TCACM 1326.8-2019 化州柚種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程

ICS11.120.01C23團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CACM1326.8—2019化州柚種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofCitrusmaxima(Burm.)Merr.cv.Tomentosayseeds2019-10-17布 2019-10-17中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 會(huì) 發(fā)布T/CACM1326.8—2019T/CACM1326.8—2019II目 次前言 II112范引文件 13語(yǔ)定義 14子收選擇 24.1子收 4.2子擇 5子處理 25.1活力 25.2水范圍 6子存量 27子凍式 28復(fù)養(yǎng) 28.1子凍理 8.2后子活測(cè) 8.3芽苗 附錄A（范附）劑的置保方法 4參考獻(xiàn) 5T/CACM1326.8—2019T/CACM1326.8—2019鏈鏈鏈鏈前 言本標(biāo)準(zhǔn)是藥用植物頑拗性種子超低溫保存系列標(biāo)準(zhǔn)之一，該系列標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)和名稱如下：——T/CACM1326.1藥用植物頑拗性種子超低溫保存技術(shù)通則；——T/CACM1326.2白木香種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；——T/CACM1326.3——T/CACM1326.4——T/CACM1326.5——T/CACM1326.6——T/CACM1326.7——T/CACM1326.8——T/CACM1326.9樟種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；——T/CACM1326.10兩面針?lè)N子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；………………。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第本標(biāo)準(zhǔn)由中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)歸口。化州柚種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程范圍Citrusmaxima(Burm.)Merrcv.‘Tomentosay本標(biāo)準(zhǔn)適用于化州柚種子的超低溫長(zhǎng)期貯藏。GB/T3543.6GB/T3543.7下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1化州柚 Citrusmaxima(Burm.)Merr.cv.‘Tomentosay’（Citrus（2015。3.2化州柚果實(shí)Citrusmaxima(Burm.)Merr.cv.‘Tomentosay’fruits10cm～15，寬11cm～13cm；803.3Citrusmaxima(Burm.)Merrcv.‘Tomentosa’seeds13.4種子低保存 seedofcryopreservation將經(jīng)過(guò)前處理的化州柚種子置于液氮（-196℃）中保存。10月～11月果實(shí)成熟，采收成熟果實(shí)，剝開(kāi)瓢囊，去除果皮和果肉，取出種子。挑選發(fā)育飽滿、均勻、健康的種子為保存材料，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫ù娣艜r(shí)間不超過(guò)1周）。活力化州柚種子活力以種子生活力為判別標(biāo)準(zhǔn)。按照GB/T3543.7中的2、3、5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法檢測(cè)種子生活力。隨機(jī)抽取30粒種子，剝?nèi)ネ鈱臃N皮，沿種脊小心將種子分成2瓣后放培養(yǎng)皿內(nèi)，內(nèi)側(cè)面向下，滴入TTC溶液浸沒(méi)種子，室溫(25℃)避光放置4h后，觀察染色結(jié)果。TTC溶液的配制和保存方法見(jiàn)附錄A的A.1和A.2。在光下用放大鏡對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察鑒定。凡種胚周圍出現(xiàn)黃色暈圈的種子為有活力的種子，否則為無(wú)活力的種子。待保存的化州柚種子生活力應(yīng)≥60％。生活力按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算：式中：A——生活力；y——有活力的種子數(shù)；x——總的種子數(shù)。30h～120h3％～102按照GB/T3543.6中的高溫烘干法（130℃烘干1h）測(cè)定種子含水量，并按照公式（2）進(jìn)行計(jì)算。式中：W0——種子含水量；用百分?jǐn)?shù)表示（％）；M1——種子鮮重，單位為克（g）；M2——種子烘后重量，單位為克（g）?；蓁址N子保存量不應(yīng)少于500粒。化州柚種子超低溫保存的冷凍方式為分步冷凍法，即將待保存的化州柚種子在室溫下放入加有玻璃化溶液（PVS2）的15mL凍存管（每管30粒種子）中，置于4℃冰箱中0.5h，取出立即放入-20℃冰柜中1h，之后迅速投入液氮中保存（液體浸泡種子即可）。PVS2的配置方法見(jiàn)附錄A的A.3。液氮中至少凍存24h后，取出2個(gè)凍存管，立即放入40℃水浴中快速解凍2min，之后用洗滌液（DS），（每升MS溶液中含1.2mol蔗糖）浸泡5min，并用純凈水洗滌3次。DS的配置方法見(jiàn)附錄A的A.4。取出1管解凍后的種子，按照5.1活力檢測(cè)方法，進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測(cè)。當(dāng)種子生活力≥60％時(shí)視為保存成功。將剩下125℃～30℃，濕度70％～8510d～20d3附 錄 A（）A.1 TTC精密稱取TTC1.00g，溶于100mL磷酸鹽緩沖液中，制成濃度為1％的TTC溶液，調(diào)pH至6.5～7.5，放入棕色瓶?jī)?nèi)，置于4℃冰箱備用。溶液Ⅰ：9.081溶液Ⅱ：35.81gL按Ⅰ:Ⅱ=2:3PVS2精密量取甘油23.8mL、乙二醇13.6mL、二甲亞砜13.6mL，稱取蔗糖13.7g，溶于MS溶液中，定容至100mL，調(diào)pH值至5.8，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。注：配置時(shí)需戴手套，并在通風(fēng)廚內(nèi)操作。DS精密稱取蔗糖41.1g溶于MS溶液中，定容至100mL，調(diào)pH值至5.8，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。4參考文獻(xiàn)M，2015,74-75[2]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志委員會(huì).中國(guó)植物志.第43(2)卷[M].科學(xué)出版社,2004(1997)：187[M]2004:1ReedBM.PlantCryopreservation?APracticalGuide[M].Springer,2010:3HorYL，KimYJ，Ugap