut-off值定在3.5%)DeterminationofHbvariantsCelluloseEpforHbvariantsAgarosegelEpforHbvariantsHPLC毛細管電泳工作原理溫控器正極+負極

-檢測器氘光源電泳……高電壓10000VA/E異源基因型Anh.Car.AE+A2Alk.NA0A1A1+E1Ac.NA0+EHbAHbA2HbECapillarys/Minicap區(qū)帶識別表Z15:HbHZ14://Z13:Hb-JRovigo,HbN-Baltimore,J-KaoshiungZ12:HbBart’s,HbProvidence,HbJ-Mexico,HbJ-Baltimore….Z11:HbKaoshiung(NewYork),denaturatedHbAZ10:HbHope,HbM-IwateZ9:HbA,HbCamperdown,HbPhnomPenh……Z8:AcetylatedHbF,HbAltanta,HbAthens-GAZ7:HbF,denaturatedHbS,HbPorto-Allegre……..Z6:HbD-Punjab,HbPhiladelphia,HbKorle-Bu,HbLepore,HbK?ln,denaturatedHbE….Z5:HbS,HbHasharon,HbHandsworth,denaturatedHbO-Arab.Z4:HbE,denaturatedHbC,HbK?ln,HbA2variants,M-IwateHbA2variantsZ3:HbA2,HbO-ArabZ2:HbC,HbConstantSpring,SetifHbA2variantZ1:HbdA2HbaA2,HasharonHbA2variant,WinnipegHbA2variant……血紅蛋白疾病的研究：在我國南方如何防治地中海貧血是關(guān)系到提高我國人口素質(zhì)和實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育中的一個重要課題.目前婚前和孕前的檢查、干預(yù)是防止這種遺傳病發(fā)生的有效手段.其中血紅蛋白(Hb)電泳是研究和分離異常血紅蛋白的有效方法,亦是診斷血紅蛋白分子病不可缺少的手段之一.Hb電泳檢查的臨床意義-地中海貧血-地中海貧血異常血紅蛋白病地中海貧血檢查的臨床意義貧血的鑒別診斷__自身免疫性溶血性貧血與地中海貧血地中海貧血的分型黃疸的鑒別診斷__肝炎與地中海貧血α－地中海貧血1．靜止型α－地中海貧血2．標準型或輕型3．血紅蛋白H病4．血紅蛋白Bart’s胎兒水腫綜合征2121Chromosome16GAHS1-6GAHS1-6Chromosome11α－地中海貧血血紅蛋白H病

臨床表現(xiàn)：有輕、中度貧血，2／3以上病例有肝脾腫大，常反復(fù)出現(xiàn)黃疸。父母雙方常有α－地中海貧血。

實驗室檢查：有溶血性貧血的特征，骨髓中紅細胞系統(tǒng)增生極度活躍.HbH明顯增高(2.5％～40％)，HBA2及HbF含量正常。Hb電泳可出現(xiàn)HbH區(qū)帶。紅細胞滲透脆性試驗降低，紅細胞包含體陽性。α－地中海貧血血紅蛋白Bart’s胎兒水腫綜合征

臨床表現(xiàn)：該病為α—地中海貧血中最嚴重者，胎兒常于妊娠后期死亡或早產(chǎn)。胎兒生下時，全身水腫，皮膚蒼白，黃疸，肝脾腫大，常于產(chǎn)后數(shù)小時內(nèi)死亡。父母雙方均有HbH病或標準型α—地中海貧血。

實驗室檢查：有溶血性貧血的特征，骨髓紅系增生活躍。紅細胞形態(tài)靶形紅細胞明顯增多，外周血可見有核紅細胞。Hb電泳：HbBart成分＞8％，抗堿Hb增加Bart’sHbAlkAcα－地中海貧血

α-地貧HbHHbBart’sHbC-SHbAa-Thalassemia其他特征HbHHbA2HbF貧血小紅細胞靶細胞異常出生時少量的

(~2%)HbBart’s0正常正常000一條鏈缺失出身時HbBart’s(~5%)0正?；驕p少正常0002條鏈缺失不穩(wěn)定血紅蛋白溶血性貧血(HbH)10-15%減少也許增加輕微的到嚴重的++3條鏈缺失胎兒水腫綜合癥(hydropsfetalis)00100%HbBart’s嚴重的--4條鏈缺失β-地中海貧血定義：由于β珠蛋白基因的突變，引起血紅蛋白β鏈合成的減少或缺乏而形成的溶血性貧血。定位：β基因在11號染色體上，每條染色體上有1個基因重型地貧（T/T），重型珠蛋白生成障礙性貧血(Cooley貧血)半周歲時出現(xiàn)貧血，肝脾腫大特殊面容:大頭、顴骨突出、塌鼻梁、眼距過寬、臉浮腫輕型地貧（T/N），輕型珠蛋白生成障礙性貧血一般無任何臨床癥狀重型β地貧兒βN/βTβN/βTβN/βN

βN/βTβN/βTβT/βT夫婦雙方都是輕型β地貧攜帶者,每次懷孕有1/4的機會生育重型β地貧兒.如何篩查α-地貧篩查對象：α-地貧性狀（--/αα）和HbH?。?-/-α）篩查方法：血常規(guī)、Hb分析α-地貧篩查陽性：

α-地貧性狀（--/αα）MCV↓、HbA2正常（或稍低）HbH病（--/-α）

MCV↓、HbA2降低、HbH（+）α-地貧性狀（--/αα

）HbH病（--/-α）如何篩查-地貧（βT/βN）篩查方法：血常規(guī)、Hb分析篩查陽性：MCV↓、HbA2↑(>3.5%)

βT/βNCapillaryHemoglobinElectrophoresisHbEAmJClinPathol2008;130:824-831二種儀器性能比較瓊脂糖血紅蛋白電泳毛細管血紅蛋白電泳Chenetal.TheNewEnglandJournalofMedicine2000;343(8):544–550谷氨酰胺31非缺失型α-地貧的人群篩查確定篩查人群當(dāng)一方為SEA攜帶者時，應(yīng)篩查另一方是否攜帶非缺失型α-地貧。非缺失型α-地貧的人群篩查篩查方法MCV（MCH）？Hb分析？基因診斷？Hb分析篩查CSHPLC敏感性76.2%76.2%76.2%(Liaoetal.Hemoglobin201034:175)Hb分析篩查CSCapillaryelectrophoresis(SebiaCapillarys2)敏感性100%(Liaoetal.Hemoglobin201034:175)SEBIACAPILLARYS2血紅蛋白異常變異體的電泳原理

在電場作用下，不同的帶電屬性的分子移動能力也各有不同。HYDRAGELHbandCAPILLARYSHb

有助于檢測出具有臨床意義的各類主要血紅蛋白疾病。HYDRAGELACIDHb

根據(jù)血紅蛋白在不同酸堿度的瓊脂糖膠體上的移動性的差異，從而對血紅蛋疾病進行檢測。各類血紅蛋白的鑒定HbS,HbC,HbD,HbE,excessHbF,HbH,HbBart(inthalassemia)arethemostcommonabnormalhemoglobins.完整的血紅蛋白鑒定，需要在兩種瓊脂糖膠體上電泳條帶進行對比。正常條帶AA2Alk.Anh.Car.Ac.A0A13周新生兒的

電泳條帶Anh.Car.AfaibleA2Alk.FNA1Ac.

F+A1A0A0N8周新生兒的

電泳條帶Anh.Car.AfaibleA2Alk.NFA1Ac.N

F+A1A0A0毛細管電泳儀上的正常血紅蛋白電泳曲線HbAHbA2AFSC

電泳監(jiān)控條帶

HbFHbA 52,7%HbF 21,4%HbS 18,8%HbA2 1,3%HbC 5,8%HbSHbAHbA2HbC“S”型血紅蛋白

SickleCellsdisease常見區(qū)域:地中海區(qū)域國家,非洲赤道區(qū)域國家(40%),美洲非裔人群(10%),印度西部特征:

變異體位置b6谷氨酸Glu(negative)→纈氨酸Val(neutral)生物學(xué)癥狀:

紅細胞形狀出現(xiàn)變異,形成鐮刀型紅細胞

血紅蛋白與氧氣結(jié)合能力出現(xiàn)下降

極易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象和貧血癥臨床特征:依照形態(tài)的不同有所改變.雜合子:鐮刀狀細胞(一般無癥狀)HbA條帶:50–70%HbS條帶:30–50%HbA2條帶:正常純合子:嚴重的溶血癥狀HbA條帶:缺失HbS條帶:80–100%HbA2條帶:正常或增加(HbF條帶大約占0–20%)伴隨HbS型血紅蛋白，會同時出現(xiàn): +地中海貧血 +HbC(或其他變異體) +HPFH臍帶血的”S”純合子NFA2Alc.Anh.Car.NAc.A0A1A1+FSAFSCcontroloverlayingSHbA2HbSHbFHeterozygousS/CSNCAlc.Anh.Car.NAc.A0A1F(traces)SCAFSCcontroloverlayingHbCHbSHbFHbA2

HeterozygoteA/SNAA2Anh.Car.Alk.SFNAc.A0A1A0A1+FSHomozygoteS

withpresenceHbFNFA2Alk.SAnh.Car.NAc.A0A1A1+FS血紅蛋白C發(fā)現(xiàn)區(qū)域:在黑人出現(xiàn)的非常普遍,非洲的西部和北部,意大利南部,西西里島.描述:

B6的突變：谷氨酸(negative)→賴氨酸(positive)堿性緩沖液:總電荷減少→移動變慢,在瓊脂糖中和A2在同一水平,在毛細管中比A2更靠近陰極。臨床和生物學(xué)特性:

形成靶型紅細胞雜合子:(無癥狀)HbA條帶:60–70%HbC條帶:30–40%純合子:中度溶血性貧血,巨脾癥HbA條帶:缺失HbC條帶:95–100%如果同時出現(xiàn)HbS:

和純合子的鐮刀細胞病一樣病理學(xué)特征雜合子A/CHbA2HbAHbCHeterozygoteA/CNAnh.Car.AC+A2Alk.NA0A1A1CA0Ac.HeterozygoteS/CSNCAlk.Anh.Car.NAc.A0A1F(traces)SC血紅蛋白D-Punjab發(fā)現(xiàn)區(qū)域及頻率:多發(fā)現(xiàn)在印度.描述:B121的突變

谷氨酸(negative)→谷氨酰胺(neutral)

(D-LosAngeles=D-Punjab)(根據(jù)變異體的突變位置不同，會有6種HbD)堿性緩沖液:總電荷減少→在瓊脂糖中比HBS移動的慢,在毛細管中比S更靠近陽極臨床和生物學(xué)特性:雜合子:(無癥狀,僅僅在電泳中符合診斷)HbA條帶:60–70%HbD條帶:30–40%純合子:非常輕微的貧血HbA條帶:缺失HbD條帶:100%HeterozygousA/D-PunjabAFSCcontroloverlayingHbAHbDHbA2HeterozygoteA/D-PunjabAnh.Car.AA2Alk.NDA0A1Ac.ND1+A1D0+A0HEMOGLOBINE常見區(qū)域:主要集中在東南亞地區(qū).特性:變異出現(xiàn)位置b26谷氨酸Glu(negative)→賴氨酸Lys(positive)臨床表現(xiàn)和生物學(xué)特征:基因雜合體:(無癥狀)HbAfraction:65–70%HbEfraction:30–35%基因純合體:(輕微異常)HbAfraction:absenceHbEfraction:100%HeterozygousA/EHbAHbA2HbEHomozygousHbEAFSCcontroloverlayingHbEHbA2HeterozygoteA/EAnh.Car.AE+A2Alk.NA0A1A1+E1Ac.NA0+EHomozygoteHbEAnh.Car.Alk.NE+A2AA0A1Ac.NE1E0HbLeporeb和d鏈重新組合形成的新型血紅蛋白.堿性緩沖液:總電荷減少→在瓊脂糖中移動的比S慢,在毛細管中比S更靠近陽極雜合子:HbLepore條帶:5–15%比b地貧的臨床癥狀輕微純合子:HbLepore條帶:大約30%和b地貧的臨床癥狀相似發(fā)現(xiàn)區(qū)域及頻率:Lepore(-波士頓–華盛頓):

主要在意大利家庭發(fā)現(xiàn);也曾經(jīng)在羅馬尼亞澳大利亞以及墨西哥發(fā)現(xiàn)過.描述:HbLeporeAFSCcontroloverlayingANAlc.A2LeporeNAc.A0+

LeporeA1HbA2HbAHbFHbLepore異常結(jié)果分析Case2:

31YFemale,血紅蛋白12.8,紅細胞壓積37.4(I)A=84.1%F=1.5%A2=5.5%31YFemale,Hgb12.8,Hematocrit37.4(II)AlkAcidFSCA2CSF?-thalassemia-輕型A2AAAACPCPA=93.4%,F=1.1%,A2=5.5%HbA92.5%HbF2.6HbA24.9%HbFHbAHbA267YfemalefromTunisia,Hgb9.1,hematocrit28,MCV62小紅細胞癥;betathalassemia輕型HbH4%HbA94.7%HbA21.3%HbAHbA2HbHChild9Y,fromLaos,Hgb8,hematocrit27.9,MCV54.1嚴重小紅細胞癥;血紅蛋白H病，需要基因篩查HbHandBart’s-Alpha-thalassemia

HBarts

Case1:

13YMale,Hgb8.1,Hct24.0(I)A2=6.1%S=82.8%Case1:13YMale,Hgb8.1,Hematocrit24.0(II)AlkAcidFSCSA2+FCSFS

HgbF/S,A2=4.6%+betathalassemiaminorA2AFACPCPCase2:

65YMale,Hgb9.4,Hematocrit27.3(I)Co-migrationwithA2A=62.1%A2=31.7%*Case2:HbEMigratesSeparatelyFromHbA2

β26Glu→Lys21Y,pregnantwoman,Hgb13.1,hematocrit38.6HbA95%HbF2.1%HbA22.9%Normalpattern,HbFslightlyincreased(pregnancy)Baby2monthsold,fatherfromMartinique,motherfromCentralAfrica,Hgb11,hematocrit29.8HbF49.5%HbS25.9%HbA21.8%HbC22.8%HbFHbSHbA2HbCSCcompoundheterozygotyDiabeticpatient,54Y,Hgb14.5,hematocrit43.5,MCV88HbA1cmeasurement(HPLCTosoh)HbA54.7%HbX41.7%HbA23.6%HbAHbA2HbXNormalhemogram;compatiblewithheterozygoteA/D;TobeidentifiedbygenotypingHbA51.8%HbA22.9%HbC35.9%HbAHbA2HbCDiabeticpatient,61Y,Hgb11.6,hematocrit34.8,MCV85Slightanemia;compatiblewithheterozygoteA/CTobeidentifiedbygenotypingAdoptedchild,4Y,originatedfromHaiti,Hgb10.9,Hematocrit31.3,MCV76.9HbA97.5%HbA21.4%HbX1.1%HbAHbA2HbXSlightanemia;heterozygousDeltamutation,asymptomaticDiabeticpatient,73Y,Hgb10.2,hematocrit30.8,MCV87.3Alphachainmutation;genotypingconfirmation:HbWinnipega75AspTyrHbA-WiHbA2-WiHbAHbA2HbA90.3%HbF3.8%HbA25.9%HbAH