微生物的培養(yǎng)幻燈片

微生物的培養(yǎng)幻燈片第一頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌主要是以二分裂的方式進(jìn)行增殖（如右圖）2.細(xì)菌的繁殖3.細(xì)菌的菌落⑴.定義：?jiǎn)蝹€(gè)或者少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。第二頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日幾種菌落及其形態(tài)第三頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日幾種菌落及其形態(tài)第四頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。1.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)2.培養(yǎng)基的種類(lèi)和用途3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。第五頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類(lèi)、用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類(lèi)、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類(lèi)的微生物鑒別不同種類(lèi)微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第六頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基back第七頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長(zhǎng)因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。第八頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日微生物需要的五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)是：㈡.微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功能1.碳源2.氮源3.生長(zhǎng)因子4.無(wú)機(jī)鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。①無(wú)機(jī)碳源：CO2；NaHCO3等②有機(jī)碳源：糖類(lèi)、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來(lái)源：⑶.作用：1.微生物的碳源第九頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日①無(wú)機(jī)氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來(lái)源：⑶.作用：3.生長(zhǎng)因子⑶.常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第十頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日㈢.培養(yǎng)基（三）培養(yǎng)基配置原則1）目的要明確2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)3）PH要適宜第十一頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日㈣.無(wú)菌技術(shù)(注意)1.無(wú)菌技術(shù)的概念無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。⑴消毒定義：利用溫和的化學(xué)或物理方法，殺死部分微生物的過(guò)程。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別⑵滅菌的定義：以強(qiáng)烈的化學(xué)試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。第十二頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒：紫外照射30min，房間、儀器設(shè)備 （噴灑石碳酸和煤酚皂）⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法第十三頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：第十四頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是

消毒法；100℃煮沸5-6min（2）對(duì)一些不耐高溫的液體，則使用

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑

等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用

進(jìn)行物理消毒。（4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用

進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用

進(jìn)行消毒。第十五頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是

煮沸消毒法；100℃煮沸5-6min（2）對(duì)一些不耐高溫的液體，則使用

巴氏

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用

紫外線進(jìn)行物理消毒。（4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用75%酒精進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。第十六頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用

滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用

滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。第十七頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

灼燒

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽

滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。第十八頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日第十九頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日第二十頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日二.實(shí)驗(yàn)操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計(jì)算2.稱(chēng)量3.溶化4.滅菌:

將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種。第二十一頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日倒平板操作第二十二頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法平板劃線的操作第二十三頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日第二十四頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)則的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。第二十五頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月28日第二十六頁(yè)，共三十頁(yè)，2022年，8月2