獸醫(yī)流行病學(xué)劉血清流行病學(xué)

獸醫(yī)流行病學(xué)劉血清流行病學(xué)第1頁/共35頁第十一章血清流行病學(xué)

用血清學(xué)（免疫學(xué)）的方法進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查分析，以闡明疾病在群體中的分布和原因，檢驗疾病防制措施的效果。第2頁/共35頁血清可測量物質(zhì)及疾病相關(guān)指標(biāo)：礦物質(zhì)、微量元素、酶和激素、特異抗體

第一節(jié)概述第3頁/共35頁二、用途

1、闡明疾病的分布規(guī)律特異抗體可以提供畜群是否暴露于傳染病病原體的證據(jù)。以隱性感染為主的疾病，除了進(jìn)行發(fā)病分布研究外，同時檢測相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行分析研究。第4頁/共35頁2、尋找與病因相關(guān)的因素追溯診斷：收集發(fā)病早期和康復(fù)期雙份血清，抗體效價升高4倍以上。在肝癌病人血清中HBsAg和抗HBe的檢出率明顯高于對照組。血脂、膽固醇與冠心病的關(guān)系。高水平免疫球蛋白與慢性病的關(guān)系。

第5頁/共35頁3、評價防制措施的效果評價生物制品接種效果。4、疾病監(jiān)測和疫情預(yù)報了解動物群體對某病易感和免疫水平的動態(tài)變化。群體中易感動物比例越大，流行強(qiáng)度越大。第6頁/共35頁三、方法（一）調(diào)查方法

1、短期調(diào)查確定是否存在疾病。

2、長期調(diào)查監(jiān)測抗體水平和疾病流行的動態(tài)變化。第7頁/共35頁（二）檢測方法凝集試驗(HA)、血球凝集抑制試驗(HI)、葡萄球菌A蛋白(SPA)協(xié)同凝集試驗、間接血球凝集試驗(IHA)、瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗(AGP)、補體結(jié)合試驗(CF)、免疫熒光試驗(IF)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)第8頁/共35頁（三）分析方法篩檢（screening）試驗：快速簡便、早期發(fā)現(xiàn)可能有病動物。篩檢出的可疑或陽性病畜均需進(jìn)一步確診。

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第二節(jié)血清抗體的測定一、抗體量的表示法滴度—產(chǎn)生試驗反應(yīng)的血清最高稀釋度（陽性、陰性、陽轉(zhuǎn)）滴度的對數(shù)轉(zhuǎn)換（適合于正態(tài)分布檢驗）

對數(shù)平均滴度幾何平均滴度第10頁/共35頁第11頁/共35頁二、抗體測定單系列稀釋測定每一稀釋度測一次，抗體滴度是區(qū)間滴度

多系列稀釋測定每個稀釋度測定幾次，50%終點測定抗體滴度：50%試驗組成員產(chǎn)生特定后果的血清稀釋度，用半數(shù)有效量(ED50)表示第12頁/共35頁血清稀釋度Log10稀釋度細(xì)胞病變單層數(shù)完整單層數(shù)陽性比例（P)1-P1/10.0051.000.001/2-0.3051.000.001/4-0.6051.000.001/8-0.9140.800.201/16-1.2140.800.201/32-1.5320.400.601/64-1.8410.200.801/128-2.1500.001.00血清抗體50%終點測定第13頁/共35頁Spearman-K?rber法log10ED50=L-d(Σp-0.5)L=顯示全部陽性結(jié)果的最高稀釋度對數(shù)d=稀釋系數(shù)的對數(shù)∑p=從顯示全部陽性結(jié)果的最高稀釋度開始的各稀釋度試驗陽性比例總和

L=-0.6d=log102=0.3Σp=1.00+0.80+0.80+0.40+0.20=3.20ED50=1/25.1即0.1ml血清含有25.1個ED50，則1ml血清含有251個ED50。第14頁/共35頁

標(biāo)準(zhǔn)誤（e.s.e）

e.s.e(log10ED50)=n為每一組中的試驗重復(fù)數(shù)。

log10e.s.e

=0.3 =0.13因此，滴度可以表示為每0.1ml含101.4±0.13ED50，或每毫升含102.4±0.13ED50。

第15頁/共35頁三、畜群中血清抗體水平的估計和比較1、檢測抗體的存在對畜群作抽樣調(diào)查2、抗體水平的比較不同畜群的比較根據(jù)抗體存在與否比較兩個畜群，可用卡方檢驗比較兩群體中抗體的頻率分布，可用參數(shù)檢驗同一畜群不同估計值的比較第16頁/共35頁第三節(jié)血清學(xué)試驗的解釋一、精密性不同的流行菌株、毒株存在抗原差異。隨著單克隆抗體的出現(xiàn)，檢測病原體細(xì)微抗原差異的能力已大大提高，有助于感染起源和流行范圍的確定。第17頁/共35頁二、準(zhǔn)確性陽性結(jié)果

真陽性—確定遭受該病病原體的感染

交叉反應(yīng)，同一群病原體或相關(guān)病原體之間的交叉反應(yīng)假陽性雙重感染，而其中只有一種是臨床發(fā)病的病原體

非特異性反應(yīng)，非特異抑制劑、非特異凝集素技術(shù)誤差第18頁/共35頁陰性結(jié)果真陰性—確定未遭受該病病原體的感染

標(biāo)本采集時間不當(dāng)試驗選用不當(dāng)假陰性抗生素誘導(dǎo)的抗體產(chǎn)生受到抑制不完全或封閉抗體存在自然或誘發(fā)的免疫耐受技術(shù)誤差

第19頁/共35頁三、敏感性和特異性敏感性：實際感染而按診斷標(biāo)準(zhǔn)被判定為感染的百分率。特異性：實際未感染而按診斷標(biāo)準(zhǔn)被判定為未感染的百分率。第20頁/共35頁敏感性和特異性的關(guān)系第21頁/共35頁檢測抗原和抗體的試驗的相對敏感性方法近似敏感性(每dl)用雙縮或折射儀測定血清總蛋白質(zhì)100mg血清蛋白質(zhì)電泳(區(qū)帶電泳)100mg分析性超速離心100mg免疫電泳5～10mg免疫結(jié)合5～10mg單向輻射擴(kuò)散<1～2mg瓊脂雙擴(kuò)散<1mg電泳免疫擴(kuò)散(火箭電泳)<0.5mg一維雙電泳免疫擴(kuò)散(對流免疫電泳)<0.1mg濁度計0.1mg補體結(jié)合試驗1μg凝集試驗1μg酶免疫測定（ELISA）<1μg定量免疫熒光<1pg放射免疫測定<1pg第22頁/共35頁

平行（并聯(lián)）試驗當(dāng)漏掉一個病例后果嚴(yán)重或再進(jìn)行篩檢比較困難時，要盡量減少漏診率。試驗1試驗2判斷結(jié)果++++-+-++---幾個指標(biāo)中有一個陽性即診斷為陽性。靈敏度提高，但特異度降低。第23頁/共35頁例如流產(chǎn)奶牛布魯氏菌病檢查陰道拭子細(xì)菌培養(yǎng)、血清的虎紅平板試驗和乳汁環(huán)狀試驗，任一試驗陽性就認(rèn)為感染。在發(fā)生疫情要求迅速作出判定時，常常采用平行試驗。

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系列（串聯(lián)）試驗當(dāng)誤診會造成嚴(yán)重后果時，幾個指標(biāo)均為陽性才能診斷。提高了特異度，可以減少誤診率，但卻增加了漏診率。試驗1試驗2判斷結(jié)果++++---+----第25頁/共35頁疾病根除計劃常采用系列試驗從群體中淘汰陽性動物。最初篩檢試驗是有病的動物，再經(jīng)進(jìn)一步試驗加以證實，從而排除假陽性。第26頁/共35頁四、預(yù)測值PT=真陽性+假陽性=P×敏感性+（1-P）×（1-特異性）

假定P=0.01，敏感性=0.99，特異性=0.99則：PT=0.01×0.99+(1-0.01)×(1-0.99)=0.02

實際患病率是0.01，而估計的患病率是0.02。第27頁/共35頁如果知道試驗的敏感性和特異性，則可以通過下式得到真正患病率P的正確估計值：

P=第28頁/共35頁陽性預(yù)測值—試驗陽性動物實際也是陽性的概率陰性預(yù)測值—試驗陰性動物實際也是陰性的概率陽性預(yù)測值=a/a+b=

陰性預(yù)測值=d/c+d=第29頁/共35頁陽性預(yù)測值低—試驗陽性，但難以作出有病診斷；陰性預(yù)測值低—試驗陰性，但難以排除無病。一種篩檢方法應(yīng)用于不同患病率的畜群，陽性（或陰性）結(jié)果所表示的意義不同。判斷篩檢方法的診斷價值，需要參考畜群的患病率。預(yù)測值的意義第30頁/共35頁不同患病率水平牛群陽性結(jié)果預(yù)測值

（布魯氏菌病試管凝集試驗敏感性62%