乳酸菌培養(yǎng)及誘導(dǎo)培養(yǎng)基

8888嗜酸乳菌試驗方一株嗜酸乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸條件的優(yōu)化[J].中國釀造，20091、基礎(chǔ)培基(脫脂乳培養(yǎng)基)12.0脂奶粉，蒸餾水，pH然，滅菌202、MRS體培養(yǎng)基葡萄糖20.0g，蛋白胨，牛肉膏10.0g，酵母浸膏，無水乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，檸檬酸氫二銨，·7H0.58g，MnSO·H033g，4242瓊脂15g，pH左右，加蒸餾水至1000mL121℃滅菌20min。3、產(chǎn)酶培基：脫脂乳培養(yǎng)基，并加入一定濃度的亞油酸來誘導(dǎo)產(chǎn)酶。1出發(fā)株的活及純化保藏的嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基，搖勻后置6℃恒溫箱中培養(yǎng)12h，接種于液體培養(yǎng)基中活化。劃線接種到MRS固體培養(yǎng)基36℃恒溫培*養(yǎng)，嗜酸乳桿菌在120rmin的狀態(tài)下培養(yǎng)有利于嗜酸乳桿菌的繁殖。長出單個菌落后，挑取菌落進行革蘭氏染色鏡檢，確定是否純種。嗜酸乳桿菌的形態(tài)與菌落特征在MRS瓊脂培養(yǎng)基上需氧培養(yǎng)后，菌落微小，不規(guī)則，微隆起，有光澤，灰白色，呈透明的玻璃霜花樣。倍顯微鏡觀察表面凸凹不平，邊緣為絲狀或卷發(fā)樣革蘭氏染色后可見菌體呈短桿狀單個或短鏈狀排列革蘭氏染色陽性。肉眼觀察，嗜酸乳桿菌菌落較平臺狀，不規(guī)則、圓形凸起、邊緣整齊、質(zhì)地柔軟、灰白色、有光澤。1）500mLMRS液體培養(yǎng)基2）5個三角瓶，橡膠塞，牛皮紙，繩子3）5個培養(yǎng)皿4）1個接種環(huán)，酒精燈，打火機，酒精2種子制備活化的菌種接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，于℃恒溫培養(yǎng)h保藏備用。增菌培養(yǎng)基最佳接種量為（活菌數(shù)為個/mL★3產(chǎn)酶導(dǎo)培養(yǎng)用脫脂乳配成的產(chǎn)酶液體培養(yǎng)基，每250mL三角瓶中裝入12g脫脂乳‰亞油酸)入溫℃滅菌min后入mL種子液(每mL菌體5×10個)，℃培養(yǎng)36?！?/p>

100mL三角瓶裝40mL的脫脂乳含脫脂乳、1.50‰亞油酸)，將活化后的菌種按接（接種量為在6℃下靜止培養(yǎng)36h并添加0.1%(m/v)的乳糖，的硫酸銨，0.1%氯化鈉。1）5個100mL的三角瓶第一次直接添加LA較好，且LA加量為1.50反應(yīng)溫度為36℃發(fā)酵時間為36h第二次（回歸正交）每個試樣平行次。（菌種接種量、3%、4%、、）（發(fā)酵時間為12h、、、48h）（D-果糖添加量0、0.5%1.0%、、）果糖為產(chǎn)CLA的最佳碳源（硫酸銨添加量00.5%、1.5%、2.0%(m/v)結(jié)合有機物牛肉膏更有利于乳酸菌的生長產(chǎn)量也最高。硫酸銨的添加量增加CLA產(chǎn)量反而有所減少子被吸收會導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH下降不利于CLA的產(chǎn)生?！趪夹惴f.產(chǎn)共軛亞油酸乳酸菌的選育及培養(yǎng)基的確定J].食品工業(yè)科技,2005,26(5):60～62.（氯化鈉添加量0、、、0.20%(m/v)）（直接添加LA較好LA加量為0.5‰‰‰(v/v)）（反應(yīng)溫度為2℃、℃、℃、℃）（發(fā)酵時間為12h、、、48h）考察菌體接種量亞油酸(LA)的添加量反應(yīng)溫度等因素對菌株嗜酸乳桿菌轉(zhuǎn)化培養(yǎng)條件的影響。分離化培養(yǎng)結(jié)束后離心高速冷凍離心機)收集菌體細胞。用蒸餾水洗滌次離心后稱重，及得生物量。離心后加入

4倍體積的的緩沖液混勻，以0.5%(m/v)的量添加溶菌酶℃保溫，1h)，然后再使用超聲波細胞破碎儀(聲，間歇90次在冰水浴中進行細胞破碎。破碎完成后進行離心)，所得上清液及為粗酶液。粗酶液的合成反應(yīng)取酶5mL加2mLLA乳濁底物(5%LA+5%緩沖液，放入冰水浴中超聲

功率放在搖床中℃120r/min反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后，待測。5共軛亞酸的檢脂肪酸的提取

反應(yīng)后的溶液中加入5ml正己烷，充分震蕩萃取，靜置后待分層，收集上清液在正己烷溶液中加如無水NH吸水干燥與30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，3去除有機溶劑，將余下的液體收集在試管中待測。GC-MS檢測共軛亞油酸以未接入菌種、其他步驟和條件同上的情況下所得到的正己烷萃取液為參比、正己烷為溶劑，于波長200nm～300nm處掃描樣品，觀察波長處有無特征吸收峰。若在該波長處有特征吸收峰者，表明其發(fā)酵液中有生成，讀取波長處吸光度值，根據(jù)CLA準(zhǔn)曲線所得CLA濃度，計算發(fā)酵液中CLA的生成量。用UV-1600可見紫外分光光度計在190nm對共軛亞油酸進行波長掃描，以確定其最大的吸收波長。其波長掃描圖如圖，得其最大吸收波長。*

圖2.1CLA最吸收波長掃描圖Fig.2.1Absorptionwavemaximum張智，余萍.嗜酸乳桿菌的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)[J].中國乳品工業(yè)35(6