脂溶性維生素的測定

脂溶性維生素的測定第一頁，共十四頁，2022年，8月28日

脂溶性維生素的測定脂溶性維生素的理化性質(zhì)：溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、苯、乙醚等有機(jī)溶劑。耐酸堿性：VA、VD對酸不穩(wěn)定，對堿穩(wěn)定；

VE對酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定。耐熱性：VA、VD、VE耐熱性好，能經(jīng)受煮沸耐氧化性：VA易被氧化，光、熱促進(jìn)氧化

VE易被氧化，光、熱、堿促進(jìn)氧化

VD性質(zhì)穩(wěn)定，不易氧化第二頁，共十四頁，2022年，8月28日維生素A的測定

維生素A類是指含有β-白芷酮環(huán)的多烯基結(jié)構(gòu)、并具有視黃醇生物活性的一大類物質(zhì)。廣義而言包括已經(jīng)形成的維生素A和維生素A原。動物體內(nèi)具有視黃醇生物活性功能的維生素A類包括視黃醇、視黃醛、視黃酸等物質(zhì)，4-氧視黃酸、4-羥視黃酸等不具有視黃醇生物活性功能。維生素A分為維生素A1和維生素A2，A1主要存在于海產(chǎn)魚中，A2主要存在于淡水魚中。在植物中不含已形成的維生素A，在黃、綠、紅色植物中含有類胡蘿卜素，其中一部分可在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成維生紊A的類胡蘿卜素稱為維生素A原，如α-胡蘿卜素、β-l胡蘿卜素、γ-胡蘿卜素等。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的類胡蘿卜素約600種，僅有約1/10為維生素A原。第三頁，共十四頁，2022年，8月28日維生素A的功能：維持正常視覺維持上皮的正常生長與分化促進(jìn)生長發(fā)育抑癌作用維持機(jī)體正常免疫功能供給量與來源：1989年RDA中成人每人每天攝入維生素800ug視黃醇當(dāng)量。1992年全國營養(yǎng)調(diào)查表明，我國城鄉(xiāng)居民視黃醇當(dāng)量平均攝入量僅為476ug，其中約2／3來自植物性食物。維生素A最好的來源是各種動物肝臟、魚肝油、魚卵、全奶、奶油、禽蛋等；維生素A原的良好來源是深色蔬菜和水果，如冬寒菜、菠菜、首宿、空心萊、萵筍葉、芹菜葉、胡蘿卜、豌豆苗、紅心紅薯、椒及水果中的芒果、杏子及柿子等。第四頁，共十四頁，2022年，8月28日（一）三氯化銻比色法1原理

維生素A在三氯甲烷中與三氯化銻相互作用，生成藍(lán)色物質(zhì)，其顏色深淺與溶液中所含維生素A的含量成正比。該藍(lán)色物質(zhì)不穩(wěn)定，需在一定時間內(nèi)（6秒）用分光光度計于620nm波長處測定其吸光度。

2儀器實驗室常用設(shè)備分光光度計回流冷凝裝置3操作步驟

維生素A極易被光破壞，實驗操作應(yīng)在微弱光線下進(jìn)行，或用棕色玻璃儀器。第五頁，共十四頁，2022年，8月28日3.1樣品處理：根據(jù)樣品性質(zhì)，可采用皂化法或研磨法。皂化法：適用于維生素A含量不高的樣品，可減少脂溶性物質(zhì)的干擾，但全部試驗過程費時，且易導(dǎo)致維生素A損失。皂化：根據(jù)樣品中維生素A含量的不同，稱取0.5～5g樣品于三角瓶中，加入10mL1:1氫氧化鉀及20～40mL乙醇，于電熱板上回流30min至皂化完全為止。

提?。合礈欤簼饪s：第六頁，共十四頁，2022年，8月28日水層皂化瓶內(nèi)混合物分液漏斗1號水洗乙醚洗振搖，靜置，分層水層醚層分液漏斗2號振搖，靜置，分層醚層水層分液漏斗3號振搖，靜置，分層醚層分液漏斗1號提取第七頁，共十四頁，2022年，8月28日振搖，靜置，分層分液漏斗1號水洗醚層水層KOH溶液洗振搖，靜置，分層醚層KOH溶液層水洗振搖，靜置，分層醚層水層振搖，靜置，分層水洗醚層水層凈化第八頁，共十四頁，2022年，8月28日分液漏斗醚層乙醚洗滌水浴蒸餾減壓抽干氯仿定容（5mL)無水硫酸鈉濃縮第九頁，共十四頁，2022年，8月28日

研磨法：適用于每克樣品維生素A含量大于5～10μg樣品的測定，如肝的分析。（步驟簡單，省時，結(jié)果準(zhǔn)確。）研磨：精確稱2～5g樣品，放入盛有3～5倍樣品重量的無水硫酸鈉研缽中，研磨至樣品中水分完全被吸收，并均質(zhì)化。提?。盒⌒牡貙⑷烤|(zhì)化樣品移入帶蓋的三角瓶內(nèi)，準(zhǔn)確加入50～100mL乙醚。緊壓蓋子，用力振搖2min，使樣品中維生素A溶于乙醚中。使其自行澄清(大約需1～2h)，或離心澄清(因乙醚易揮發(fā)，氣溫高時應(yīng)在冷水浴中操作。裝乙醚的試劑瓶也應(yīng)事先放入冷水浴中)濃縮：取澄清提取乙醚液2～5mL，放入比色管中，在70～80℃水浴上抽氣蒸干。立即加入1mL三氯甲烷溶解殘渣。第十頁，共十四頁，2022年，8月28日3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備準(zhǔn)確取一定量的維生素A標(biāo)準(zhǔn)液于4～5個容量瓶中，以三氯甲烷配制標(biāo)準(zhǔn)系列。取相同數(shù)量比色管順次取1mL三氯甲烷和標(biāo)準(zhǔn)系列使用液1mL，各管加入乙酸酐1滴，制成標(biāo)準(zhǔn)比色系列。于620nm波長處，以三氯甲烷調(diào)節(jié)吸光度至零點，將其標(biāo)準(zhǔn)比色系列按順序移入光路前，迅速加入9mL三氯化銻－三氯甲烷溶液。于6s內(nèi)測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，以維生素A含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。第十一頁，共十四頁，2022年，8月28日3.3樣品測定

于一比色管中加入10mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐為空白液。另一比色管中加入1mL三氯甲烷，其余比色管中分別加入1mL樣品溶液及1滴乙酸酐。其余步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。4結(jié)果計算

第十二頁，共十四頁，2022年，8月28日（二）高效液相色譜法1.原理

樣品中的維生素A及維生素E經(jīng)皂化提取處理后，將其從不可皂化部分提取至有機(jī)溶劑中。用高效液相色譜法C18反相柱將維生素A和維生素E分離，經(jīng)紫外檢測器檢測，并用內(nèi)標(biāo)法定量測定。

第十三頁，共十四頁，2022年，