藥物制劑的微生物學檢查

藥物制劑的微生物學檢查第一頁，共三十七頁，2022年，8月28日無菌制劑的無菌檢查

各種注射劑、手術用滴眼劑要求無菌、無熱原質，尤其是直接注入病人血管內的注射劑，如被微生物或熱原質污染即有可能引起發(fā)熱、菌血癥、中毒性休克甚至死亡等等。因此藥典規(guī)定出廠前都必須做無菌檢查以確保安全。第二頁，共三十七頁，2022年，8月28日無菌檢查的基本原則：在無菌操作情況下將被檢測的藥品，按其劑型的不同分別取一定量加入適合各類微生物生長的不同培養(yǎng)基（需氧菌、厭氧菌及真菌培養(yǎng)基）中，在各自適宜的條件下進行培養(yǎng)。在規(guī)定時間內觀察有無微生物生長，以判斷藥品是否符合要求確為無菌。第三頁，共三十七頁，2022年，8月28日一般注射劑系指本身不含任何抗菌或抑菌成分，而且其為水溶性的藥品的無菌檢查特殊注射劑油劑性藥物含抑菌或防腐成分藥物第四頁，共三十七頁，2022年，8月28日一般注射劑的無菌檢查直接接種法第五頁，共三十七頁，2022年，8月28日需氧菌和厭氧菌的培養(yǎng)已全部采用硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基檢查。在同一培養(yǎng)基中，需氧菌在培養(yǎng)基表面生長，而厭氧菌在培養(yǎng)基內生長。真菌檢查用真菌培養(yǎng)基

第六頁，共三十七頁，2022年，8月28日硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基硫乙醇酸鈉還原劑亞甲藍氧化還原指示劑下層－－厭氧－－無色上層－－需氧－－藍綠色第七頁，共三十七頁，2022年，8月28日陽性對照：需氧菌：藤黃八疊球菌厭氧菌：產(chǎn)芽胞桿菌真菌：白色念珠菌方法：在培養(yǎng)基中加入對照菌。意義：陽性對照必須長菌，證明微生物確實可在應用的實驗條件下生長。第八頁，共三十七頁，2022年，8月28日陰性對照：用未加藥物和對照菌的培養(yǎng)基意義：證明培養(yǎng)基本身無菌。

第九頁，共三十七頁，2022年，8月28日

測試時用無菌操作法吸取一定量的藥物加入各種培養(yǎng)基內在適宜的溫度下培養(yǎng)，并每天觀察作出記錄。如在規(guī)定時間內無任何微生物生長則可判定待檢藥品符合標準.需氧菌、厭氧菌：37℃５天真菌：25℃７天第十頁，共三十七頁，2022年，8月28日特殊注射劑的無菌檢查１、油劑性藥物的檢測油劑性藥物因難于和培養(yǎng)基充分混合，往往影響檢出結果。如果加入吐溫－80，與油劑性藥物混合乳化，再用培養(yǎng)基稀釋，可以使藥品均勻分布在培養(yǎng)基中。對照：吐溫－80。第十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日２、含抑菌或防腐成分藥物的檢測有些藥品本身含有抑菌成分，或于制作過程中加入防腐劑等，如按上法檢測往往不能證明它們是否真正無菌，必須先經(jīng)一定的處理。滅活法、稀釋法、微孔濾膜過濾法和離心沉淀集菌法第十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日薄膜濾菌器第十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日口服藥及外用藥物

的微生物學檢查

口服藥：細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、大腸桿菌、活螨的檢測。

外用藥：綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌和破傷風桿菌。一般眼科制劑：細菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌。均不能檢出致病菌。第十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日細菌總數(shù)測定

細菌總數(shù)，指每克或每毫升待檢藥品內含有的活菌總數(shù)。它能判明待檢藥品被細菌污染的程度，生產(chǎn)單位的原料、設備及工藝流程的衛(wèi)生狀況。第十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日方法：普通瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿計數(shù)法。

37℃，72小時將一定稀釋度的藥物和瓊脂培養(yǎng)基混合后，培養(yǎng)一定時間，計數(shù)平板內的菌落，根據(jù)數(shù)得菌落均值和相應稀釋度的乘積，得到每克或每毫升待檢藥品中所含細菌總數(shù)，判斷藥品是否符合標準。一般選取菌落數(shù)在30-300之間的平板計數(shù)。第十六頁，共三十七頁，2022年，8月28日霉菌總數(shù)測定

霉菌總數(shù)測定是了解待檢藥品每克或每毫升內含有的活霉菌總數(shù)，借以判明藥品的真菌污染程度。第十七頁，共三十七頁，2022年，8月28日瓊脂傾注平皿計數(shù)法虎紅培養(yǎng)基25℃，72小時選取菌落數(shù)在5-50個的平板，根據(jù)數(shù)得菌落均值和相應稀釋度的乘積，得到每克或每毫升待檢藥品中所含細菌總數(shù)，判斷藥品是否符合標準。第十八頁，共三十七頁，2022年，8月28日病原菌檢驗大腸桿菌沙門菌綠膿桿菌金黃色葡萄球菌破傷風桿菌第十九頁，共三十七頁，2022年，8月28日大腸桿菌

大腸桿菌是人、畜腸道主要寄生菌。它隨糞便排出體外，故常作為食品、飲水等被糞便直接或間接污染的指示菌。如藥品中檢出大腸桿菌，表明該藥品已被糞便污染，可能有腸道致病菌和寄生蟲卵等病原體存在，服用后有被感染的危險性。因而，不能用滅菌方法處理的口服藥物，大腸桿菌檢測是常規(guī)項目之一。第二十頁，共三十七頁，2022年，8月28日

檢測時先把一定量藥均經(jīng)增菌后轉種到選擇鑒別培養(yǎng)基——麥康凱平板或伊紅美蘭平板（EMB平板）。培養(yǎng)后挑取可疑菌落作革蘭染色及生化反應。生化反應包括IMViC試驗和乳糖發(fā)酵試驗。大腸桿菌IMViC試驗結果為+、+、—、—第二十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日

大腸桿菌的鑒定主要靠形態(tài)和生化反應兩方面的特征。但由于大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌在形態(tài)和生化反應方面有相似之處，而產(chǎn)氣桿菌一般多存在于水中，無衛(wèi)生學意義。因而檢測大腸桿菌要與產(chǎn)氣桿菌相鑒別。二者的鑒別一般采用IMViC試驗（I——吲哚試驗，M——甲基紅試驗，Vi——V．P．試驗，C——椽枸酸鹽利用試驗）來鑒定。第二十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日

如檢測結果為革蘭陰性桿菌，乳糖發(fā)酵陽性及IMViC試驗符合，則可判斷每克或每毫升藥品檢出大腸桿菌。第二十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日沙門菌

寄生于人和動物的腸道內，能引起傷寒、副傷寒、急性胃腸炎（食物中毒）和敗血癥。第二十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日1、革蘭陰性，桿菌2、分離培養(yǎng)：EMB平板上菌落無色或粉紅色。3、生化反應：4、血清學反應：凝集反應：抗原——可疑菌，抗體——沙門菌A-F組的多價血清（抗O抗體）第二十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日O抗原：細菌細胞壁脂多糖中的特異性多糖，100℃不被破壞。至少有58種，可將沙門菌分為多個組。引起人類疾病的為A-E組。H抗原：鞭毛抗原，不耐熱，60℃，30分鐘被破壞。第二十六頁，共三十七頁，2022年，8月28日綠膿桿菌綠膿桿菌為條件致病菌，對燒傷、眼科疾病等病人可因感染后病情加重，造成患者創(chuàng)傷處組織化膿，嚴重的可引起敗血癥、眼角膜潰瘍甚至失明。第二十七頁，共三十七頁，2022年，8月28日將被檢藥品經(jīng)增菌后轉種明膠十六烷三甲基溴化胺瓊脂平板上，經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)菌落特征、藍綠色色素、革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗和綠膿菌素試驗均陽性，可得出結論。

第二十八頁，共三十七頁，2022年，8月28日氧化酶試驗細菌的氧化酶能將二甲基對苯二胺脫氨而成帶有紅色的醌類化合物。綠膿菌素試驗綠膿菌素溶于氯仿內，加入鹽酸變成粉紅色第二十九頁，共三十七頁，2022年，8月28日

金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌是最常見的化膿性球菌之一，80%以上的化膿性疾病由本菌引起。它廣泛分布于自然界中，常可污染藥品及食品，也經(jīng)常存在于人的皮膚及某些腔道中。在制藥過程中可被混入藥品內，在條件合適時引起疾病。因而目前規(guī)定，凡外用藥和眼科制劑不得檢出金黃色葡萄球菌。第三十頁，共三十七頁，2022年，8月28日藥物在檢測時先經(jīng)亞碲酸鈉肉湯增菌，然后轉種選擇培養(yǎng)基（如甘露醇高鹽瓊脂、卵黃高鹽瓊脂等）經(jīng)培養(yǎng)后挑取可疑菌落作革蘭染色及生化反應。根據(jù)選擇培養(yǎng)基上典型菌落、革蘭陽性菌、發(fā)酵甘露醇及血漿凝固酶陽性?？傻贸鼋Y論，檢測到金葡菌。第三十一頁，共三十七頁，2022年，8月28日破傷風桿菌

破傷風桿菌廣泛存在于土壤及人和牲畜的糞便中。以根，莖、葉類植物為原料的中草藥制劑特別易受破傷風桿菌污染，在條件合適時感染傷口引起病變。因此用于深部組織、創(chuàng)面和潰瘍面的外用制劑不得檢出破傷風桿菌。第三十二頁，共三十七頁，2022年，8月28日檢測時首先把待檢藥品加入到0.1％葡萄糖庖肉培養(yǎng)基中進行增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基所表現(xiàn)出的破傷風桿菌生長特有的現(xiàn)象（產(chǎn)氣、有惡臭味、消化庖肉），再經(jīng)革蘭染色及動物毒力試驗和保護力試驗證實。如找到革蘭陽性破傷風桿菌的典型形態(tài)，毒力試驗和保護力試驗陽性，可確證存在破傷風桿菌。第三十三頁，共三十七頁，2022年，8月28日毒力試驗和保護力試驗取破傷風桿菌液體培養(yǎng)物于小鼠后肢肌肉注射，動物發(fā)病時，腿及尾巴強直，肢體痙攣，最后死亡。在對照組動物中，先注射破傷風抗毒素，再注射液體培養(yǎng)物，則該動物得到特異性保護。第三十四頁，共三十七頁，2022年，8月28日上述致病菌檢測時，皆需同時作相應細菌的陽性對照試驗，即與藥品檢測同步用陽性對照菌作對照試驗。目的是檢測待檢藥品本身有無干擾因素（如抑菌或防腐成分）；以及所用常規(guī)檢測方法的靈敏度。方法是將所要檢測菌的相應陽性對照菌株，稀釋成每毫升含活菌1000個的菌液，將其0.lml吸到待檢藥品的相應培養(yǎng)液中，在同等條件下進行檢測。如果陽性對照菌生長良好，說明檢測結果有效。第三十五頁，共三十七頁，2022年，8月28日活螨的檢驗

螨本身帶有各種