低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒(直接法-表面活性劑清除法)標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程LDLC-SOP

低密度脂蛋膽固醇測(cè)定劑盒（直接-表面活性劑除法）標(biāo)準(zhǔn)化操作程1目的規(guī)范實(shí)驗(yàn)室操作，保證檢驗(yàn)工作順利有效進(jìn)行特制定此規(guī)程。2授權(quán)作人3適用圍4檢驗(yàn)法

經(jīng)培訓(xùn)且考核通過(guò)的臨床檢驗(yàn)人員。本試劑用于體外定量檢測(cè)血清中低密度脂蛋白膽固醇的濃度。本試劑采用直接測(cè)試法測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇的濃度。5檢驗(yàn)理樣本中的低密度脂蛋白膽固醇在試劑中表面活性劑的作用下被膽固醇脂酶選擇性地催化水解為膽固醇和游離脂肪酸，生成的膽固醇經(jīng)膽固醇氧化酶氧化生成膽-4-烯-3-酮過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的催化下與苯胺類色原物質(zhì)4-氨基安替比林作用產(chǎn)生水和醌亞胺色素，醌亞胺色素的生成量與樣本中低密度脂蛋白膽固醇的含量成正比，通過(guò)測(cè)定特定波長(zhǎng)處反應(yīng)最終生成的色素量，可以計(jì)算出樣本中低密度脂蛋白膽固醇的濃度。低密度脂蛋白膽固醇脂＋HO2

膽酯酶

膽固醇＋游離脂肪酸膽固醇+O2

膽醇化

膽甾-4-烯-3-酮＋HO2

2HO+4-氨基安替比林+苯胺類色原物質(zhì)22

過(guò)氧化物酶

醌亞胺色素+水6標(biāo)本求6.1樣本為血清,不得使用溶血、脂血或被污染的樣本。6.2樣本在2℃8℃可穩(wěn)定7天，-20℃可穩(wěn)定1個(gè)月。避免樣本反復(fù)凍融。7試劑配套品7.1試劑來(lái)源長(zhǎng)春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司低密度脂蛋白膽固醇試劑盒（直接測(cè)試法）7.2試劑組成試劑盒組成試劑1(R1)試劑2(R2)

主要組成成份4－氨基安替比林膽固醇氧化酶膽固醇酯酶過(guò)氧化物酶非離子表面活性劑緩液高分子化合物DSBmT非離子表面活性劑緩液

濃度/含量1mmol/L500U/L800U/L800U/L0.5%100mmol/L適量1.2%0.5%100mmol/L7.3試劑的穩(wěn)定性與貯存：7.3.1試劑在2℃8℃條件下，干燥、避光、密封貯存，有效期為個(gè)月。

7.3.2試劑開封后在2℃~8℃條件下可穩(wěn)定30天7.3.3請(qǐng)勿于0℃以下保存試劑。8實(shí)驗(yàn)器及性能指8.1實(shí)驗(yàn)儀器迪瑞CS系列全自動(dòng)生化分析儀8.2試劑性能指標(biāo)8.2.1試劑空白吸光度：A＜0.05。8.2.2分析靈敏度：測(cè)試1.00mmol/L的樣本時(shí)，吸光度變化△＞0.03。8.2.3線性范圍劑線性在[0.20區(qū)間內(nèi)性回歸系數(shù)r≥0.9950[0.202.00]mmol/L范圍內(nèi)，線性絕對(duì)偏差應(yīng)不超過(guò)±0.30mmol/L；2.00，11.60]mmol/L圍內(nèi)，線性相對(duì)偏差不超過(guò)±10％。8.2.4準(zhǔn)確度：相對(duì)偏差應(yīng)在±10%范圍內(nèi)。8.2.5測(cè)量精密度：重復(fù)性：CV≤3.0%。批間差：R≤7.0%。9校準(zhǔn)序9.1校準(zhǔn)品來(lái)源低密度脂蛋白膽固醇校準(zhǔn)品9.2校準(zhǔn)品的存貯使用注意事項(xiàng)：參見(jiàn)低密度脂蛋白膽固醇校準(zhǔn)品使用說(shuō)明書。9.3校準(zhǔn)程序建議使用迪瑞公司配套校準(zhǔn)品，以純化水和校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)測(cè)定，測(cè)定后儀器自動(dòng)擬合成校準(zhǔn)曲線。當(dāng)試劑批號(hào)更換或質(zhì)控失控時(shí)，需要重新校準(zhǔn)。10質(zhì)量控制10.1質(zhì)控品來(lái)源低密度脂蛋膽固醇白質(zhì)控品10.2質(zhì)控品存貯及使用注意事項(xiàng)參見(jiàn)低密度脂蛋白膽固醇質(zhì)控品使用說(shuō)明書。10.3質(zhì)量控制建議使用迪瑞公司配套質(zhì)控品，進(jìn)行質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)自行建立質(zhì)控區(qū)間和限值。若質(zhì)控值失控，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取糾正措施。11作程序11.1試劑配制試劑1和試劑2均為液體試劑，可直接使用。11.2項(xiàng)目參數(shù)：

測(cè)定溫度主波長(zhǎng)副波長(zhǎng)比色杯光徑測(cè)定模式反應(yīng)方向

37℃540nm～570nm660nm1.0cm2點(diǎn)終點(diǎn)法正反應(yīng)

R1用R2用樣本用量反應(yīng)時(shí)間吸光度范圍

300L100L4μL300s0A2A11.3樣本測(cè)試步驟：樣本用量:4L試劑R1用:300μL

記錄吸光度A1加試劑R2:100μL

溫度:37℃主波長(zhǎng):546nm副波長(zhǎng):660nm記錄吸光度A2300s300s11.4計(jì)算方法：-C/

樣本管△值校準(zhǔn)管△值

-C校準(zhǔn)mmol/L）單位換算：mmol/L×38.7=mg/dL11.5注意事項(xiàng)11.5.1本品僅用于體外診斷。11.5.2避免測(cè)試中途添加試劑。11.5.3試劑和樣本用量可根據(jù)不同儀器的要求按比例改變。12果判斷12.1樣本LDL-C濃度超過(guò)檢測(cè)范圍時(shí)，請(qǐng)用生理鹽水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。12.2血清中低密度脂蛋白膽固醇濃度的檢測(cè)只是臨床醫(yī)師對(duì)患者進(jìn)行診斷的指標(biāo)之一床醫(yī)師還要根據(jù)患者的體癥、病史以及其它的診斷項(xiàng)目、診斷手段進(jìn)行綜合判斷。13參考區(qū)間膽固醇值合適范圍與高膽固醇血癥判斷標(biāo)準(zhǔn)血清總膽固醇膽固醇值合適范圍5.17mmol/L以下

低密度脂蛋白膽固醇3.10mmol/L以下臨界范圍高膽固醇血癥

5.17～5.66mmol/L5.68mmol/L以上

3.10～3.59mmol/L3.62mmol/L以上引用的參考值范圍代表本法的期望值僅供參考建議各實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證這一參考范圍或建立自己的參考值范圍。14臨床意義低密度脂蛋白膽固醇上升是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病，特別是冠心病的危險(xiǎn)因素。檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病病因之一的高脂血癥診斷以往廣泛采用總膽固醇測(cè)定與總膽固醇值相比，

低密度脂蛋白膽固醇值與虛血性心疾患具有更高的相關(guān)性。15檢操作序按儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行復(fù)查操作。16方法局限16.1檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性依賴于儀器的校正和測(cè)定溫度、時(shí)間的控制。16.2當(dāng)樣本中黃疸＞68.8umol/L、血紅蛋白＞10g/L甘油三脂＞37mmol/L、抗壞血酸＞1.7mmol/L可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。17注意事項(xiàng)樣本、廢液等有潛在生物傳染性，操作者應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)定，并按當(dāng)?shù)蒯t(yī)療廢棄物、感染性廢棄物、產(chǎn)業(yè)廢棄物等規(guī)定處理廢液。18個(gè)人防護(hù)18.1請(qǐng)把標(biāo)本當(dāng)作可能感染、HBV、HCV等的危險(xiǎn)物質(zhì)處置。為了避免或減少相關(guān)傳染風(fēng)險(xiǎn)，請(qǐng)使用一次性手套。18.2若本試劑誤入眼內(nèi)或口中接觸到皮膚時(shí)迅速用水沖洗要時(shí)請(qǐng)接受醫(yī)生治療。19當(dāng)檢測(cè)系不能工時(shí)，所采取補(bǔ)救措器時(shí)。20參考文獻(xiàn)20.1YoungDS.EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests.AACCPress,1990.20.2郭占軍等低密度脂蛋白膽固醇均相測(cè)定方法研究進(jìn)展國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，21/6，p289～290200020.3劉兆銀等血清LDL-C動(dòng)化分析方法的研究進(jìn)展國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，20/2，5