醫(yī)學(xué)研究生論文答辯范文

BEAConfidential.|1小組成員：鄭麗金施桂姣張寧

指導(dǎo)老師：汪世華教授T-2毒素誘導(dǎo)BALB/C小鼠肝臟損傷差異

表達(dá)蛋白質(zhì)分析及其意義的初步研究

2課題的研究意義4結(jié)果分析與討論3實(shí)驗(yàn)的技術(shù)路線提綱5實(shí)驗(yàn)展望1課題的相關(guān)背景

T-2毒素是鐮刀菌屬真菌(主要是三線鐮刀菌Fusariumtrieinetum)的一種代謝產(chǎn)物，是隸屬單端孢霉烯族霉素毒性最強(qiáng)的一種毒素，廣泛存在于糧食作物及其半成品中。1課題的相關(guān)背景T-2毒素是由Bamburg于1968年首次別離提純并確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，屬A組單端孢霉烯族毒素。它是由鐮刀菌產(chǎn)生的一種有毒代謝產(chǎn)物，其化學(xué)名稱為4,15-二乙酰氧基-8-12,13-環(huán)氧單端孢霉-9-烯-3-醇。人畜誤食污染的谷物后，可引起嘔吐、腹瀉、發(fā)燒等急性中毒病癥，嚴(yán)重時(shí)損害造血系統(tǒng)，造成人畜死亡。1973年聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織〔FAO〕和世界衛(wèi)生組織〔WHO〕在日內(nèi)瓦召開的聯(lián)席會(huì)議上，把T-2毒素同黃曲霉素一樣作為自然存在的最危險(xiǎn)的食品污染源。本研究通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)比較正常和染毒情況下小鼠肝臟蛋白質(zhì)的差異表達(dá)情況，找到與病理改變有關(guān)的一系列疾病特異性差異蛋白質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)以昆明鼠作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，不但大大降低了試?yàn)本錢，而且為T-2毒素致病機(jī)理的研究指明方向，為完善由T-2毒素誘導(dǎo)的疾病發(fā)生信號(hào)通路提供新的信息。2課題的研究意義3實(shí)驗(yàn)的技術(shù)路線

T-2毒素配制雙向凝膠電泳提取肝臟總蛋白灌胃感染小鼠PDQuest軟件分析蛋白質(zhì)尋找差異蛋白4結(jié)果分析與討論4.1經(jīng)灌胃十六周后小鼠狀態(tài)比較4.2不同組小白鼠的肝臟比較4.3蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及不同組鼠肝蛋白濃度測(cè)定4.4不同組小白鼠肝臟蛋白雙向電泳分析4.1

小鼠免疫圖5不同組小白鼠的體形比較圖經(jīng)灌胃十六周后小鼠狀態(tài)比較ABC4.2不同組小白鼠的肝臟比較C圖6不同組小白鼠的肝臟比較圖AB4.3蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及不同組鼠肝蛋白濃度測(cè)定圖7Bradford法測(cè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出A、B、C三組小白鼠肝臟蛋白的濃度分別為2.4g/L，5.2g/L，6.3g/L

。4.4不同組小白鼠肝臟蛋白雙向電泳分析

圖8不同組小白鼠肝臟蛋白雙向電泳圖4.4.1雙向電泳差異圖譜IEF〔pH3.5-10：pH5-8=1：3〕A對(duì)照組SDSB小劑量毒素組圖8不同組小白鼠肝臟蛋白雙向電泳圖C大劑量毒素組圖8不同組小白鼠肝臟蛋白雙向電泳圖三組鼠肝蛋白的2-DE圖譜比較分析圖9不同組小白鼠肝臟蛋白局部新增差異表達(dá)蛋白圖譜放大比較圖

ABC

ABC圖7不同組小白鼠肝臟蛋白含量降低差異表達(dá)蛋白圖譜放大比較圖ABC圖7不同組小白鼠肝臟蛋白含量降低差異表達(dá)蛋白圖譜放大比較圖圖10不同組小白鼠肝臟蛋白局部消失差異表達(dá)蛋白圖譜放大比較圖ABCABC圖10不同組小白鼠肝臟蛋白局部消失差異表達(dá)蛋白圖譜放大比較圖5.實(shí)驗(yàn)展望將對(duì)照組、小劑量毒素組和大劑量毒素組小白鼠肝臟蛋白的2-DE圖譜進(jìn)行比較分析，三者的主要蛋白質(zhì)組分非常相似，但也存在大小和有無(wú)的差異，本研究共發(fā)現(xiàn)9個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。下一步我們將采用質(zhì)譜分析得到蛋白的氨基酸序列，用生物信息學(xué)軟件分析預(yù)測(cè)其結(jié)構(gòu)及功能。

這能夠?yàn)橄到y(tǒng)地揭示T-2毒素的致病機(jī)制鋪平道路，為完善肝癌的發(fā)生通路提供有益信息，為疾病的診斷提供新的分子標(biāo)記，為治療和藥物開發(fā)提供有效的靶標(biāo)，具有重要的理論和