快速檢驗(yàn)課件超獸殘檢測

第2節(jié)獸藥殘留快速檢測什么是獸藥殘留：

--FAO／WHO聯(lián)合組織的食品中獸藥殘留立法委員會把獸藥殘留定義為：獸藥殘留是指動物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及／或其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)的殘留。所以獸藥殘留既包括原藥也包括藥物在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物藥物或其代謝產(chǎn)物與內(nèi)源大分子共價(jià)結(jié)合產(chǎn)物稱為結(jié)合殘留。動物組織中存在共價(jià)結(jié)合物(結(jié)合殘留)則表明藥物對靶動物具有潛在毒性作用。

獸藥分類

抗生素類磺胺類呋喃藥類抗球蟲藥激素藥類驅(qū)蟲藥抗生素類驅(qū)腸蟲類生長促進(jìn)劑類抗原蟲藥類滅錐蟲藥類鎮(zhèn)靜劑類β2腎上腺素能受體阻斷劑獸藥殘留與食品安全意義增加人體細(xì)菌對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性致畸、致突變、致癌和生殖毒性一般毒性作用：急性中毒和慢性中毒變態(tài)反應(yīng)激素樣作用食品中獸藥殘留的來源預(yù)防和治療畜禽疾病用藥飼料添加劑中獸藥的使用食品保鮮中引入藥物免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留獸藥免疫學(xué)快檢方法的建立主要包括以下內(nèi)容：檢測對象的選擇，檢測對象結(jié)構(gòu)分析和免疫半抗原的合成、人工結(jié)合抗原的制備與鑒定、抗體的制備、檢測方法的確立與方法評價(jià)。膠體金免疫色譜試驗(yàn)測定法試紙制作原理：采用檸檬酸三鈉還原氯金酸(HAuCl4)聚合成納米金，由于納米金之間的靜電作用和布朗運(yùn)動，使其保持水溶膠狀態(tài)，膠體金富含電子和強(qiáng)大的給電子能力。在Ph8.2時(shí)，膠體金以非共價(jià)鍵與獸藥分子抗體結(jié)合形成金標(biāo)抗體，將金標(biāo)抗體吸附于玻璃纖維棉上，一端與固定有獸藥小分子蛋白質(zhì)偶聯(lián)物（檢測線）和二抗（質(zhì)控線）的硝酸纖維素膜（NC膜）相連，另一端與樣品墊相連。而后連同其他所需的吸水纖維、支撐材料、覆蓋材料等按照設(shè)計(jì)工藝進(jìn)行制作和組裝，制成快速檢測試紙。檢測原理檢測樣品中不含獸藥小分子，金標(biāo)抗體就會與獸藥小分子蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)而被部分截獲，金顆粒富集出現(xiàn)明顯的紅色條帶，未完全結(jié)合的金標(biāo)抗體至質(zhì)控線時(shí)同樣會出現(xiàn)紅色條帶；檢測樣品中含有獸藥小分子，獸藥小分子與獸藥小分子蛋白偶聯(lián)物競爭性結(jié)合金標(biāo)抗體，檢測線不出現(xiàn)或出現(xiàn)很弱的紅色條帶。解釋一下這個(gè)圖？瘦肉精（鹽酸克倫特羅）的快速檢測

方法編號：CDC/SB119瘦肉精是一類藥物，而不是一種特定的物質(zhì)，是指能夠促進(jìn)瘦肉生長的飼料添加劑。任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。目前，能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類叫做β-興奮劑（β-agonist）的藥物，比如在中國造成中毒的克倫特羅（clenbuterol）和美國允許使用的雷托巴胺（Ractopamine）。樣本滲出液的檢出限為3ng/ml。檢測原理

樣本中的“瘦肉精”在流動的過程中與膠體金（或膠體硒）標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測線上“瘦肉精”－蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本滲出液中“瘦肉精”含量大于3ng/ml，檢測線不顯顏色，結(jié)果為陽性。反之，檢測線顯紅色，結(jié)果為陰性。2、試劑組成“瘦肉精”快速檢測卡；展開液；一次性塑料吸管；一次性塑料手套；對照液。3、標(biāo)本收集肉及內(nèi)臟樣本（包括精肉、肝臟、肺臟和腎臟）立即檢測或收集在塑料袋中送檢。若不能及時(shí)檢測，樣本在2-8℃冷藏可保存24小時(shí)，-20℃冷凍保存1周，冷凍時(shí)忌反復(fù)凍融。4、操作步驟以及結(jié)果判讀：

⑴

測試前將未開封的檢測卡恢復(fù)至室溫。⑵

將瘦肉或內(nèi)臟樣本剪碎，裝入1.5ml離心管中，蓋緊管蓋。放入沸水浴中加熱5分鐘以上使有液汁浸出，取出離心管放至室溫。⑶

從鋁箔袋中取出檢測卡（在一小時(shí)內(nèi)使用）。

⑷將檢測卡平放于臺面，用塑料吸管垂直滴加1滴無氣泡的樣本滲出液(約20-30ul)于加樣孔，30秒后再加入展開液2-3滴(約60-80ul)。⑸

反應(yīng)10min后，展開區(qū)出現(xiàn)紫色條帶為陰性結(jié)果，無條帶者為陽性結(jié)果。5、注意事項(xiàng)：⑴

檢測卡在室溫下一次性使用。

⑵

脂肪會導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時(shí)請棄去肉眼可見的脂肪部分。⑶

檢測時(shí)避免陽光直射。⑷

出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)用本卡復(fù)查并作陽性對照實(shí)驗(yàn)。必要時(shí)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步定量。⑸

附帶的瘦肉精陽性對照液為5ng/ml。酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA法)夾心法ELISA？競爭抑制法ELISA金霉素四環(huán)素氯霉素硝基咪唑磺胺類鏈霉素鏈霉素ELISA試劑盒檢測對象：蜂蜜、牛乳及組織中鏈霉素原理利用競爭抑制法?？规溍顾乜贵w預(yù)包到微孔板的孔內(nèi)，依次加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)品、鏈霉素酶標(biāo)記物，孵育一段時(shí)間，沖洗，加入酶基質(zhì)（過氧化脲）和發(fā)色劑TMB(四甲基聯(lián)苯胺)孵育一段時(shí)間，TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。未顯示色孔為陽性，顯示孔為陰性。直接在630nm處讀取OD值，或者加入終止液使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色讀取450nm處OD值。微生物法快速檢測獸藥殘留微生物法快速檢測獸藥殘留是利用抗菌藥物對微生物生理功能、代謝的抑制作用，來定性或定量確定樣品中藥物殘留。平皿法FastAntimicrobialScreenTest（FAST法）SwabTestonPremises(STOP法)CalfAntibioticandSulfa(CAST法)GermanThreePlateTest德國三碟實(shí)驗(yàn)法EuropeaUnionFourPlateTest歐盟四碟實(shí)驗(yàn)法LiveAnimalSwabTest活體動物拭子法生化檢測法檢測鮮乳中的抗菌藥物的TTC法原理：乳中無抗菌素，加入嗜熱乳鏈球菌菌液即行繁殖，生物氧化產(chǎn)生的氫使TTC被還原而顯紅色。乳中有抗菌素，加入菌液不繁殖，無氫產(chǎn)生TTC保持原來氧化型無色。即：檢樣呈乳的原色時(shí)為陽性呈紅色為陰性

4、鮮乳中抗生素殘留

檢驗(yàn)程序Delvotest法：該方法也是生物測定法，原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養(yǎng)