高效液相流動相緩沖鹽選擇

之袁州冬雪創(chuàng)作下面內(nèi)容綜合了Agilent和網(wǎng)上查到的一些資料：一般來講，反相HPLC的活動相包含有機(jī)相和水相，有機(jī)相常常使用的為色譜甲醇和乙腈，不太常常使用的還有四氫呋喃和異丙醇甲醇有其性價比的優(yōu)勢，但是甲醇活性高，可以與某些樣品發(fā)生反應(yīng)，而且甲醇在低波長下有紫外吸收，會降低分析方法的活絡(luò)度；乙腈雖然價格很高，毒性比甲醇大，但是洗脫才能比甲醇強(qiáng)，很少與樣品發(fā)生反應(yīng)，用作活動相系統(tǒng)壓力要比甲醇低很多，且截止波長比甲醇低20nm,增加了檢測出在低波長下才有吸收的雜質(zhì)的可以性，所以我們一般傾向于多用乙腈，少用甲醇.但是當(dāng)樣品峰形欠好或者分離欠好時，更換溶劑是一個很好的選擇，因為分歧的溶劑可提供分歧的選擇性.在反相色譜中，活動相中水相的pH和離子強(qiáng)度在開辟對條件微小變更不敏感的耐用方法中非常重要.對于離子型化合物，典型樣品的保存隨pH改變而分明變更，因此節(jié)制pH對于保存和選擇性的穩(wěn)定非常重要，通常在pH2~4的條件下，保存時間對pH的微小改變穩(wěn)定性最高，因此建議將這一pH范圍作為大多數(shù)樣品方法開辟的起始pH,包含堿性化合物和一般的弱酸?思索到重現(xiàn)性，所用的pH應(yīng)高于或低于待分析物pKa或pKb上下一個pH單位.當(dāng)待分析物pKa或pKb未知時，應(yīng)測試一種以上活動相pH（如pH2.0和pH6.5緩沖鹽溶液），可提供最好成果.對活動相的優(yōu)化主要體現(xiàn)在

水相上?活動相pH值對色譜分離的影響有多鐘方式，根據(jù)待分析物的布局性質(zhì)，pH可以影響選擇性、峰形和保存?如果是非極性較強(qiáng)或中性的化合物，pH對分離度和保存的影響一般不分明.如果是可離子化的化合物，如酸或堿，保存因子和選擇性隨pH改變非常分明.（1）酸性分析物，應(yīng)選擇低pH緩沖液活動相，以防止分析物離子化?懂得分析物的pKa，才干有效的選擇活動相pH.緩沖范圍應(yīng)在其緩沖液離子pK值±1pH單位，使活動相的優(yōu)化具有一定的矯捷性?例如，醋酸鹽的pKa為4.8，緩沖范圍為pH3.8~5.8.（2）堿性化合物，在高pH條件下才干得到其非離子形態(tài)，但這對色譜柱晦氣?通常許多堿性化合物在低pH條件的保存就已經(jīng)知足要求了，所以可選擇低pH條件?如果選擇高pH條件，則注意需選擇耐強(qiáng)堿的色譜柱.水里可以加酸、加堿、加鹽，從而改變pH值、改善峰形、提高分離度?常常使用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等.單純做液相時，低波長下磷酸最合適；而做液質(zhì)時首選三氟乙酸，或甲酸、乙酸.開辟液相分析方法時活動相可首選0.1%的磷酸水溶液，然后再以此為基礎(chǔ)做優(yōu)化.在單獨(dú)用酸不成的時候再思索使用緩沖鹽，緩沖鹽的選擇原則是：簡單、穩(wěn)定、緩沖才能強(qiáng)、配制簡單，需要調(diào)pH值時要有相應(yīng)的酸或堿?常常使用的緩沖鹽是磷酸鹽，主要是鉀鹽和鈉鹽，還有醋酸鹽，常常使用的鹽濃度在10~20mM左右（根據(jù)實(shí)際情況，有時可

以選擇更低或更高濃度，建議最高濃度不超出50mM）.下表是Waters提供的一個資料，慣例實(shí)驗室建議使用的緩沖鹽體系.緩沖鹽/活動相改性劑pKa緩沖范圍揮發(fā)性？仕1pH）是否MS兼容？備注TFA-是是離子對試劑，可以抑制MS信號，通常使用的濃度范圍0.02~0.1%乙酸-是是同乙酸銨一起使用具有最大的緩沖才能，通常使用的濃度范圍0.1~1.0%甲酸-是是同甲酸銨一起使用具有最大的緩沖才能，通常使用的濃度范圍0.1~1.0%乙酸鹽（銨鹽）是是通常使用1~10mM濃度，注意鉀鹽和鈉鹽是非揮發(fā)性的甲酸鹽（銨鹽）是是通常使用1~10mM濃度，注意鉀鹽和鈉鹽是非揮發(fā)性的磷酸鹽1否否傳統(tǒng)的低pH緩沖體系，UV透光度很好磷酸鹽2否否當(dāng)pH超出7時，降低操縱溫度/緩沖鹽濃度以及使用呵護(hù)柱可以延長色譜柱壽命磷酸鹽3否否當(dāng)pH超出8時，降低操縱溫

度/緩沖鹽濃度以及使用呵護(hù)柱可以延長色譜柱壽命4-甲基嗎啡啉是是通常使用濃度為10mM或更少氨水碳酸氫銨9.210.3(HCO3-)9.2(NH4+)是是通常使用濃度為5~10mM（用于MS工作時堅持離子源溫度超出150C）.用氨水或乙酸調(diào)節(jié)pH值，在pH10時具有很好的緩沖才能.乙酸銨是是通常使用濃度為1~10mM甲酸銨是是通常使用濃度為1~10mM硼酸否否降低溫度，減少濃度并使用色譜柱來延長柱壽命CAPSO（3-環(huán)己胺基-2-羥基丙磺酸否否兩性離子緩沖液，同乙腈互溶，通常使用濃度為1~10mM,氣味小Glycine甘氨酸否否兩性離子緩沖液，比使用硼酸鹽對柱子的損傷更小些1-甲基哌啶是是通常使用濃度為1~10mMCAPS否否兩性離子緩沖液，同乙腈互溶，通常使用濃度為1~10mM,氣味小三