藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)用

PPT內(nèi)容第1頁(yè)/共56頁(yè)第一頁(yè)，共57頁(yè)。藥物選擇

受試物：應(yīng)提供受試物的名稱、劑型、批號(hào)、來(lái)源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試物及劑型應(yīng)盡量與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究的一致，并附研制單位的質(zhì)檢報(bào)告。參比物：必須引用參比藥品的資料，該藥品已經(jīng)在中國(guó)獲得上市授權(quán)，具有全面的資料。申請(qǐng)者應(yīng)該對(duì)參比藥品的選擇說(shuō)明理由。

第2頁(yè)/共56頁(yè)第二頁(yè)，共57頁(yè)。藥物選擇

對(duì)于仿制藥品申請(qǐng)，受試藥品通常與可從市場(chǎng)獲得的參比藥品相應(yīng)的劑型比較。該藥品已有多個(gè)上市劑型時(shí)，如果能在市場(chǎng)上獲得，推薦使用該藥品最初批準(zhǔn)的劑型（它被用于臨床藥效學(xué)和安全性試驗(yàn)）作為參比藥品。第3頁(yè)/共56頁(yè)第三頁(yè)，共57頁(yè)。劑量選擇

動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)設(shè)置至少三個(gè)劑量組，其高劑量最好接近最大耐受劑量，中、小劑量根據(jù)動(dòng)物有效劑量的上下限范圍選取。主要考察在所試劑量范圍內(nèi)，藥物的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過(guò)程是屬于線性還是非線性，以利于解釋藥效學(xué)和毒理學(xué)研究中的發(fā)現(xiàn)，并為新藥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和研究提供信息。第4頁(yè)/共56頁(yè)第四頁(yè)，共57頁(yè)。劑量選擇動(dòng)物種屬小鼠大鼠豚鼠兔貓猴犬人劑量折算系數(shù)K10.710.620.370.300.320.210.11動(dòng)物體型系數(shù)R0.0590.090.0990.0930.0820.1110.1040.1標(biāo)準(zhǔn)體重(kg)0.020.20.41.5241270標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物：DB

＝DA×KB／KA非標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物：DB

＝DA×RB／RA×（WA／WB）1／3第5頁(yè)/共56頁(yè)第五頁(yè)，共57頁(yè)。試驗(yàn)動(dòng)物

一般采用成年和健康的動(dòng)物。常用動(dòng)物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。動(dòng)物選擇的一般原則如下:首選動(dòng)物：盡可能與藥效學(xué)和毒理學(xué)研究一致；盡量在清醒狀態(tài)下試驗(yàn)，動(dòng)力學(xué)研究最好從同一動(dòng)物多次采樣；創(chuàng)新性的藥物應(yīng)選用兩種或兩種以上的動(dòng)物，其中一種為嚙齒類動(dòng)物；另一種為非嚙齒類動(dòng)物（如犬、小型豬或猴等）。其他藥物，可選用一種動(dòng)物，建議首選非嚙齒類動(dòng)物；經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動(dòng)物。第6頁(yè)/共56頁(yè)第六頁(yè)，共57頁(yè)。給藥途徑

所用的給藥途徑和方式，應(yīng)盡可能與臨床用藥一致。常用的給藥途徑有經(jīng)口給藥（口服、灌胃）、皮下注射、腹腔注射和靜脈注射。另外還有腦內(nèi)給藥、直腸內(nèi)給藥、經(jīng)皮膚給藥等給藥方法。第7頁(yè)/共56頁(yè)第七頁(yè)，共57頁(yè)。研究項(xiàng)目血藥濃度-時(shí)間曲線吸收分布排泄與血漿蛋白的結(jié)合生物轉(zhuǎn)化對(duì)藥物代謝酶活性的影響第8頁(yè)/共56頁(yè)第八頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線受試動(dòng)物數(shù)：血藥濃度-時(shí)間曲線的每個(gè)采樣點(diǎn)不少于5個(gè)數(shù)據(jù)，最好從同一動(dòng)物個(gè)體多次取樣。如由多只動(dòng)物的數(shù)據(jù)共同構(gòu)成一條血藥濃度-時(shí)間曲線，應(yīng)相應(yīng)增加動(dòng)物數(shù)，以反映個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。建議受試動(dòng)物采用雌雄各半，如發(fā)現(xiàn)動(dòng)力學(xué)存在明顯的性別差異，應(yīng)增加動(dòng)物數(shù)以便認(rèn)識(shí)受試物的藥代動(dòng)力學(xué)的性別差異。對(duì)于單一性別用藥，可選擇與臨床用藥一致的性別。第9頁(yè)/共56頁(yè)第九頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線

采樣點(diǎn)給藥前需要采血作為空白樣品，觀察血漿的基質(zhì)效應(yīng)；為獲得一個(gè)完整的血藥濃度-時(shí)間曲線，采樣時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧藥物的吸收相、平衡相（峰濃度附近）和消除相。一般在吸收相至少需要2-3個(gè)采樣點(diǎn)，對(duì)于吸收快的血管外給藥的藥物，應(yīng)盡量避免第一個(gè)點(diǎn)是峰濃度（Cmax）；在Cmax附近至少需要3個(gè)采樣點(diǎn)；消除相需要4-6個(gè)采樣點(diǎn)；第10頁(yè)/共56頁(yè)第十頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線采樣點(diǎn)整個(gè)采樣時(shí)間至少應(yīng)持續(xù)到3-5個(gè)半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/10-1/20；為保證最佳采樣點(diǎn)，建議在正式試驗(yàn)前，選擇2-3只動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，然后根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，審核并修正原設(shè)計(jì)的采樣點(diǎn)。第11頁(yè)/共56頁(yè)第十一頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線

口服給藥：一般在給藥前應(yīng)禁食12小時(shí)以上，以排除食物對(duì)藥物吸收的影響。另外在試驗(yàn)中應(yīng)注意根據(jù)具體情況統(tǒng)一給藥后禁食時(shí)間，以避免由此帶來(lái)的數(shù)據(jù)波動(dòng)及食物的影響，一般可以在口服給藥3-4小時(shí)后就可以給水給糧。注射給藥：飲食飲水對(duì)血液中藥物影響不大。第12頁(yè)/共56頁(yè)第十二頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

根據(jù)試驗(yàn)中測(cè)得的各受試動(dòng)物的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，求得受試物的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。靜脈注射給藥，應(yīng)提供t1/2（消除半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血藥濃度-時(shí)間曲線下面積）、CL（清除率）等參數(shù)值；血管外給藥，除提供上述參數(shù)外,尚應(yīng)提供Cmax和Tmax（達(dá)峰時(shí)間）等參數(shù)，以反映藥物吸收的規(guī)律。另外，提供統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)，如:MRT（平均滯留時(shí)間）、AUC(0-t)和AUC(0-∞)等，對(duì)于描述藥物藥代動(dòng)力學(xué)特征也是有意義的。第13頁(yè)/共56頁(yè)第十三頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線

多次給藥藥代動(dòng)力學(xué)研究

當(dāng)藥物在臨床上將連續(xù)多次應(yīng)用時(shí)，需明確多次給藥的藥代動(dòng)力學(xué)特征。根據(jù)研究目的，應(yīng)考察藥物多次給藥后的穩(wěn)態(tài)濃度（Css），藥物谷、峰濃度的波動(dòng)系數(shù)（DF），是否存在藥物蓄積作用和/或藥酶的誘導(dǎo)作用。

第14頁(yè)/共56頁(yè)第十四頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線單次給藥各個(gè)（和各組）受試動(dòng)物的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)及曲線和其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及曲線；各個(gè)（和各組）受試動(dòng)物的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及平均值、標(biāo)準(zhǔn)差；對(duì)受試物單次給藥非臨床藥代動(dòng)力學(xué)的規(guī)律和特點(diǎn)進(jìn)行討論和評(píng)價(jià)。第15頁(yè)/共56頁(yè)第十五頁(yè)，共57頁(yè)。血藥濃度-時(shí)間曲線多次給藥各個(gè)（和各組）受試動(dòng)物首次給藥后的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)及曲線和主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)；各個(gè)（和各組）受試動(dòng)物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及平均值、標(biāo)準(zhǔn)差；各個(gè)（和各組）受試動(dòng)物血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)和曲線，及其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和曲線；比較首次與末次給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線和有關(guān)參數(shù)；各個(gè)（和各組）平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度及標(biāo)準(zhǔn)差。第16頁(yè)/共56頁(yè)第十六頁(yè)，共57頁(yè)。吸收對(duì)于經(jīng)口給藥的新藥，應(yīng)進(jìn)行整體動(dòng)物試驗(yàn)，盡可能同時(shí)進(jìn)行血管內(nèi)給藥的試驗(yàn)，提供絕對(duì)生物利用度。如有必要，可進(jìn)行在體或離體腸道吸收試驗(yàn)以闡述藥物吸收特性。對(duì)于其他血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應(yīng)根據(jù)立題目的，盡可能提供絕對(duì)生物利用度。第17頁(yè)/共56頁(yè)第十七頁(yè)，共57頁(yè)。分布選用大鼠或小鼠做組織分布試驗(yàn)較為方便。選擇一個(gè)劑量（一般以有效劑量為宜）給藥后，至少測(cè)定藥物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度，以了解藥物在體內(nèi)的主要分布組織。特別注意藥物濃度高、蓄積時(shí)間長(zhǎng)的組織和器官，以及在藥效或毒性靶器官的分布（如對(duì)造血系統(tǒng)有影響的藥物，應(yīng)考察在骨髓的分布）。第18頁(yè)/共56頁(yè)第十八頁(yè)，共57頁(yè)。分布每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，至少應(yīng)有5個(gè)動(dòng)物的數(shù)據(jù)。參考血藥濃度-時(shí)間曲線的變化趨勢(shì)，選擇至少3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。若某組織的藥物濃度較高，應(yīng)增加觀測(cè)點(diǎn)，進(jìn)一步研究該組織中藥物消除的情況。進(jìn)行組織分布試驗(yàn)，必須注意取樣的代表性和一致性。第19頁(yè)/共56頁(yè)第十九頁(yè)，共57頁(yè)。分布同位素標(biāo)記物的組織分布試驗(yàn)，應(yīng)提供標(biāo)記藥物的放化純度、標(biāo)記率（比活性）、標(biāo)記位置、給藥劑量等參數(shù)；提供放射性測(cè)定所采用的詳細(xì)方法，如分析儀器、本底計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)效率、校正因子、樣品制備過(guò)程等；提供采用放射性示蹤生物學(xué)試驗(yàn)的詳細(xì)過(guò)程，以及在生物樣品測(cè)定時(shí)對(duì)放射性衰變所進(jìn)行的校正方程等。盡可能提供給藥后不同時(shí)相的整體放射自顯影圖像。

第20頁(yè)/共56頁(yè)第二十頁(yè)，共57頁(yè)。分布第21頁(yè)/共56頁(yè)第二十一頁(yè)，共57頁(yè)。分布第22頁(yè)/共56頁(yè)第二十二頁(yè)，共57頁(yè)。排泄尿和糞的藥物排泄：一般采用小鼠或大鼠，將動(dòng)物放入代謝籠內(nèi)，選定一個(gè)有效劑量給藥后，按一定的時(shí)間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測(cè)定藥物濃度。糞樣品涼干后稱重（不同動(dòng)物糞便干濕不同），按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進(jìn)行藥物含量測(cè)定。計(jì)算藥物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直至收集到的樣品測(cè)定不到藥物為止。第23頁(yè)/共56頁(yè)第二十三頁(yè)，共57頁(yè)。排泄每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少有5只動(dòng)物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。應(yīng)采取給藥前尿及糞樣，并參考預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，設(shè)計(jì)給藥后收集樣品的時(shí)間點(diǎn)，包括藥物從尿或糞中開(kāi)始排泄、排泄高峰及排泄基本結(jié)束的全過(guò)程。第24頁(yè)/共56頁(yè)第二十四頁(yè)，共57頁(yè)。排泄膽汁排泄：有的藥物經(jīng)膽汁排泄在腸中再次被吸收形成肝腸循環(huán)，可使藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)。一般用大鼠在乙醚麻醉下作膽管插管引流，待動(dòng)物清醒后給藥，并以合適的時(shí)間間隔分段收集膽汁，進(jìn)行藥物測(cè)定。記錄藥物自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)。第25頁(yè)/共56頁(yè)第二十五頁(yè)，共57頁(yè)。與血漿蛋白的結(jié)合

藥物與蛋白的結(jié)合會(huì)明顯影響藥物分布與消除的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，并降低藥物在靶部位的作用強(qiáng)度。對(duì)蛋白結(jié)合率高于90%以上的藥物，建議開(kāi)展體外藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結(jié)合率藥物，考察對(duì)所研究藥物蛋白結(jié)合率的影響。

第26頁(yè)/共56頁(yè)第二十六頁(yè)，共57頁(yè)。與血漿蛋白的結(jié)合

研究藥物與血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)可采用多種方法，如平衡透析法、超過(guò)濾法、分配平衡法、凝膠過(guò)濾法、光譜法等。根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及試驗(yàn)室條件，可選擇使用一種方法進(jìn)行至少3個(gè)濃度（包括有效濃度）的血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少重復(fù)試驗(yàn)三次，以了解藥物的血漿蛋白結(jié)合率是否有濃度依賴性。

第27頁(yè)/共56頁(yè)第二十七頁(yè)，共57頁(yè)。生物轉(zhuǎn)化

對(duì)于創(chuàng)新性的藥物，尚需了解在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化情況，包括轉(zhuǎn)化類型、主要轉(zhuǎn)化途徑及其可能涉及的代謝酶。對(duì)于新的前體藥物,除對(duì)其代謝途徑和主要活性代謝物結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究外,尚應(yīng)對(duì)原形藥和活性代謝物進(jìn)行系統(tǒng)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。第28頁(yè)/共56頁(yè)第二十八頁(yè)，共57頁(yè)。對(duì)藥物代謝酶活性的影響

對(duì)于創(chuàng)新性的藥物，應(yīng)觀察藥物對(duì)藥物代謝酶，特別是細(xì)胞色素P450同工酶的誘導(dǎo)或抑制作用?？捎^察整體動(dòng)物多次給藥后的肝P450酶或在藥物反復(fù)作用后的肝細(xì)胞（最好是人肝細(xì)胞）P450酶活性的變化，以了解該藥物是否存在潛在的代謝性相互作用。第29頁(yè)/共56頁(yè)第二十九頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品的藥物分析方法

生物樣品的藥物分析方法包括色譜法、放射性核素標(biāo)記法、免疫學(xué)和微生物學(xué)方法。應(yīng)根據(jù)受試物的性質(zhì)，選擇特異性好、靈敏度高的測(cè)定方法。色譜法包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（如LC-MS，LC-MS/MS，GC-MS，GC-MS/MS

方法）。在需要同時(shí)測(cè)定生物樣品中多種化合物的情況下，LC-MS/MS和GC-MS/MS

聯(lián)用法在特異性、靈敏度和分析速度方面有更多的優(yōu)點(diǎn)。第30頁(yè)/共56頁(yè)第三十頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證準(zhǔn)確度：在確定的分析條件下，測(cè)得值與真實(shí)值的接近程度。精密度：在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測(cè)量值的分散程度。特異性：分析方法測(cè)量和區(qū)分共存組分中分析物的能力。這些共存組分可能包括代謝物、雜質(zhì)、分解產(chǎn)物、介質(zhì)組分等。靈敏度：生物樣品分析方法的靈敏度通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)表征，主要包括定量下限和濃度-響應(yīng)函數(shù)。重現(xiàn)性：不同試驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方法在間隔一段短時(shí)間后測(cè)定結(jié)果的分散程度。穩(wěn)定性：一種分析物在確定條件下，一定時(shí)間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化學(xué)穩(wěn)定性。第31頁(yè)/共56頁(yè)第三十一頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證標(biāo)準(zhǔn)曲線：試驗(yàn)響應(yīng)值與分析物濃度間的關(guān)系。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)募訖?quán)和統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，用簡(jiǎn)單的數(shù)學(xué)模型來(lái)最適當(dāng)?shù)孛枋觥?biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)是連續(xù)的和可重現(xiàn)的，應(yīng)以回歸計(jì)算結(jié)果的百分偏差最小為基礎(chǔ)。提取回收率：分析過(guò)程的提取效率，以樣品提取和處理過(guò)程前后分析物含量百分比表示。生物介質(zhì)：一種生物來(lái)源物質(zhì)，能夠以可重復(fù)的方式采集和處理。例如全血、血漿、血清、尿、糞、各種組織等。第32頁(yè)/共56頁(yè)第三十二頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證定量范圍：包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的濃度范圍，在此范圍內(nèi)采用濃度-響應(yīng)關(guān)系能進(jìn)行可靠的、可重復(fù)的定量，其準(zhǔn)確度和精密度可以接受。介質(zhì)效應(yīng)：由于樣品中存在干擾物質(zhì)，對(duì)響應(yīng)造成的直接或間接的影響。

分析批：包括待測(cè)樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品的完整系列。一天內(nèi)可以完成幾個(gè)分析批，一個(gè)分析批也可以持續(xù)幾天完成。第33頁(yè)/共56頁(yè)第三十三頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證標(biāo)準(zhǔn)樣品：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。質(zhì)控樣品：即QC樣品，系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于監(jiān)測(cè)生物分析方法的重復(fù)性和評(píng)價(jià)每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。第34頁(yè)/共56頁(yè)第三十四頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證

由于生物樣品取樣量少、藥物濃度低、內(nèi)源性物質(zhì)（如無(wú)機(jī)鹽、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、代謝物）及個(gè)體差異等多種因素影響生物樣品測(cè)定，所以必根據(jù)待測(cè)物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品析方法，并對(duì)方法進(jìn)行確證。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)分析方法進(jìn)行考核。第35頁(yè)/共56頁(yè)第三十五頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證特異性必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要考察6個(gè)不同個(gè)體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對(duì)于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法（LC-MS、LC-MS/MS等），應(yīng)注意考察分析過(guò)程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。第36頁(yè)/共56頁(yè)第三十六頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證

標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍必須至少用6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)，僅用于評(píng)價(jià)干擾。第37頁(yè)/共56頁(yè)第三十七頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)的實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值之間的偏差*

在可接受的范圍之內(nèi)時(shí)，可判定標(biāo)準(zhǔn)曲線合格?？山邮芊秶话阋?guī)定為最低濃度點(diǎn)的偏差在±20%以內(nèi)，其余濃度點(diǎn)的偏差在±15%以內(nèi)。只有合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對(duì)臨床待測(cè)樣品進(jìn)行定量計(jì)算。*

：偏差=[（實(shí)測(cè)值－標(biāo)示值）/標(biāo)示值]X100%標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，以使低濃度點(diǎn)計(jì)算得比較準(zhǔn)確。第38頁(yè)/共56頁(yè)第三十八頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證精密度與準(zhǔn)確度要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè)定5個(gè)樣品，為獲得批間精密度，應(yīng)至少連續(xù)3個(gè)分析批樣品。第39頁(yè)/共56頁(yè)第三十九頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證精密度與準(zhǔn)確度精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)小于15%，在定量下限附近相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于20%。

準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%～115%范圍內(nèi)，在定量下限附近應(yīng)在80%～120%范圍內(nèi)。第40頁(yè)/共56頁(yè)第四十頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證定量下限

定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿足測(cè)定3～5個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10～1/20時(shí)的藥物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%～120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。應(yīng)由至少5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。第41頁(yè)/共56頁(yè)第四十一頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證樣品穩(wěn)定性根據(jù)具體情況，對(duì)含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。還應(yīng)注意儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性。

第42頁(yè)/共56頁(yè)第四十二頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證室溫下放置8h后測(cè)定；?20℃條件下放置15天，中間兩次反復(fù)凍融，在第三次凍融后測(cè)定；經(jīng)過(guò)第三次凍融后，在4℃放置8h后測(cè)定；注：凍融過(guò)程穩(wěn)定性要考慮高、中、低三個(gè)濃度，n=5。第43頁(yè)/共56頁(yè)第四十三頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證提取回收率回收率是作為建立方法的考察的重要指標(biāo)，分為相對(duì)回收率和絕對(duì)回收率。應(yīng)考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，n＝5或6，其結(jié)果應(yīng)精密和可重現(xiàn)。第44頁(yè)/共56頁(yè)第四十四頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析方法的建立和確證相對(duì)回收率：也就是通常所說(shuō)的準(zhǔn)確度，計(jì)算方法是將加藥樣品經(jīng)過(guò)處理后測(cè)定的響應(yīng)值代入該樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相應(yīng)濃度值（A），然后除以樣品中藥物的加入濃度值。相對(duì)回收率主要考察標(biāo)準(zhǔn)曲線及建立的方法的準(zhǔn)確度。絕對(duì)回收率：也稱為提取回收率，計(jì)算方法是加藥樣品經(jīng)過(guò)處理后測(cè)定的響應(yīng)值除以溶于流動(dòng)相中的同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定響應(yīng)值第45頁(yè)/共56頁(yè)第四十五頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開(kāi)始測(cè)試未知樣品。每個(gè)未知樣品一般測(cè)定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。藥代動(dòng)力學(xué)比較試驗(yàn)中，來(lái)自同一個(gè)體的生物樣品最好在同一分析批中測(cè)定。第46頁(yè)/共56頁(yè)第四十六頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析每個(gè)分析批應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（組織分布試驗(yàn)時(shí)，可視具體情況而定），隨行測(cè)定高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中。當(dāng)一個(gè)分析批中未知樣品數(shù)目較多時(shí)，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。第47頁(yè)/共56頁(yè)第四十七頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3質(zhì)控樣品的結(jié)果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn)。如質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測(cè)試結(jié)果作廢。第48頁(yè)/共56頁(yè)第四十八頁(yè)，共57頁(yè)。生物樣品分析濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測(cè)定。對(duì)于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析時(shí)，在達(dá)到Cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計(jì)算，在達(dá)到Cmax以后取樣的樣品應(yīng)以無(wú)法定量（Notdetectable,ND）計(jì)算，以減小零值對(duì)AUC計(jì)算的影響。第49頁(yè)/共56頁(yè)第四十九頁(yè)，共57頁(yè)。分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

提供給藥品注冊(cè)管理部門(mén)的材料應(yīng)當(dāng)包括：

1）綜合信息；2）方法建立的數(shù)據(jù)；3）在日常樣品分析中的基本資料；4）其他相關(guān)信息。第50頁(yè)/共56頁(yè)第五十頁(yè)，共57頁(yè)。分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

1）綜合信息項(xiàng)目編號(hào)，分析方法編號(hào)，