湘雅醫(yī)院評(píng)估腦紅蛋白在膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠的表達(dá)及作用研究

膿毒癥相關(guān)性腦病(SAE)是由膿毒癥引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能,是嚴(yán)重膿毒癥的表現(xiàn)之一。SAE的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,可能與多種因素有關(guān)，包括腦血管功能、神經(jīng)遞質(zhì)異常、炎癥介質(zhì)釋放及細(xì)胞凋亡等[1]，這些改變的基統(tǒng)自我保護(hù)機(jī)制中重要的組成部分[2]。Ngb是2000年新發(fā)現(xiàn)的一種脊椎動(dòng)物單17000151個(gè)氨基酸殘基,主體的管腔外側(cè)細(xì)胞質(zhì)中[3]。近年來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者均已證實(shí),在腦缺血缺氧狀態(tài)下,NgbmRNA表達(dá)增加,Ngb在腦缺血缺氧損傷中對(duì)神經(jīng)元的重要保護(hù)作用[4,5]WangX等[6]Ngb敲除Ngb表達(dá)則促進(jìn)損傷，Ngb過表達(dá)的轉(zhuǎn)鼠可耐受腦梗塞表明Ngb參目前國(guó)內(nèi)外對(duì)Ngb神經(jīng)元保護(hù)作用的研究日益濃厚，但尚缺乏關(guān)于其在膿毒癥相關(guān)性腦病中的機(jī)制研究。本研究在CLP膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠模型NgbHemin和反義寡核苷酸技術(shù)（NgbAS-ODNs）Ngb表達(dá)，探討其在膿毒癥相關(guān)性腦病中是否發(fā)揮保護(hù)材實(shí)驗(yàn)動(dòng)健康清潔級(jí)成年SD大鼠240只，雌雄不拘，體重200～250g，由中南大學(xué)主要藥品和試免疫組化染色SP試劑盒購(gòu)自購(gòu)于河北博海生物工程開發(fā)；兔抗鼠單克隆b抗體為Sntaruz公司產(chǎn)品SA試劑盒購(gòu)自總醫(yī)院科技開發(fā)中心原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑（E公司AB檢測(cè)試劑盒（購(gòu)于河北博海生物工程；PS購(gòu)自鼎國(guó)生物工程公司，水合氯醛為中南大學(xué)湘雅醫(yī)院藥劑科化學(xué)分析室配制多聚購(gòu)置岳麓區(qū)鼎盛實(shí)器材公司戊二醛無水乙醇二甲苯蘇素鋨酸等由中南大學(xué)病教研室提供套管針購(gòu)置D公司hmin購(gòu)置Sigma公司bS-由EXIQON公司合成。RNAprepPure動(dòng)物組織總RNA提取試劑，ianscript，SYBRGreen熒光定量試劑盒（Tiangen.Co.）主要儀腦立體定位儀，RM6240生物信號(hào)記錄器，微量給藥器，OlympusBX41型光學(xué)顯微鏡（，LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī)（瑞典，H-7500型透射電鏡（石臘切片機(jī)（生化培養(yǎng)箱（格蘭士微波爐WP700，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱躍進(jìn)醫(yī)療器械廠榮事達(dá)家用冷藏冰箱BCD-202，－80℃低溫冰箱，，，，（SANYOMIAS醫(yī)用圖像分析管理系統(tǒng)電子UVP分析儀器電熱恒溫水浴（醫(yī)用恒溫設(shè)備廠電子（Sartorius公司德國(guó)冰（AF10SCOTSMAN,去離子水（ALL,PurelabPlusPVDF（孔徑為0.22μm，Millipore3MM濾（Whatman英國(guó)醫(yī)用X射線膠片（柯達(dá)公司，，通用顯影粉、酸性定影粉（亨達(dá)公司感光材料廠高速離心（醫(yī)用分析儀器廠轉(zhuǎn)移脫色搖（海門其林貝爾儀器制造公司旋渦混勻（海門麒麟醫(yī)用儀器廠電泳（百晶生物技術(shù)有限公司低溫離心（Sigma德國(guó)凝膠璃板固定（BIO-Rad垂直電泳（BIO-Rad轉(zhuǎn)移電泳（BIO-Rad,酶標(biāo)（TEKPCR（BioRadCFX96，，，，方Ngb在膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠中的表分組方50只大鼠分為三組，假手術(shù)組（n=8只，42CLP手術(shù)，24小時(shí)死2022只大鼠根據(jù)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、腦電監(jiān)測(cè)和體感誘發(fā)電位分為：（n=12動(dòng)物模型具體制作方5010天放置腦電監(jiān)測(cè)電極。水合氯醛腹腔注射麻醉后大鼠頭部用立體定位儀固定常規(guī)外科在頭顱中間矢狀位作3cm的皮膚切口將前鹵點(diǎn)和其他顱骨縫在顱骨面行局（10%利多卡因噴霧30.6mm的不銹鋼螺絲輕輕置入直到到達(dá)腦功能定位處的硬腦膜：一個(gè)電極被安裝在軀體感覺皮質(zhì)處（記為是S1（2.5mm上面（10mm1mm，另外左側(cè)的電極用作接地電極。放6h1次。1012小時(shí)。10350mg/kg腹腔注射麻醉，股靜脈置管開放靜脈通路，股動(dòng)脈置管后連接RM6240生物信號(hào)記錄器，持續(xù)監(jiān)測(cè)血壓、心率。大鼠用盲腸結(jié)扎穿孔模型（CLP）方法誘發(fā)膿毒癥，常規(guī)鋪巾，在大鼠側(cè)腹開2cm的刀口，出盲腸，然后在回盲腸連接處結(jié)扎。用22號(hào)注射針頭將盲腸刺穿兩次，輕輕擠壓術(shù)的動(dòng)物要皮射生理鹽水（3ml/100g），手術(shù)結(jié)束后切口用絡(luò)合碘液清62%呋喃西林涂抹于手術(shù)區(qū)域。觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改24小時(shí)內(nèi)有無腦電圖和誘發(fā)電位改變分為膿毒癥無腦病組和膿毒癥性腦病組。觀察和檢測(cè)指Siami等的研究膿毒癥大鼠出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)改變，同時(shí)腦電圖監(jiān)測(cè)出現(xiàn)24小時(shí)后存活部分大鼠予以水合氯醛0.3－0.4l/100g腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，剪開胸部，經(jīng)插入細(xì)導(dǎo)管，繼續(xù)向上推進(jìn)直至導(dǎo)管進(jìn)入主動(dòng)脈弓處，剪開右心耳。先以生理鹽水約200ml肝臟變白后，繼以4％多聚150ml灌注。灌注完畢后取腦組織，選取大腦額葉皮質(zhì)及海馬組織，一部分置于4％多聚中固定24h，經(jīng)脫水、透明、浸Ngb區(qū)位置，取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的實(shí)驗(yàn)組織塊；2、固定和包埋：用4%多聚（0.1MPBS,PH7.0～7.6,0.1%DEPC）70%3080%3055℃30塊；3、切片：將厚度5um的組織切片附于經(jīng)多聚賴氨酸附膜的載玻片上，60℃兩次、自來水沖洗、PBS；5、1%101次,0.1MPBS35;610，0.1MPBS洗3次×5分鐘;7、切片上滴加正常封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體，不洗。8、切片上滴加第一抗體，4℃過夜，0.1MPBS3×59、3×511、DABDAB1mlA、核1分鐘，充分水洗、1%鹽酸分化、1%胺水反藍(lán)、充分水洗、經(jīng)70%乙醇5分鐘、80%590%595%5100%TUNELK（20μg/mlTris/HCl，Ph7.4-8.0）15-3050ulTUNEL37℃60（為防止蒸發(fā)和TUNEL反應(yīng)混合物均勻分布，在孵育過程中加蓋蓋玻片）。PBS350ulPOD37℃30（為防止蒸發(fā)和保證轉(zhuǎn)化劑-POD均勻分布，在孵育過程中加蓋蓋玻片）。PBS350-100μlDAB大鼠血SOD、MDA、NgbNgb240.3－0.4ml/100g冰上取材行NgbWesternbloting印記分析法檢測(cè)及RT-PCRNgbmRNA表達(dá)免疫組化染色結(jié)果判Ngb，hemin上調(diào)Ngb表達(dá)對(duì)膿毒癥相關(guān)性腦病.1分組方，5224（n=8只膿毒癥組13只發(fā)生膿毒癥相關(guān)性腦病的6只膿毒癥+hemin組12只，發(fā)生膿毒癥相關(guān)性腦病5只。動(dòng)物模型具體制作方膿毒癥+hemin12hemin50mg/kg。根據(jù)觀大（n=8只（n=6只膿毒癥相關(guān)性腦病+hemin組（n=5只）反義寡核苷酸抑制膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠Ngb表達(dá)劑量選擇預(yù)實(shí)30CLPAS-ODNS0.4nmol、0.8nmol1810只，3010天放置腦電監(jiān)測(cè)電極，方法同前述。10天同時(shí)按照AS-ODNS的用量分組為大鼠進(jìn)行腦室內(nèi)注射AS-ODNS0.4nmol、0.8nmol、1.6nmol、2.4nmol121次。同時(shí)建立正義寡核苷核苷酸（S-8ul，10（1）10只大鼠，S-ODNS,AS-ODNS0.4nmol0.8nmol、1.6nmol、2.4nmol組。觀察和檢測(cè)指存活大鼠在24小時(shí)予以水合氯醛0.3－0.4ml/100g腹腔注射麻醉將大鼠仰臥位白及mRNAAS-ODNS劑量。反義寡核苷酸抑制膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠Ngb表1.2.4..1100只大鼠分為三組，假手術(shù)組（n=8只，92只大鼠行CLP手術(shù)，并隨機(jī)分為膿毒癥組（n=26）及膿毒癥+反義寡核苷酸組（n=26只+正義寡核苷酸；24研究假手術(shù)組（n=8只，膿毒癥組12只，發(fā)生膿毒癥相關(guān)性腦病的6只，即膿毒癥相關(guān)腦病組（n=6；膿毒癥+AS-ODNS劑量組14只，發(fā)生膿毒癥（n=6核苷酸組10只發(fā)生膿毒癥相關(guān)性腦病5只即膿毒癥相關(guān)腦病+正義寡核（n=5；（n=動(dòng)物模型具體制作方100101092（LP12小時(shí)側(cè)腦室S-S8ul，膿毒癥正義寡核苷酸組，膿毒癥人8ul8只，膿毒癥相關(guān)性腦病組（n6只，膿毒癥相關(guān)性腦病只，膿毒癥相關(guān)腦病+人工腦脊液（ASCF）組（n=4只觀察和檢測(cè)指標(biāo)同統(tǒng)計(jì)學(xué)方SPSS17.0WindowsXP環(huán)境下處理，所有結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間各參數(shù)指標(biāo)均數(shù)采用單因素方差分析(one-way-ANOA)KeulaS-P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。第二章結(jié)Ngb在膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠中的表，致密均勻；膿毒癥無腦病組大鼠24h后可見部分神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改周1-3。，（4-9）Ngbb免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞主要為神經(jīng)元細(xì)胞，棕黃色陽(yáng)性顆粒位于神經(jīng)細(xì)胞的胞漿中,突起中亦有少量染色免疫反應(yīng)越棕黃色陽(yáng)性顆粒越粗大對(duì)突起中亦有少量額葉（10-15.(7.7±1.25假手術(shù)組（P0.5。膿毒癥無腦病組海馬區(qū)(.08±0.51)及額葉皮質(zhì)區(qū)(1.58±0.51)與假手術(shù)組海馬區(qū)(.13±0.35)（1.25±0.46無明顯差異（P＞0.051Ngb大鼠血SOD、MDA、NgbSOD、MDANgb（P＞0.05術(shù)組及膿毒癥無腦病組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0511各組大鼠SOD、MDA、Ngb表達(dá)變化NgbNgbmRNAbbb表達(dá)較假手術(shù)組（16，PH片斷長(zhǎng)度與預(yù)期一致，Ngb176bp，PH528bp。假手mNAbmA（17）大鼠腦組織TUNEL假手術(shù)組未見TUNELTUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞存在，膿毒癥相關(guān)腦病組可見明顯TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞。凋亡細(xì)（18-20）hemin上調(diào)Ngb表達(dá)對(duì)膿毒癥相關(guān)性腦病影Hemin預(yù)處理膿毒癥相關(guān)性腦病組神經(jīng)元和線粒體的損傷較膿毒癥相關(guān)性腦（21，22）NgbHeminNgb于胞外比例明顯減少（附圖23,24）Hemin預(yù)處理膿毒癥相關(guān)性腦病組額葉免疫相關(guān)性腦病組額葉（8.33±1.21）和海馬（8±1.67（P<0.05）2HeminNgb大鼠血SOD、MDA、Ngb（P<0.05Hemin（P<0.05，Ngb明顯高于假手術(shù)組和膿毒癥相關(guān)性腦病組（P<0.052.2各組大鼠SOD、MDA、Ngb表達(dá)變化NgbNgbmRNAHeminNgb蛋白表達(dá)較膿毒癥相關(guān)性腦病組明顯升高（見附圖16）同時(shí)凝膠電泳結(jié)果可設(shè)計(jì)引物所擴(kuò)增的NgbGAPDHNgbmRNA（17）大鼠腦組織TUNELHeminTUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞存在，數(shù)（25）反義寡核苷酸抑制膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠Ngb表達(dá)劑量選擇預(yù)實(shí)正義寡核苷酸及人工腦脊液對(duì)膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠Ngb表達(dá)無明顯影響，NgbnmolNgb表達(dá)與假手術(shù)（1617）反義寡核苷酸抑制膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠Ngb表NgbNgbAS-ODNs+膿毒癥相關(guān)腦病組Ngb免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目少胞漿及整片組織29組額葉Ngb免疫組化評(píng)（1.83±0.41Ngb免疫組化評(píng)（1.33±0.52）（8.83±0.75，海馬（P<0.05（7.8±.64（8.25±0.96，海馬關(guān)性腦病組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)3。3NgbAS-ODNsNgb大鼠血SOD、MDA、NgbSOD、MDA、Ngb表達(dá)均明顯高于假手術(shù)組，差異（P<0.05MDA表達(dá)較膿毒癥相關(guān)性腦病組明顯升高，Ngb表達(dá)明顯抑制，但仍高于假手（P<0.05無明顯差別（P>0.053.3各組大鼠SOD、MDA、Ngb表達(dá)變化ShamSAESAE+AS-ODNSSAE+S-ODNSSAE+ASCF組）相比#P<0.05SAE+AS-ODNS組相比△P<0.05NgbNgbmRNA（見附圖16）同時(shí)凝膠電泳結(jié)果可見，設(shè)計(jì)引物所擴(kuò)增的Ngb、GAPDH片斷長(zhǎng)度與預(yù)期一致，Ngb176bp，GAPDH528bp。NgbAS-ODNs+膿毒癥相關(guān)腦病組NgbmRNA（17）大鼠腦組織TUNELNgbAS-ODNs+膿毒癥相關(guān)腦病組可見皮質(zhì)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞大量表達(dá)存在，胞體縮小，細(xì)胞核呈棕褐色，不規(guī)則，大小不一致，核固縮，部分細(xì)胞核碎（30）第三章討膿毒癥相關(guān)性腦病(SAE)是由膿毒癥引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能,是嚴(yán)重者病死率顯著高于無腦病者,且目前尚無行之有效的治療方法。各文獻(xiàn)相差甚大,在9%～71%之間[7],這主要是由于其診斷標(biāo)準(zhǔn)尚未確定、臨床藥物的綜合因素造成的。正是由于上述的存在容易掩蓋SAE本身的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征,所以其實(shí)際可能高于目前的。在我們前期的臨床觀變等指標(biāo)CLP大鼠膿毒癥相關(guān)性腦病模型，為膿毒癥相關(guān)性腦病發(fā)病機(jī)制SAE的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,可能與多種因素有關(guān)包括腦血管功能、損害的程度。Ngb是2000年新發(fā)現(xiàn)的一種脊椎動(dòng)物單體球蛋白，由一條多肽鏈17000151個(gè)氨基酸殘基,主要分布于大腦皮質(zhì)、海馬Ngb末端血紅素袋存在結(jié)構(gòu)異構(gòu)性，可形成多種配體結(jié)合位點(diǎn)，與氧有很高的親bb面觀察通過藥物或技術(shù)等認(rèn)為干預(yù)缺血缺氧或繼發(fā)腦損傷狀態(tài)下2001年Sun等人[8]，培養(yǎng)的33細(xì)胞在缺氧24小時(shí)后，bmA及蛋白表達(dá)就明b表達(dá)，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于未調(diào)控組神經(jīng)元的生存能力明顯降低。而再將全長(zhǎng)小鼠bA克隆到p3.133gb33細(xì)胞在缺2003Sun[9]進(jìn)一步進(jìn)行了在體實(shí)驗(yàn)，將針bmAb蛋白902460％而將腺相關(guān)轉(zhuǎn)染b定向注入大鼠側(cè)腦室以增加b的表50b對(duì)繼發(fā)性腦損傷的研究包括心肺腦復(fù)蘇后的腦功能，[10-12bb的腦保護(hù)作用，ld等13]將小鼠較短時(shí)間(2小)于7.6Ngb表達(dá)增加,同時(shí)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中將小鼠長(zhǎng)時(shí)間(482周)于低氧(7％一12％)環(huán)境下也未發(fā)現(xiàn)明顯Ngb表達(dá)上調(diào)；用定量反轉(zhuǎn)錄PCR和免疫組織化學(xué)法研究發(fā)現(xiàn)：缺血半球NgbmRNA的表達(dá)明顯減少，只有1／2000NgbNgb的內(nèi)源性表達(dá)對(duì)腦缺血缺氧損傷起不到保護(hù)作用。根據(jù)目前所看到的結(jié)果，NgbNgbNgb在腦缺血再灌注損傷中的高表達(dá)和相應(yīng)的神經(jīng)元保護(hù)作用，對(duì)于膿毒癥相關(guān)性腦病中Ngb的表達(dá)及其作用尚缺乏相關(guān)而關(guān)于膿毒癥相關(guān)性腦病的發(fā)病機(jī)制中有研究認(rèn)為腦部微循環(huán)改變是主要因一，微循環(huán)勢(shì)必引起腦部缺血缺氧，因此我們推測(cè)在膿毒癥相關(guān)性Ngb可相比，腦組織蛋白水平和水平及血Ngb表達(dá)均明顯增加，免疫組化提示海腦病組大鼠血SOD，MDA表達(dá)明顯高于無腦病組，電鏡結(jié)構(gòu)提示腦病組大鼠線CLP膿毒癥亡相對(duì)較少[14]Ngb僅微量表達(dá)，NgbNgb的表達(dá)，同時(shí)膿毒癥時(shí)血腦屏障受損，導(dǎo)致Ngb分泌入血，這可以為進(jìn)一步臨Ngb表中用藥物和技術(shù)干預(yù)膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠腦內(nèi)Ngb表達(dá)以探討其表達(dá)是氯化血紅素(min)是一個(gè)被用于臨床治療貧的藥物。早在1983年FDA就批準(zhǔn)其用于臨床治療。但近年來的資料表明，min在心、腦、腸、肝等器官的缺血缺氧損傷中具有保護(hù)作用[15]。Hemi作為血紅素氧合酶的底物和誘導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)腦紅蛋白表達(dá)，抵抗自由基損傷，減少興奮性氨基酸毒性，在心、腦、腸等的缺血缺氧損傷中具有重要保護(hù)作用。研究證實(shí)，無論是在細(xì)胞水平還是整體水平min都能誘導(dǎo)神經(jīng)元高表達(dá)[16]。并且有實(shí)驗(yàn)證實(shí)在m和蛋白水平均可被氯化高鐵血紅素(min)所誘導(dǎo)，且呈濃度和時(shí)間依賴[17]。Hemin還具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用，能夠促進(jìn)培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和神經(jīng)Ngb表達(dá)，這比攜帶Ngb的載體有更好的臨床可行性。在我們的研究中同樣也顯示應(yīng)用腹腔注射hemin50mg/kg后發(fā)生膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠的腦內(nèi)反義寡核苷酸技術(shù)(antisenseoligodeoxynucleotidesAS-ODNs)是短序列的單鏈DNA，在體外通過化學(xué)合成，在體內(nèi)按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，與細(xì)胞內(nèi)特異的靶序列互補(bǔ)，干擾的轉(zhuǎn)錄、剪切和翻譯，從而阻斷某種蛋白的合成。神經(jīng)系統(tǒng)疾病由于血腦屏障的顧慮通常選用腦室注射方式導(dǎo)入外援干擾基AS-ODNs-Ngb抑制Ngb0.4nmol,0.8nmol,1.6nmol,2.4nmolAS-ODNs-NgbNgb2.4濃度時(shí)明顯抑制膿毒癥相關(guān)性腦病組Ngb蛋白表達(dá)，與假手術(shù)組無顯著差異，而正義寡核苷酸組和人功腦Ngb2.4nmolAS-ODNs-Ngb作為干預(yù)劑量。在進(jìn)一步的試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用2.4nmolAS-ODNs-NgbNgb的表達(dá)，同時(shí)病理及超微結(jié)構(gòu)改變顯示損害明顯加重，tunel實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡明顯高于膿毒癥相關(guān)性腦病組，說明抑制腦內(nèi)Ngb表達(dá)，可造成膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠損傷加重，從而也證明了在膿毒癥相關(guān)性腦病中Ngb表達(dá)的增加起到了腦保護(hù)作用，臨可能可以通過上調(diào)Ngb表達(dá)預(yù)防和治療膿毒癥相關(guān)盡管有文獻(xiàn)Ngb參與腦保護(hù)作用，但其確切機(jī)制有待進(jìn)一步闡明，可經(jīng)組織中氧氣與Ngb有很高親和力；這將十分有利于轉(zhuǎn)運(yùn)氧通過血腦屏障，提Ngb的表達(dá)量，可顯著增強(qiáng)神經(jīng)元抗缺氧的能力；而抑制Ngb的表達(dá)，則導(dǎo)致神經(jīng)元對(duì)缺氧損表達(dá)野生型Ngb，可明顯減輕H202誘導(dǎo)的活性氧和活性氮蓄積和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)減少H202誘導(dǎo)的線粒體功能和凋亡促進(jìn)細(xì)胞存活[18]③酶的功能：研究發(fā)現(xiàn)，Ngb可能有還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶的功能，該氧化酶是三電子傳遞鏈中重要的酶復(fù)合體組成成員之一，在ATP的生成中有重要作用，可增加細(xì)胞供能，有助于維持神經(jīng)元的正常功能。Ngb也可能通過調(diào)節(jié)Na+-K+-ATP酶活性從而維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。④調(diào)控細(xì)胞凋亡及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。在細(xì)胞期間，當(dāng)細(xì)胞色素Ｃ從線粒體大量釋放的時(shí)候，腦紅蛋白可以非促線粒體執(zhí)行凋亡的觸發(fā)水平在以后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步探討Ngb在膿毒癥綜上所述，膿毒癥相關(guān)性腦病大鼠腦組織及血中均高表達(dá)Ngb，且主要位于大腦額葉和海馬區(qū)。氯化血紅素可上調(diào)大鼠腦組織Ngb表達(dá)，減輕膿毒AS-ODNs-NgbNgb基Ngb高表達(dá)，起到腦保護(hù)作用，其具體的機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。BartynskiWS,BoardmanJF,ZeiglerZR,etal.Posteriorreversibleencephalopathysyndromeininfection,sepsisandshock[J].AmJNeuroradio,l2006,27(10):2179-BurmesterT,GerlachF,HankelnT.Regulationandroleofneuroglobinandcytoglobinunderhypoxia.AdvExpMedBiol.2007，618:169-180HundahlCA,AllenGC,NyengaardJR,eta1.NeuroglobinintheratbrainShaoG,GongKR,LiJ,eta1.AntihypoxicEffectsofNeuroglobininPreconditionedMiceandSH-SY5YCells．Neurosignals,2009,17YuZ,FanX,LoEH,eta1.NeuroprotectiverolesandmechanismsofNeuroglobin.NeurolRes,2009，31(2):122-127WangX,LiuJ,ZhuH,eta1.Effectsofneuroglobinoverexpressiononacuteinjuryandbrain-term 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