高三生物一輪復(fù)習課件【知識導(dǎo)圖+精講專練】細胞工程復(fù)習

1.圍繞細胞工程各技術(shù)手段的原理、流程、應(yīng)用等方面復(fù)盤本單元，重構(gòu)本單元思維導(dǎo)圖。2.查閱北方白犀牛繁育研究現(xiàn)狀的資料，選擇合適的現(xiàn)代生物技術(shù)人工繁育北方白犀牛，建立人與自然協(xié)調(diào)發(fā)展的生態(tài)觀。3.運用細胞工程的原理、技術(shù)，解決作物脫毒、紫杉醇工廠化生產(chǎn)、育種、人造皮膚移植、優(yōu)良種畜大量繁殖等生產(chǎn)生活實際問題。

重構(gòu)拓展

——重構(gòu)細胞工程體系動物細胞工程思維導(dǎo)圖構(gòu)建要求：以單克隆抗體的制備為核心進行構(gòu)建，先梳理核心，然后構(gòu)建相關(guān)的內(nèi)容，找到聯(lián)系，整體性突破，請上傳到細胞工程電子學程單元重構(gòu)拓展的單元知識重構(gòu)提交卡中參考：單克隆抗體流程圖，標出流程中原理、所有注意事項、單克隆抗體的特點等體液免疫過程等相關(guān)內(nèi)容動物細胞培養(yǎng)原理、過程、培養(yǎng)條件、注意事項梳理動物細胞融合的相關(guān)內(nèi)容應(yīng)用或考察的情境載體免疫學基礎(chǔ)基礎(chǔ)技術(shù)關(guān)鍵技術(shù)實踐可以結(jié)合自己的理解進一步再重構(gòu)創(chuàng)新，明天上課推出榜樣引領(lǐng)梳理構(gòu)建重點內(nèi)容提示：1.簡述植物組織培養(yǎng)的原理和過程。2.簡述植物體細胞雜交的原理和過程。3.舉例說明植物細胞工程的應(yīng)用。4.簡述動物細胞培養(yǎng)的條件、過程及應(yīng)用。5.概述單克隆抗體的制備及應(yīng)用。6.簡述動物體細胞核移植的過程及應(yīng)用。6.簡述胚胎形成經(jīng)過受精及胚胎早期發(fā)育過程。7.簡述胚胎工程技術(shù)包括體外受精、胚胎移植和胚胎分割等。結(jié)合教材和課件梳理細胞工程的基礎(chǔ)知識，邊梳理邊進行構(gòu)建

植物細胞工程

細胞工程是指應(yīng)用細胞生物學、分子生物學和發(fā)育生物學等多學科的原理和方法，通過細胞器、細胞或組織水平上的操作，有目的地獲得細胞、組織、器官、個體或其產(chǎn)品的一門綜合性的生物工程。1.原理方法：________________________________；2.操作水平：________________________________；3.目的：____________________________________；4.分類：____________________________________；細胞生物學、分子生物學和發(fā)育生物學細胞器、細胞或組織水平獲得特定的細胞、組織、器官、個體或其產(chǎn)品植物細胞工程、動物細胞工程細胞工程的概念（P31）第2章細胞工程植物組織培養(yǎng)植物細胞的全能性條件步驟應(yīng)用常用方法、應(yīng)用-制備單克隆抗體體外受精胚胎移植胚胎分割細胞工程植物細胞工程動物細胞工程胚胎工程植物體細胞雜交技術(shù)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物體細胞核移植理論基礎(chǔ)：受精和早期胚胎發(fā)育常用技術(shù)常用方法、應(yīng)用-培育雜種植株(1)體細胞全能性與細胞分化程度：分化程度低的＞分化程度高的。(2)體細胞全能性與細胞分裂能力：分裂能力強的＞分裂能力弱的。(3)不同類型細胞的全能性：受精卵＞生殖細胞＞體細胞；

受精卵＞干細胞＞體細胞(4)不同生物細胞的全能性：植物細胞＞動物細胞。

細胞具有全能性的原因：高度分化的細胞仍含有該物種的全部遺傳信息，具有發(fā)育成完整個體所需要的全套基因。細胞的全能性2．生長發(fā)育過程中細胞沒有表現(xiàn)全能性的原因在特定的時間和空間條件下，細胞中的基因會

。選擇性地表達實例：胡蘿卜韌皮部細胞發(fā)育成完整植株受精卵發(fā)育成個體（動植物）蜜蜂受精卵發(fā)育成工蜂，卵細胞發(fā)育成雄峰不體現(xiàn)全能性的實例：芽原基只能發(fā)育為芽，葉原基只能發(fā)育為葉。種子萌發(fā)選擇性必修3-P34

——細胞經(jīng)分裂和分化后，仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各種細胞的潛能，即細胞具有全能性。案例：菊花的組織培養(yǎng)

（1）材料的選取

同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結(jié)果。菊花的組織培養(yǎng)一般選擇幼嫩的菊花莖段。

消毒：雙手、超凈工作臺臺面——酒精外植體（幼嫩的莖段）——酒精、無菌水、次氯酸鈉

幼苗生長環(huán)境——蛭石或珍珠巖

外植體插入脫分化培養(yǎng)基——酒精燈火焰旁滅菌：培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基（脫分化培養(yǎng)基、誘導(dǎo)生芽培養(yǎng)基、誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基)經(jīng)常選擇根尖（分生區(qū)）、莖的韌皮部（形成層）等分裂能力強、分化程度低，全能性高，容易誘導(dǎo)形成愈傷組織1.實驗原理①植物細胞一般具有________；全能性②在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導(dǎo)下，已經(jīng)分化的細胞可以經(jīng)過________和________，形成________，長出_________，進而發(fā)育成______________；脫分化再分化胚狀體芽和根完整的植株③植物激素中________和_____________是啟動____________、__________和_________的關(guān)鍵激素，它們的_____、_____等都會影響植物細胞的發(fā)育方向；生長素細胞分裂素細胞分裂脫分化再分化濃度比例案例：菊花的組織培養(yǎng)過程：消毒取材接種培養(yǎng)移栽用酒精擦拭雙手和超凈工作臺臺面。將流水充分沖洗后的外植體（幼嫩的莖段）。將消過毒的外植體置于無菌的培養(yǎng)皿中，用無菌濾紙吸去表面的水分。用解剖刀將外植體切成0.5～1cm長的小段。在酒精燈火焰旁，將外植體的1/3～1/2插入誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基中。用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上作好標記。將接種了外植體的錐形瓶或植物組織培養(yǎng)瓶置于18～22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。定期觀察和記錄愈傷組織的生長情況。15～20d后，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基上。長出芽后，再將其轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基上，進一步誘導(dǎo)形成試管苗。移栽前先打開封口膜或瓶蓋，讓試管苗在培養(yǎng)箱內(nèi)生長幾日。用流水清洗掉根部的培養(yǎng)基后，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中，待其長壯后再移栽入土。每天觀察記錄生長情況，適時澆水、施肥，直至開花。探究·實踐70%酒精30S無菌水2-3次次氯酸鈉溶液30min2-3次無菌水洗切割與接種生長素/細胞分裂素

結(jié)果比值高(＞1)比值低(＜1)比值適中(=1)有利于根的分化，抑制芽的形成有利于芽的分化，抑制根的形成促進愈傷組織的形成植物組織培養(yǎng)的條件：①離體②無菌防止雜菌生長。

一方面與培養(yǎng)物競爭營養(yǎng)；另一方面產(chǎn)生有害物質(zhì)危害培養(yǎng)物。③培養(yǎng)基④適宜的外界條件脫分化避光；再分化適宜光照MS培養(yǎng)基：一定不能倒置蔗糖：提供能量、調(diào)節(jié)滲透壓。①____________：N、P、S、K、Ca、Mg等。

②____________：B、Mn、Cl、Zn、Fe、Mo、等。③有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、以及________（葡萄糖/蔗糖）等。

蔗糖大量元素微量元素1.過程A細胞B細胞纖維素酶果膠酶1.去壁：酶解法正在融合的原生質(zhì)體再生出細胞壁2.誘融物理法：化學法：電融合法、離心法聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高PH融合法等脫分化再分化移栽植物細胞融合植物組織培養(yǎng)雜種植株愈傷組織A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體移栽后的植株三、植物體細胞雜交技術(shù)利用酶的專一性。細胞膜具有流動性

融合的原生質(zhì)體重新產(chǎn)生細胞壁，形成雜種細胞。是雜交成功的標志優(yōu)點：使用方便，誘導(dǎo)細胞融合的頻率高缺點：有一定的毒性對某些細胞不適用（如卵細胞）纖維素酶和果膠酶的酶溶液中一般加入一定濃度的無機鹽離子和甘露醇，試分析原因？使溶液具有一定的滲透壓，防止原生質(zhì)體吸水過多而漲破，保持原生質(zhì)體正?？蛇z傳變異類型：染色體數(shù)目變異④⑤利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細胞培育成雜種植株。植物體細胞雜交技術(shù)植物體細胞雜交育種雜交育種誘導(dǎo)多倍體四倍體四倍體二倍體意義：打破遠緣親本雜交不親和的障礙。大大擴展雜交的親本組合范圍。番茄馬鈴薯植株是異源四倍體。③融合的原生質(zhì)體重新產(chǎn)生細胞壁，形成雜種細胞。是雜交成功的標志。思考：1、參與此過程中的主要細胞器是？2、雜種細胞的染色體數(shù)是多少？3、雜種細胞染色體組數(shù)是多少？4、融合后，培養(yǎng)基中有幾種類型的細胞？高爾基體(線粒體)兩親本染色體數(shù)之和兩親本染色體組數(shù)之和A、B、AA、BB、AB。（只考慮兩兩融合）需要進一步篩選無性繁殖，育種過程中不遵循孟德爾定律驗證再生出新壁的實驗：質(zhì)壁分離和質(zhì)壁分離復(fù)原實驗一、植物繁殖的新途徑植物細胞工程的應(yīng)用二、作物新品種的培育三、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)1.快速繁殖2.作物脫毒1.單倍體育種2.突變體的利用a.概念b.優(yōu)點c.實際應(yīng)用a.原因b.方法a.方法；b.過程c.優(yōu)點；a.如何產(chǎn)生；b.利用；c.原理；d.成就；e.優(yōu)缺點a.什么是次生代謝物b.什么是細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)c.細胞產(chǎn)物種類d.為什么一般組織培養(yǎng)到愈傷組織即可①用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，被稱為植物的快速繁殖技術(shù)，也叫作微型繁殖技術(shù)。②特點：A.無性繁殖，保持優(yōu)良品種的遺傳特性B.高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖C.可實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)莖尖：病毒極少的分生區(qū)組織。染色體（數(shù)目）變異植物細胞的全能性a.極大地縮短了育種的年限，節(jié)約了大量的人力和物力b.可作為進行體細胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料注意?。?！單倍體育種的目的不是獲得單倍體本身，因為單倍體是植株矮小，且高度不育的，在生產(chǎn)上沒有實際價值，需誘導(dǎo)單倍體（種子階段或幼苗階段）的染色體數(shù)目加倍。對植物組織培養(yǎng)過程中得愈傷組織進行誘變處理，促其發(fā)生突變，誘導(dǎo)分化成植株，篩選對人們有利突變體,進而培育新品種植物組織培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)細胞一直處于不斷增值的狀態(tài)，易受到培養(yǎng)條件和誘變因素（如射線、化學物質(zhì)等）的影響而產(chǎn)生突變?；蛲蛔兒椭参锛毎娜苄?。植物細胞培養(yǎng)①材料：最好是愈傷組織初生代謝：生物生長生存所必需的代謝活動。產(chǎn)物：如糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等。次生代謝：非生物生長所必需，在特定條件下進行。產(chǎn)物：產(chǎn)物：一類小分子有機化合物。

動物細胞培養(yǎng)1.概念：2.原理：3.條件：4.過程：從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術(shù)。一、動物細胞培養(yǎng)（1）營養(yǎng)：糖類、氨基酸、無機鹽、維生素、血清等

①合成培養(yǎng)基：將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴格配制的培養(yǎng)基。動物細胞培養(yǎng)常用培養(yǎng)液

②為何需要加入血清等一些天然成分？——（補充促細胞生長因子及其他活性物質(zhì)）（2）無菌、無毒的環(huán)境：

無菌：①培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行滅菌處理。

②在無菌環(huán)境下操作。

無毒：培養(yǎng)液定期更換。（目的:清除代謝物,防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。）（3）溫度、PH和滲透壓：36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。①O2作用:是細胞代謝必需的。

②CO2的主要作用:是維持培養(yǎng)液的pH。③進行細胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)維持細胞正常的形態(tài)和功能如何防止培養(yǎng)過程中的微生物污染？在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素細胞增殖（有絲分裂）4.過程：注意：1.為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？2.組織塊怎樣制成細胞懸液？3.胃蛋白酶行嗎？4.體外培養(yǎng)的動物細胞分類？細胞培養(yǎng)一段時間后，分裂會受阻的原因？5.動物細胞生長的特點：用機械的方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶將組織分散成單個細胞細胞分化程度低，增殖能力強，容易培養(yǎng)胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，在此環(huán)境中胃蛋白酶會失去活性。懸浮生長的細胞分裂受阻的原因：細胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等貼壁生長的細胞分裂受阻的原因：

①細胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等。②發(fā)生接觸抑制細胞貼壁、接觸抑制Ⅰ.從動物體取出的成塊組織中，細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖；Ⅱ.能使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進行物質(zhì)交換,保證O2與營養(yǎng)供應(yīng)和代謝物及時排出。不是，使用胰蛋白酶時，要控制好作用時間，因為胰蛋白酶不僅能分解細胞間的蛋白質(zhì)，長時間作用還會分解細胞膜蛋白等，對細胞造成損傷是時間越長越好嗎？4.過程：注意：6.概念理解：細胞貼壁、接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)7.怎樣進行傳代培養(yǎng)？8.動物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用？原代培養(yǎng)——初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)——分瓶后的培養(yǎng)①懸浮培養(yǎng)的細胞：直接用離心法收集②貼壁細胞：重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集人造皮膚的構(gòu)建（貼壁生長

接觸抑制

培養(yǎng)瓶光滑）、有毒物質(zhì)檢測（畸變率）

通常將________的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)_____后的________稱為原代培養(yǎng)；分瓶之前處理初次培養(yǎng)②傳代培養(yǎng)：將______的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)；分瓶后______體外培養(yǎng)的細胞需要___________________才能生長增殖，這類細胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的____上，這種現(xiàn)象稱為細胞貼壁；大多數(shù)貼附于某些基質(zhì)表面瓶壁

當_____細胞生長到_____________時，細胞通常會_____________；貼壁表面相互接觸停止分裂增殖③細胞貼壁：④接觸抑制：①原代培養(yǎng)：在沉淀中得到細胞，同時去掉上清液中的胰蛋白酶1.干細胞的分類和分布2.功能---有自我更新能力和分化潛能3.應(yīng)用三、干細胞培養(yǎng)全能干細胞多能干細胞專能干細胞具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能一般認為，成體干細胞具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力4、胚胎干細胞應(yīng)用：體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細胞誘導(dǎo)多能干細胞iPS臨床治療人類疾病多種體細胞定向誘導(dǎo)分化如：白血病、帕金森病、阿而茨海默病等誘導(dǎo)方法：①將特定基因或特定蛋白導(dǎo)入細胞（成纖維細胞以及已分化的T細胞、B細胞均可）；②用小分子化合物誘導(dǎo)形成。（3）誘導(dǎo)多能干細胞優(yōu)點：①誘導(dǎo)過程無須破壞胚胎；②iPS細胞可以來源于病人自身的體細胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。6.ES（胚胎干細胞）特點：細胞體積小，細胞核大，核仁明顯。在體外培養(yǎng)條件下可以只增殖不分化。拓展（了解）：正常細胞能否一直傳代培養(yǎng)下去？P23T4C

不可以；細胞的傳代培養(yǎng)一般傳至10代后就不易傳下去，這時細胞能保持細胞正常的二倍體核型；傳至10-50代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發(fā)生變化，這一階段的細胞稱為細胞株；繼續(xù)傳代培養(yǎng)時，少部分細胞會克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細胞已經(jīng)發(fā)生了突變,遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，正在朝著等同于癌細胞的方向發(fā)展，這一階段的細胞稱為細胞系，細胞系的遺傳物質(zhì)一定改變了。1)“滅活病毒”中滅活的具體含義是什么？用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)2)滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理是什么？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。滅活病毒誘導(dǎo)法P25T12

動物細胞融合單克隆抗體制備①未融合的細胞②多種雜交細胞雜交瘤細胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞（能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞）用特定的選擇培養(yǎng)基第一次篩選克隆化培養(yǎng)、抗體檢測第二次篩選（可進行多次）注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細胞培養(yǎng)液中注射特定的抗原多種B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)單克隆抗體制備過程圖1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷方法：反復(fù)注射抗原

缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差2.單克隆抗體制備的過程中應(yīng)用到的技術(shù)動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)雜交瘤細胞并不純，因為從脾臟獲得的B淋巴細胞不純（既有未免疫的B淋巴細胞，又有能產(chǎn)其他抗體的B淋巴細胞，以及能產(chǎn)所需抗體的B淋巴細胞），因此要進行第二次篩選；未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡用96孔板培養(yǎng)，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下，進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（進行多次篩選）思考：1.包括的階段及原理：2.注射特定抗原的目的：3.誘導(dǎo)融合的方法、培養(yǎng)液中細胞類型（融合只考慮兩兩融合的情況）：4.第一次篩選和第二次篩選的目的和方法？5.雜交瘤細胞的特點？6.大量增殖雜交瘤細胞獲得單抗的方法7.單克隆抗體的優(yōu)點8.單克隆抗體的應(yīng)用1.動物細胞融合（細胞膜的流動性）、動物細胞培養(yǎng)（細胞增殖）2.從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞3.滅活病毒誘導(dǎo)法B淋巴細胞；骨髓瘤細胞；雜交瘤細胞；B—B細胞；瘤—瘤細胞4.①篩選出雜交瘤細胞，方法——選擇培養(yǎng)基②篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞，方法——克隆化培養(yǎng)、抗體檢測5.既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生(所需)抗體6.體外培養(yǎng)、注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖7.能準確識別抗原的細微差異，與特定的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，可大量制備。8.

①作為診斷試劑（早早孕診斷試劑盒用同位素或熒光標記的單克隆抗體定位腫瘤等）②運載藥物③治療疾病3.單克隆抗體制備的過程：思考：1.ADC的組成成分？抗體和藥物各有什么作用？2.ADC在臨床應(yīng)用上有何優(yōu)勢？分析：單克隆抗體的應(yīng)用之——運載藥物（抗體--藥物偶聯(lián)物）1.ADC由抗體、接頭和藥物組成?？贵w主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細胞。2.優(yōu)勢：靶點清楚、毒副作用小(主要用于癌癥治療)如：單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)2.除了細胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？①可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療；②一些作用于細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進行治療項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理用_____________和__________去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合用____________使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合誘導(dǎo)融合的方法

雜種植株（或雜交細胞）特點雜種植株含有兩種生物的遺傳物質(zhì)

雜交細胞具有意義和用途克服

不親和的障礙，獲得雜種_________

突破_________________，使__________成為可能。獲得雜交細胞，用于_______細胞膜的流動性植物細胞全能性細胞膜的流動性纖維素酶果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶物理法電融合化學法：PEG物理法：電融合化學法：PEG生物法：滅活的病毒遠緣雜交兩個或多個細胞的遺傳物質(zhì)遠緣雜交單克隆抗體制備植株有性雜交局限總結(jié)：比較植物體細胞雜交和動物細胞融合3.下圖為科研工作者利用小鼠制備H7N9禽流感病毒單克隆抗體的過程,請據(jù)圖回答有關(guān)問題。(1)圖中將H7N9病毒抗原基因?qū)胧荏w細胞常用的方法是

。

(2)在受體細胞的培養(yǎng)過程中,為了防止污染,通常還要在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的

,其培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相比,特有的天然成分是

。

(3)圖中X細胞一般選用

,與植物體細胞雜交相比,誘導(dǎo)X細胞和Y細胞融合還可采用

。

(4)單克隆抗體的制備過程需要經(jīng)過多次篩選,首先用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選出

,最終獲得足夠數(shù)量的

的細胞，選出符合要求的細胞后,可在體外條件下或注射到

進行增殖培養(yǎng)。

(5)利用上述技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體可制作成診斷盒,用于準確、快速診斷H7N9禽流感病毒的感染者,這種診斷運用了

雜交技術(shù),這體現(xiàn)了單克隆抗體

的特性。

顯微注射技術(shù)抗生素動物血清骨髓瘤細胞

滅活的病毒雜交瘤細胞能產(chǎn)生所需抗體小鼠腹腔抗原—抗體特異性強、靈敏度高雜交瘤細胞的篩選問題--第一次篩選P28T5已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細胞在培養(yǎng)皿中混合，加促融劑促進細胞融合，獲得雜種細胞，并生產(chǎn)單克隆抗體。請回答：1.從題干可看出人淋巴細胞的DNA合成途徑有？骨髓瘤細胞有？2.加入促融劑后培養(yǎng)基中有哪些細胞類型？3.加入氨基蝶呤后哪些細胞能生長？哪些細胞不能生長？為什么？D和S只有D未融合的細胞、融合的同種核的細胞、雜交瘤細胞加入氨基蝶呤后D途徑被阻斷，未融合的骨髓瘤細胞和融合的同種核的骨髓瘤細胞由于不能合成DNA，所以不能增殖未融合的淋巴細胞和融合的同種核的淋巴細胞僅有S途徑，但一般不分裂增殖雜交瘤細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA，能不斷分裂增殖體內(nèi)培養(yǎng)的優(yōu)點：不需再提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境(4)IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族，是機體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細胞產(chǎn)生的抗體。IgM/IgG檢測試劑盒的原理是____________________，通過檢測人體內(nèi)相應(yīng)抗體間接證明是否感染。被病毒感染后，機體會產(chǎn)生一系列的變化來抵御這種入侵，其中IgM和IgG的含量會發(fā)生如圖所示變化。通過對COVID－19患者研究發(fā)現(xiàn)，病毒侵入人體后，大約需要5～7天產(chǎn)生IgM抗體，IgG抗體在感染后10～15天時產(chǎn)生。通過檢測外周血中IgM和IgG，不僅可以鑒別是否感染，還可以辨別檢測者是近期感染或者是既往感染。當核酸檢測結(jié)果為陽性，IgM(＋)IgG(－)時，可判斷檢測者為________________；已治愈的患者檢測結(jié)果應(yīng)為___________________。

抗原抗體特異性結(jié)合

近期感染

核酸檢測結(jié)果為陰性，IgM（-）IgG（+）

動物體細胞核移植技術(shù)與克隆動物①____細胞的______在___________中___________其_______________，這導(dǎo)致了___________；②對非人靈長類動物胚胎進行操作的___________一、動物細胞核移植技術(shù)1.概念：2.原理：將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)。思考：①細胞核的來源

②去核卵母細胞動物細胞核的全能性減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）的核：紡錘體—染色體復(fù)合物。去核指去除該復(fù)合物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物動物胚胎細胞分化程度低，表現(xiàn)全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難因此動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植非人靈長類動物體細胞核移植的困難原因供體細胞核去核卵母細胞不能完全恢復(fù)分化前的功能狀態(tài)胚胎發(fā)育率低技術(shù)尚不完善具體分析過程：在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變、染色體變異等可遺傳變異；教材54頁

胚胎工程

一、胚胎工程框架操作對象技術(shù)手段理論基礎(chǔ)哺乳動物受精和早期胚胎發(fā)育的規(guī)律二、受精體內(nèi)受精體外受精過程過程精子獲能雌性動物的生殖道精子的獲取獲能液（含肝素、Ca2+載體等）卵子的準備輸卵管（發(fā)育到MII期）卵母細胞的采集從卵巢中獲得——體外培養(yǎng)至MII期超數(shù)排卵（促性腺激素）—不需體外培養(yǎng)受精階段輸卵管受精適當?shù)呐囵B(yǎng)液受精過程受精階段①精子如何穿越卵細胞膜外結(jié)構(gòu)②防止多精入卵的兩個屏障③透明帶反應(yīng)具體表現(xiàn)④卵細胞膜反應(yīng)具體表現(xiàn)⑤透明帶反應(yīng)發(fā)生時間⑥卵細胞膜反應(yīng)發(fā)生時間⑦雄原核的形成

精子入卵后，尾部____，原有的核膜____并______________，最后形成一個_________________的核，叫做雄原核釋放多種酶，溶解這些結(jié)構(gòu)透明帶反應(yīng)、卵細胞膜反應(yīng)精子觸及卵細胞膜的瞬間，透明帶會迅速發(fā)生生理反應(yīng)，阻止后來的精子進入透明帶精子入卵后，卵細胞膜會立即發(fā)生生理反應(yīng)，拒絕其他精子再進入卵內(nèi)精子觸及卵細胞膜的瞬間精子入卵后脫離破裂形成一個新的核膜比原來精子的核還大⑧雌原核的形成

精子入卵后,被____的卵子完成_________，___________后，形成雌原核⑨受精的標志*a.___________________b.________________________*多數(shù)哺乳動物的第一極體不進行減數(shù)分裂Ⅱ，因而不會形成兩個第二極體，觀察到的兩個極體為一個第一極體一個第二極體；9.受精完成的標志：______________________激活減數(shù)分裂Ⅱ排出第二極體觀察到兩個極體（透明帶和卵細胞膜之間）觀察到雌、雄原核雌、雄原核核膜消失，形成合子受精卵卵裂期桑椹胚囊胚原腸胚（內(nèi)含原腸腔）胎兒形成滋養(yǎng)層外胚層中胚層內(nèi)胚層原腸腔：在透明帶內(nèi)進行有絲分裂，細胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積并不增加，或略有減少。：由全能細胞構(gòu)成，細胞數(shù)在32個左右，排列緊密，形似桑椹內(nèi)細胞團：發(fā)育成胎兒各組織滋養(yǎng)層細胞：發(fā)育成胎膜和胎盤：最初在輸卵管進行有絲分裂主要特點：④其他表現(xiàn)每個細胞體積________DNA總數(shù)目_______每個細胞的核DNA數(shù)目_____有機物總量____有機物種類_____不斷減小不斷增加不變減少增加①場所：②分裂方式③特點a.b.隨著胚胎進一步發(fā)育，胚胎內(nèi)部出現(xiàn)了含有液體的囊腔—囊胚腔細胞開始出現(xiàn)分化孵化：

囊胚進一步擴大，會導(dǎo)致透明帶破裂，胚胎從透明帶中伸展出來，這一過程叫做孵化；囊胚期的內(nèi)細胞團細胞具有全能性逐漸分化形成各種組織、器官等外胚層：表皮及其附屬結(jié)構(gòu)、神經(jīng)系統(tǒng)、感覺器官中胚層：皮膚真皮、脊索、肌肉、骨骼、內(nèi)臟器官外膜、循環(huán)系統(tǒng)、排泄系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)內(nèi)胚層：消化道、呼吸道上皮、肝胰等腺體三、胚胎發(fā)育桑葚胚

①概念：當卵裂產(chǎn)生的子細胞逐漸形成致密的細胞團，形似桑葚時，這時的胚胎稱為桑葚胚②特點（了解）：這一階段及之前的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，屬于全能細胞四、胚胎移植1.概念：將通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術(shù)。（1）對概念的理解：①操作對象：②受體：③地位（在胚胎工程中所處的位置）：胚胎（胚胎的來源）：雌性動物體內(nèi)的早期胚胎、體外受精、核移植、轉(zhuǎn)基因同一物種、與供體處于相同的生理狀態(tài)、雌性動物胚胎工程的最終技術(shù)環(huán)節(jié)試管動物:是指通過人工操作使卵子在體外受精，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再進行移植產(chǎn)生的個體。體外受精卵母細胞的采集精子的獲取受精意義：是提高動物繁殖能力的有效措施，可以為胚胎移植提供可用胚胎1.流程：2.供受體：(1)選擇：(2)兩次處理：(3)兩次檢查：3.生理學基礎(chǔ)：4.胚胎移植實質(zhì)：5.胚胎移植的優(yōu)勢：①供體:遺傳性狀優(yōu)良、生產(chǎn)能力強②受體:同一物種，健康體質(zhì)，正常繁殖能力①同期發(fā)情處理（供、受體母牛）：激素②超數(shù)排卵處理（供體母牛）：促性腺激素①收集胚胎后，檢查胚胎質(zhì)量

②胚胎移植后，對受體進行妊娠檢查（1）同期發(fā)情處理：使供、受體生殖器官生理變化相同，生理環(huán)境相同（2）胚胎收集的基礎(chǔ)：早期胚胎處于游離狀態(tài)（3）胚胎在受體內(nèi)存活的基礎(chǔ)：不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)（4）受體不影響胚胎的遺傳特性早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力（①供體的主要職能是產(chǎn)生具有優(yōu)良遺傳特性的胚胎；受體負責妊娠和孕育；大大縮短供體的繁殖周期。②超數(shù)排卵增加供體的后代數(shù)）2.過程：胚胎工程的最終技術(shù)環(huán)節(jié)桑葚胚或囊胚階段的胚胎（雌性激素）處于桑椹胚或囊胚時期五、胚胎分割1.概念：采用機械方法將胚胎分割成２等份、４等份或８等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。2.生殖方式：

3.材料：發(fā)育良好，形態(tài)正常的

或

。

4.在對囊胚進行分割時，在注意將

均等分割。設(shè)備：體視顯微鏡和顯微操作儀，操作液，分割針、分割刀5.分割后胚胎去向：可直接移植給受體，或體外培養(yǎng)后移植。

桑椹胚囊胚內(nèi)細胞團若不能將內(nèi)細胞團均等分割，會出現(xiàn)含內(nèi)細胞團多的部分正常發(fā)育的能力強，少的部分發(fā)育受阻或發(fā)育不良，甚至不能發(fā)育等問題。若需要特定性別的后代，則在分割過程中需要對胚胎進行________，取樣部位為_______，鑒定方法為_________；性別鑒定滋養(yǎng)層做DNA分析比較項目試管動物克隆動物技術(shù)基礎(chǔ)體外受精、胚胎移植核移植技術(shù)、細胞培養(yǎng)、胚胎移植實例試管牛多莉羊過程生殖方式有性生殖無性生殖遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)來自雙親兩個個體遺傳物質(zhì)大部分來自供核生物體意義充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力，縮短供體本身的繁殖周期加速家畜遺傳改良進程，挽救瀕危物種等胚胎分割的優(yōu)點（意義）：可以促進優(yōu)良動物品種的繁殖；產(chǎn)生的遺傳性狀相同的后代是進行遺傳學研究的寶貴材料；在胚胎移植前，進行性別鑒定、遺傳病篩查等，對于人工控制動物性別、動物繁育健康后代有重要意義胚胎移植的局限性利用核移植技術(shù)、體外受精（試管嬰兒）、胚胎分割獲得胚胎，生殖方式一樣嗎？采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胎的可能性是有限的，分割次數(shù)越多，分割后胚胎成活的概率越小，目前仍然以二分胚胎的分割和移植效率最高不一樣；核移植——無性生殖、體外受精——有性生殖、胚胎分割——無性生殖生物技術(shù)在造福人類社會的同時也可能帶來安全與倫理問題章節(jié)導(dǎo)圖轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性引發(fā)社會的廣泛關(guān)注我國禁止生殖性克隆人世界范圍內(nèi)應(yīng)全面禁止生物武器日常生活中的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品轉(zhuǎn)基因技術(shù)在應(yīng)用過程中帶來的影響轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性轉(zhuǎn)基因成果令人嘆為觀止對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品安全性的爭論理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)生殖性克隆與治療性克隆生殖性克隆人面臨的倫理問題我國禁止生殖性克隆人警惕用新技術(shù)研究生殖性克隆人生物武器的種類、特點和危害我國鎮(zhèn)府的態(tài)度舉例：轉(zhuǎn)基因耐儲藏番茄利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)顯著抑制番茄中乙烯形成酶的活性和乙烯的生成量，從而育成了轉(zhuǎn)基因耐儲藏番茄。（1）將生長激素基因、促生長激素釋放激素基因等轉(zhuǎn)入動物體內(nèi),培育了生長迅速、營養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因家禽、家畜。（2）建立某些人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型,模擬疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，為研究該疾病的致病機制和開發(fā)治療藥物提供依據(jù)，如轉(zhuǎn)基因小鼠1型糖尿病模型、轉(zhuǎn)基因小鼠原發(fā)性高血壓模型等。獲取胰島素、干擾素、白細胞介素、溶血栓劑等藥物判斷：轉(zhuǎn)基因生物和轉(zhuǎn)基因食品對人類沒有危害,全部安全？(1)基因污染是指人工組合的基因通過轉(zhuǎn)基因作物或家養(yǎng)動物擴散到其他栽培作物或自然野生物種并成為后者基因的一部分。(2)途徑:①轉(zhuǎn)基因植物的相關(guān)基因通過花粉傳播而進入附近的野生植物或鄰近的非轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物。②轉(zhuǎn)基因作物在自然條件下存活并發(fā)育成為野生的、雜草化的轉(zhuǎn)基因植物。③土壤微生物或動物腸道微生物吸收轉(zhuǎn)基因作物后獲得外源基因。知識拓展

基因污染①p102我國科學家將來自玉米的α-淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻斷淀粉儲藏使花粉失去活性，因而可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播。②還可以把外源基因轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)基因植物的葉綠體DNA中③植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子。④“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達載體轉(zhuǎn)入受體細胞中表達，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實等特定器官中徹底清除。防止基因污染的方法*[歸納提升]爭論焦點反對者觀點贊成者觀點食物安全①擔心出現(xiàn)滯后效應(yīng),擔心出現(xiàn)新的過敏原,擔心營養(yǎng)成分改變;②擔心會引發(fā)宗教信仰類爭論①多環(huán)節(jié)、嚴謹?shù)陌踩栽u價,可以保證轉(zhuǎn)基因食物的安全;②尚未發(fā)現(xiàn)因食用轉(zhuǎn)基因食物而影響人體健康的實例轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品引發(fā)的安全性爭論生物安全①可能成為“入侵的外來物種”;②可能重組出有害病原體;③有可能使雜草成為除不掉的“超級雜草”①轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物生命力有限,擴散到種植區(qū)外,會很快死亡;②要表現(xiàn)出被賦予的新性狀,必須具有一定的條件和種植技術(shù);③由于生殖隔離,難以與其他植物雜交;④花粉傳播距離有限,存活時間有限環(huán)境安全①打破物種原有界限,改變生態(tài)系統(tǒng)中能量流動和物質(zhì)循環(huán);②重組的微生物可能造成二次污染;③有毒蛋白或過敏蛋白可能通過食物鏈進入其他動物和人體內(nèi)①轉(zhuǎn)基因并不會改變生物原有的分類地位,不會破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性;②轉(zhuǎn)基因抗蟲作物的種植可減少農(nóng)藥的使用;③抗除草劑作物的種植,可保護農(nóng)田土壤環(huán)境破壞生物的多樣性破壞生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)的生態(tài)平衡?！俺聊?對生殖性克隆人研究的兩種態(tài)度觀點支持生殖性克隆人反對生殖性克隆人論據(jù)①是一項科學研究，有它自己內(nèi)在的發(fā)展規(guī)律，社會應(yīng)該允許科學家研究；②雖然現(xiàn)在人們的倫理道德觀念還不能接受這一切，但是人的觀念是可以改變的；①生殖性克隆人“有違人類尊嚴”；②生殖性克隆人是在人為地制造在心理上和社會地位上都不健全的人，嚴重地違反了人類倫理道德，是克隆技術(shù)的濫用；③克隆技術(shù)還不成熟，生殖性克隆人會面臨流產(chǎn)、死胎和畸形兒等問題，與人類傳統(tǒng)倫理道德是背道而馳的2.中國政府對生殖性克隆人實驗的四不原則不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆實驗。生殖性克隆人破壞了人類基因多樣性的天然屬性,不利于人類的生存和進化。試管動物區(qū)別：在胚胎移植前進行特定基因的檢測。聯(lián)系：二者都是體外受精,體外早期胚胎發(fā)育,再進行胚胎移植,從生殖方式上應(yīng)為有性生殖。進行基因編輯（基因的敲除或插入），有目的地改造特定基因，胚胎移植前需進行遺傳診斷設(shè)計完美嬰兒世界范圍內(nèi)應(yīng)全面禁止生物武器

三、禁止生物武器①“多莉”的誕生利用了動物體細胞核的全能性，說明在胚胎和個體發(fā)育中，細胞質(zhì)有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用，

②生產(chǎn)基因疫苗時，為減少排斥反應(yīng)，通常用人體細胞作為受體細胞；

③在培養(yǎng)胚胎干細胞時，為了抑制其分化，需加一層飼養(yǎng)層細胞，

④生物武器是指有意識的利用微生物、毒素、昆蟲侵襲敵人的軍隊、人口、農(nóng)作物或者牲畜等目標，以達到戰(zhàn)爭目的的一類武器，干擾素為淋巴因子，非生物武器。

⑤設(shè)計試管嬰兒進行遺傳病基因檢測有利于預(yù)防遺傳病的發(fā)生，但單純選擇胎兒性別是違法的，會引起性別比例失調(diào)，并違背倫理道德

⑥中國政府禁止生殖性克隆人，堅持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗），但是不反對治療性克隆人

⑦在導(dǎo)入外源基因時，外源基因插入宿主基因組的部位往往是隨機的，可能會出現(xiàn)意想不到的后果，所以一定要慎重。

⑧應(yīng)嚴格的選擇目的基因?qū)胫参?，確保表達產(chǎn)物無毒、無害，以避免產(chǎn)生對人類有害的物質(zhì)

⑨一旦發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物出現(xiàn)了安全性問題，就必須停止并銷毀重組生物正確；正確；正確；正確；正確；錯誤；基因疫苗生產(chǎn)的是質(zhì)粒DNA，不需要受體細胞，正確；正確；正確；單元網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建一、細胞工程及細胞的全能性植物細胞工程的基本技術(shù)二、植物組織培養(yǎng)技術(shù)三、植物體細胞雜交技術(shù)1.細胞工程的概念2.細胞的全能性1.植物組織培養(yǎng)的概念？2.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是什么？3.植物組織培養(yǎng)的一般過程是什么（要求會默寫）？4.理解什么是外植體、脫分化（需遮光）、愈傷組織、再分化（需光照為什么？）5.案例：菊花的組織培養(yǎng)原理、目的（了解）、具體步驟、注意事項？6.歸納細胞表現(xiàn)出全能性的條件（5條）？1.植物體細胞雜交技術(shù)的概念、原理？2.酶解法：用的什么酶，得到的是什么？3.人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的兩種方法：物理法（2個）、化學法（2個）？

此外，原生質(zhì)體融合成功的標志、植物細胞雜交成功的標志是什么？4.體細胞雜交的意義？5.植物體細胞雜交過程示意圖要熟悉（詳見ppt）？a.細胞的全能性概念？b.細胞具有全能性的原因？c.體現(xiàn)細胞的全能性的標志？d.不體現(xiàn)細胞的全能性的實例？e.不體現(xiàn)細胞的全能性的原因？f.細胞的全能性大小舉例？一、植物繁殖的新途徑植物細胞工程的應(yīng)用二、作物新品種的培育三、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)1.快速繁殖2.作物脫毒1.單倍體育種2.突變體的利用a.概念b.優(yōu)點c.實際應(yīng)用a.原因b.方法c.注意的問題a.方法；b.過程c.優(yōu)點；d.案例a.如何產(chǎn)生；b.利用；c.原理；d.成就；e.優(yōu)缺點a.什么是次生代謝物b.什么是細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)c.細胞產(chǎn)物種類d.為什么一般組織培養(yǎng)到愈傷組織即可一、概述動物細胞培養(yǎng)二、動物細胞培養(yǎng)條件三、動物細胞培養(yǎng)的過程掌握動物細胞培養(yǎng)的概念、原理、地位、關(guān)鍵操作1.動物細胞培養(yǎng)需要滿足的條件（詳見ppt）2.營養(yǎng)：什么是合成培養(yǎng)基、培養(yǎng)動物常用的培養(yǎng)基、為什么加血清3.無菌、無毒的環(huán)境：為什么培養(yǎng)液定期更換、如何防止微生物污染4.溫度、pH和滲透壓：適宜的溫度、pH是多少，維持適宜滲透壓的目的5.氣體環(huán)境：所需氣體組成、O2和CO2的作用、培養(yǎng)容器是什么、培養(yǎng)儀器是什么1.動物細胞培養(yǎng)過程示意圖（P45掌握）2.重要名詞：原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細胞貼壁、接觸抑制3.選取什么樣的材料，取材原因？4.如何制成細胞懸液？將組織分散成單個細胞的原因？將組織分散成單個細胞的方法？5.用胰蛋白酶分散細胞，可以說明什么問題？可以用胃蛋白酶處理嗎，為什么？6.酶解法較溫和，一定不會對動物細胞造成損傷，對嗎？7.體外培養(yǎng)的細胞有哪兩大類？兩類細胞的生長有什么特點？8.分瓶進行傳代培養(yǎng)的原因？分瓶的具體做法是什么（注意：兩類細胞處理收

集方式不同）？離心的作用是什么？9.動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的比較（詳見PPT表格）四、干細胞培養(yǎng)及應(yīng)用1.干細胞分布在哪里、干細胞分哪兩類2.胚胎干細胞：分布、特點、應(yīng)用實例（了解）3.成體干細胞：分布、常見類型、特點、實例（了解）4.干細胞的應(yīng)用：造血干細胞、神經(jīng)細胞、誘導(dǎo)多能干細胞的應(yīng)用（了解）5.干細胞應(yīng)用面臨的問題是什么6.誘導(dǎo)多能干細胞的局限性、概念、優(yōu)點、應(yīng)用（了解）、制備iPS細胞的其他方法、iPS細胞的來源一、動物細胞融合技術(shù)動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體二、單克隆抗體的