微生物學實驗水中大腸菌群的簡易檢測

微生物學實驗水中大腸菌群的簡易檢測第一頁，共十三頁，2022年，8月28日了解水質狀況與細菌數量的聯(lián)系。了解水中細菌總數的測定依據及應用，掌握水中細菌總數測定的方法及操作。了解飲水健康與水中大腸菌群的聯(lián)系，掌握水中大腸菌群簡易檢測的方法及操作。實驗目的第二頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理水中細菌總數可以說明水被有機物污染的程度，細菌數越多，有機物質含量越大。水中細菌種類繁多，生長條件各異。在一種培養(yǎng)條件下滿足所有細菌生長是不可能的。通常采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，測得水中細菌總數的近似值。水中病原菌（如沙門氏菌、志賀氏菌等）多數源于病人和病畜的糞便，病原菌數量少且檢測過程復雜。大腸菌群作為腸道內的正常菌，在糞便中數量大，且體外的存活時間與腸道致病菌相近，因此，一般采用測定大腸菌群數量來判斷水源是否被糞便污染，并推測是否受腸道病原菌污染的可能。第三頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理大腸菌群并非細菌學分類命名，不代表某一種或某一屬細菌。是衛(wèi)生細菌檢測領域用語，指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌。大腸菌群是一群好氧和兼性厭氧、無芽孢的革蘭氏陰性桿菌，在乳糖培養(yǎng)基中經37℃培養(yǎng)24~48h，能產酸產氣。主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和檸檬酸桿菌屬，這類菌是溫血動物腸道內的正常菌群，隨糞便污染水源。測定大腸菌群的方法有多管發(fā)酵法、濾膜法和各種簡便檢測盒。國家標準中采用的多管發(fā)酵法分為三步：初發(fā)酵試驗、平板分離培養(yǎng)和復發(fā)酵試驗。第四頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理第五頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理伊紅美蘭瓊脂平板含有伊紅與美蘭染料，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境是，該兩種種染料即可結合成復合物，使大腸菌群產生帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落。濾膜法是將水樣通過一定孔徑的濾膜，然后將濾膜放在適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)計數。第六頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理第七頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗原理我國1985年起實施的飲用水衛(wèi)生標準（GB5749-85)規(guī)定：1毫升自來水中的細菌總數不得超過100個，每升自來水中腸道菌群不得超過3個。第八頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗內容一、自來水中細菌總數的測定

1、采水樣：開放水龍頭使水流5min，以無菌三角瓶接取水樣，迅速測定。 2、用無菌吸管分別吸取1ml水樣與兩個無菌平皿中，分別倒入融化并冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，立即旋轉混勻。 3、另取一無菌培養(yǎng)皿，傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，作為空白對照。 4、凝固后倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后計數，取兩皿平均數作為1ml水樣中的細菌總數。第九頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗內容注意事項：自來水取樣時避免取樣中造成污染。自來水中含有余氯，可能對細菌有殺滅和抑制作用，會造成結果偏低或假陰性，可以加入少量硫代硫酸鈉，與氯發(fā)生反應。操作過程要迅速，避免雜菌污染。傾注培養(yǎng)基時溫度應冷卻至45℃，避免燙死細菌。第十頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗內容二、池水中大腸菌群的簡易檢測

1、采取水樣：取學?！拌b湖”水面10~15cm，離岸邊5cm的水樣，立即測試。 2、稀釋水樣：取3支無菌試管，分別加9ml無菌水，加1ml水樣到第一管內搖勻，再自第一管中取1ml至第二管中，如此稀釋到第4管。 3、吸取第三、第四管稀釋液各1ml至無菌平皿中，每一個稀釋度重復兩皿。 4、各傾注已經融化并冷卻至45℃左右的伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基，立即搖勻。 5、凝固后倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后計數。第十一頁，共十三頁，2022年，8月28日實驗要求1、本次實驗四人一組。通過實驗結果分析實驗室自來水樣是否符合標準。2、每組完成后清洗10個培養(yǎng)皿，包1包培養(yǎng)皿、1包（5支1ml）移液管、1包試管（5支）。3、每組衛(wèi)生區(qū)域打掃干凈后才能離開。4、值日生配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基500ml并分裝在錐形瓶內。第十二頁，共十