動物實驗基本方法

動物實驗基本方法第一頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗動物基本概念實驗動物定義：經(jīng)人工培育和人工改造,對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制、遺傳背景明確或者來源清楚，而用于科學研究、教學、生物制品或藥品生產(chǎn)、鑒定以及其它科學實驗的動物第二頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗動物分類按遺傳學分類：近交系、封閉群、雜交群。按微生物學分類：普通級動物、清潔級動物、無特定病原體動物、無菌動物第三頁，共八十四頁，2022年，8月28日普通級動物：不攜帶主要人畜共患病病原和動物烈性傳染病的病原。清潔級動物：除普通動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原。第四頁，共八十四頁，2022年，8月28日無特定病原體動物：除清潔級動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原。無菌動物：無可檢出的一切生命體。第五頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗動物的護理和使用原則

1、實驗動物的飼養(yǎng)和使用應(yīng)遵守國家有關(guān)的法律和規(guī)定。2、應(yīng)明確使用實驗動物的理由和目的。3、明確實驗所使用動物的種類和數(shù)量，動物的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計學的要求。4、完善操作規(guī)程，避免或減輕因?qū)嶒瀸游镌斐傻牟贿m和痛苦。包括使用適當?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法；禁止不必要的重復(fù)。第六頁，共八十四頁，2022年，8月28日5、嚴格按程序?qū)嵤嶒灪髣游锏奶幚?，包括麻醉、止痛、實驗后的護理或用麻醉方法處死。6、實驗過程中要求保證實驗動物的良好生活條件，包括飼養(yǎng)環(huán)境、符合需求的飼料及細心的護理等。7、研究人員和實驗動物操作人員應(yīng)接受實驗動物的基本知識和操作技能等方面的培訓(xùn)。8、使用過程中要求保證周圍環(huán)境和實驗人員的安全。第七頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗過程的行為規(guī)范

1、物理限制2、手術(shù)操作3、飲食的限制4、廢棄物和尸體處理第八頁，共八十四頁，2022年，8月28日物理限制：是指在實驗過程中（包括檢查、收集標本、給藥、治療或?qū)嶒灢僮鞯龋?，用手或工具限制動物活動的過程。根據(jù)實驗內(nèi)容不同，限制時間有差異，但要求盡量縮短限制時間。有些動物，如狗和靈長類動物可以通過簡單的訓(xùn)練達到目的.第九頁，共八十四頁，2022年，8月28日物理限制的主要原則和要求包括：限制的工具不能作為常規(guī)的飼養(yǎng)工具。工具的設(shè)計應(yīng)合理，不要僅考慮實驗的便利，主要考慮盡量減少動物的不適，避免傷害。盡量減少限制的時間，以達到實驗?zāi)康臑榛鶞?。在限制過程中，如果發(fā)生損傷或嚴重的行為改變，應(yīng)暫?；蚪瓜拗?，并給予處理或治療。保證實驗人員和周圍人員的安全。第十頁，共八十四頁，2022年，8月28日手術(shù)操作有些實驗需要對動物進行手術(shù)，即打開或刺穿動物的身體，對動物的物理或生理機能產(chǎn)生較大的損害，同時，實驗人員也容易被血液/體液污染或被器械、針頭刺傷，存在潛在生物污染的威脅，因此必須做到：操作一定要使用適當?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法。禁止不必要的重復(fù)操作。不提倡利用一個動物進行多個手術(shù)實驗，但是，為充分利用動物資源，經(jīng)動物倫理委員會許可，在可能的條件下可以實施。嚴格實驗操作規(guī)程，防止發(fā)生血液/體液外濺和針刺傷，避免生物污染。手術(shù)后的動物、標本以及所用器具材料等必須按規(guī)定程序妥善處置。第十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日飲食的限制實驗用動物原則上要求隨時飲食，如果一些實驗需要動物限制食物或水的攝入量，應(yīng)保證動物存活所需要的最低需求量。根據(jù)研究的目的，食物的限量應(yīng)經(jīng)過科學的論證，其限量的標準應(yīng)容易操作，如正常攝入量的百分比或動物體重的百分比。對于水分的限量攝入，一定要防止動物發(fā)生脫水現(xiàn)象，并要保持動物的膳食平衡。第十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日廢棄物和尸體處理1．動物尸體的處理安樂處死后的動物尸體，取材完畢后，經(jīng)121℃30min高壓滅菌處理后，集中送環(huán)保部門處理。動物生物安全三級（animalbiosafetylevel3,ABSL-3）實驗室及以上級的實驗室的感染動物尸體需經(jīng)室內(nèi)和雙扉兩道高壓滅菌，才能移出實驗室。2.動物咽拭子的處理用于病原分離和PCR檢測的咽拭子，按照各自的要求處理后，進行病毒分離和PCR檢測，剩余的標本經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。3.病原分離培養(yǎng)物的處理病原分離的培養(yǎng)物，不論是陽性還是陰性結(jié)果，均需經(jīng)121℃，30min高壓消毒處理。

第十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日選擇實驗動物基本原則盡量選擇研究對象的功能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病與人類相似的動物；解剖、生理特點符合實驗?zāi)康囊螅粚嶒瀯游锊煌贩N品系的特點；選擇標準化實驗動物；符合實驗動物選擇的一般原則；經(jīng)濟性原則；要考慮到動物實驗結(jié)果的外推；注意有關(guān)國際規(guī)范。第十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日動物實驗基本技術(shù)實驗動物的抓取、保定與給藥1實驗動物的編號和分組2實驗動物的麻醉34實驗動物的采血第十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日大鼠豚鼠家兔犬一、抓取、保定與給藥小鼠第十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日小鼠的捉持1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起，放在飼養(yǎng)合的面罩上。用左手拇指和食指迅速、準確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。翻轉(zhuǎn)左手掌，以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚，使小鼠整個呈一條直線。用左手拇指和食指迅速、準確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。第十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日大鼠的捉持首先戴好防護手套用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。

左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定。第十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日豚鼠的捉持先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。順勢抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)箍其頸部。用右手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取固定。第十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日兔的捉持用右手抓住兔頸部的被毛和皮膚，輕輕把兔提起。用左手托住兔的臀部家兔的固定方式有腹臥式和仰臥式兩種

第二十頁，共八十四頁，2022年，8月28日犬的捉持實驗者先撫摩，逐步接近，勿使其驚恐或?qū)⑵浼づ?/p>

用粗棉繩兜住狗的下頜，并在上頜打結(jié)（勿太緊）。

如犬不合作，則先用一根特制長柄狗頭夾，從后面夾住犬頸，限制犬頭部活動，再按上述方法捆住犬嘴。

實驗動物的捉拿.MPG第二十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日灌胃給藥——大小鼠1、將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液。左手捉持動物，使頭部向上。右手持針，把灌胃針頭的前端放進動物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推。用右手食指將針栓慢慢往下壓，將注射器中的藥液灌入動物的胃中。劑量：小鼠約／10g體重。最大體積為1.0ml/只大鼠約1-2ml／100g體重，最大體積為5.0ml/只第二十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日灌胃給藥——兔將兔放進固定架內(nèi)，灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰，將下頜擠開使兔被動張口。

右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。胃管經(jīng)開口器的孔插入，向前推進約15cm，可達胃內(nèi)。在插管時應(yīng)將胃管另一端泡在水中確認沒有冒氣泡，即可用注射器經(jīng)胃管注入藥液。豚鼠灌胃同家兔第二十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日皮下注射給藥——大小鼠頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下注射針頭取一銳角角度刺入皮下。將針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下。再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下第二十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日靜脈注射給藥——大小鼠將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器中，通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴用左手捏住鼠尾巴中下部，用75％酒精棉球反復(fù)擦拭尾部注射時，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用食指從下面托起尾，右手持4號針頭的注射器，使針頭與靜脈平行（小于30度角）大鼠亦可用舌下靜脈注射第二十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日靜脈注射給藥——犬前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。先將注射部位毛剪去。在靜脈血管的近心端，用乳膠管扎緊肢體，使血管充盈，注射器針頭向靜脈血管的近心端方向穿刺。回抽注射器針栓，如有回血，則證明針尖在血管內(nèi)，即可推注藥液。

第二十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日靜脈注射給藥——兔兔放在固定架內(nèi)，酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳緣靜脈充盈。

用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指和小指放在耳郭下作墊。右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針頭從遠心端插入血管回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血豚鼠可用足背靜脈注射實驗動物的給藥.MPG第二十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日不同種類實驗動物一次給藥能耐受的最大容量（ml）動物名稱灌胃皮內(nèi)注射皮下注射肌肉注射腹腔注射靜脈注射小鼠1.00.11.50.210.8大鼠5.00.15.00.524.0兔1000.2102.0510貓1500.2102.0510猴3000.3503.01020犬2500.31004.0--100第二十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日人與動物用藥量換算一般可按下列比例換算：人用藥量為1，小鼠、大鼠為25-50倍，兔、豚鼠為15-20倍，犬貓為5-10倍。此外，可以采用人與動物的體表面積計算法來換算。第二十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日二、實驗動物的采血5231尾尖采血眼眶靜脈叢采血斷頭采血腹主動脈采血4心臟采血腹主動脈采血6靜脈采血第三十頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：固定動物并露出鼠尾，將尾部在45℃的溫水中浸泡數(shù)分鐘（或以二甲苯棉球涂擦），使尾部血管擴張。將鼠尾擦干，用銳器切去尾尖0.3～0.5cm，讓血液滴入盛器或直接以血紅蛋白吸管吸取。對象：大、小鼠特點：小量采血，可以多次采血。

1尾尖采血第三十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：用左手捉鼠，拇指及中指抓住頭頸部皮膚，食指按于眼后，使眼球輕度突出，眼底球后靜脈叢淤血。右手持取內(nèi)徑為的玻璃毛細管（臨用前折斷成1-1.5cm長的毛細管段，浸入1％肝素溶液中，干燥后用）刺入深度小鼠2～3mm，大鼠4～5mm。當感到有阻力時再稍后退，得到所需要的血量后，拔出。

對象：大、小鼠等。特點：中等血量（0.2～0.3ml，小鼠；0.5～1.0ml，大白鼠），避免動物死亡。2眼眶靜脈叢采血第三十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：左手以拇指和食指保持動物的頭頸部，使其頭略下傾，右手持剪刀猛力剪斷鼠頸，讓血液滴入盛器。

對象：大、小鼠等。特點：需要血量較大（小白鼠可采血0.8～1.0ml，大白鼠可采血5.0～8.0ml），且不需要繼續(xù)保存動物生命時用本法。3斷頭采血

第三十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：動物要麻醉后進行，用針管在腹主動脈分叉處，與血管平行刺入。對象：大、小鼠等。特點：需要血量較大，且不需要繼續(xù)保存動物生命時用本法。4腹主動脈采血第三十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：將動物背位固定，在左胸第2至第4肋間剪毛一塊，用碘酒和酒精消毒。然后用配有7號針頭的10ml注射器，在心跳最明顯處作穿刺。針頭刺入心臟后即見血液流入注射器；或邊刺邊抽，直至血液流入注射器。取得所需血量后，迅速將針頭拔出，這樣心肌上的穿刺孔較易閉合。

對象：兔、豚鼠等。特點：采血量較大，繼續(xù)保存動物生命。5心臟采血第三十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法：將家兔放在固定箱內(nèi)，剪去擬采血耳殼上的毛，用電燈照射加熱或用二甲苯棉球涂擦耳殼，使耳部血管擴張。用粗針頭刺破耳緣靜脈或以刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出，滴入已放有抗凝劑的盛器中。采血完畢，用干棉球壓住出血口，以待止血。如一時不易止血，可用木夾夾住耳殼10～20分鐘。

對象：犬——在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血；小型豬——為耳大靜脈、后肢靜脈特點：采血量較大，繼續(xù)保存動物生命。6靜脈采血第三十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日三、實驗動物被毛去除方法

拔毛法：用拇指和食指拔去被毛的方法

剪毛法：用剪刀緊貼皮膚剪去被毛剃毛法：用剃毛刀剃去動物被毛。脫毛法：用化學藥品脫去動物被毛。第三十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日四、實驗動物編號與分組

（一）編號：

1、單色涂染法：在每組動物不超過l0只或一個實驗不超過40只的情況下適用。實驗動物：大鼠、小鼠。

常用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色。第三十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日

方法步驟：

(1)涂染原則：從左到右、從上到下。

(2)左前肢為l號、左側(cè)腹部2號、左后肢3號。

(3)兩耳后部4號、背中部5號、后肢背部6號。

(4)右前肢7號、右側(cè)腹部8號、右后肢9號。

(5)尾巴根為10號。（6）額部為20號第三十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日

2、雙色涂染法：

在每組動物不超過100只的情況下用。實驗動物：大鼠、小鼠。

常用染色劑：

(1)3-5％苦味酸溶液，可染成黃色。

——作為“個”位數(shù)。

(2)0.5%中性紅或品紅溶液，可染成紅色?！鳛椤笆蔽粩?shù)。

第四十頁，共八十四頁，2022年，8月28日方法步驟：

(1)用兩種顏色同時進行染色標記。

(2)用苦味酸(黃色)染色標記作為個位數(shù)。(3)用品紅(紅色)染色標記作為十位數(shù)，（4）左前肢為10號、左側(cè)腹部20號、左后肢30號，兩耳后部40號、背部50號、后肢背部60號，右前肢70號、右側(cè)腹部80號、右后肢90號第100號不作染色標記。

第四十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日3、穿耳孔法

用專用耳空器在動物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號碼的方法，原則是：左耳代表十位，右耳代表個位。實驗動物：兔、犬、豬4、標牌法一般掛在動物的頸部、耳朵、腳上或?qū)嶒瀯游铮喝?、?、烙印法直接把標記編號烙印在實驗動物身體上的方法，尤如蓋印章一樣。第四十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日左耳右耳1012

52050耳緣編號第四十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日一般來說，大、小鼠多采用染色法，豚鼠、家兔宜使用耳孔法，犬、猴、貓較適合掛牌法，犬還可用烙印法。第四十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日四、實驗動物編號與分組

（二）分組：1、組別的要求：正常對照組模型組陽性藥組藥物不同劑量組第四十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日（1）正常對照組

①要求不加任何處理，指在正常條件下進行觀察和對照，給藥組如是灌胃給藥，對照組應(yīng)用灌胃溶劑。

②目的對比觀察模型是否成功；觀察被試藥能否使病理改變恢復(fù)正常。（2）陽性藥對照組

①要求所選藥必須是藥典所有的或國家批準的藥，如用西藥，則采用公認的，療效可靠的。

②目的說明所用方法的可靠性；對比新藥的優(yōu)劣和特點。（3）模型對照組

①要求除不用藥外，其他處理同給藥組，模型要符合中醫(yī)證或病的模型。

②目的對比觀察受試藥的藥理作用。第四十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日（4）藥物組

■一般應(yīng)設(shè)三個劑量組，大動物，操作特殊困難者可設(shè)兩個劑量組；■能夠測出LD50的受試藥物，動物試驗給藥劑量一般為1/10～1/5LD50；■很多中藥制劑毒性甚小，無法測出LD50者，一般常用人用劑量（g或mg生藥/kg體重）來折算動物用量；■正式實驗時常以等效劑量作為中劑量或小劑量，大、中、小劑量差以2～3的等比級數(shù)為宜；

第四十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日完全隨機分組完全隨機分組時將試驗對象完全按隨機原則分組。它的設(shè)計、分組、和統(tǒng)計處理都比較簡單，但試驗效率較低。例：將30只SD大鼠隨機分配到甲、乙、丙3組。使用excel對試驗對象完全隨機分組的操作步驟如下:

（二）分組的方法第四十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號、隨機號、分組號，隨后在A2、A3中分別鍵入1、2，然后拖動鼠標利用excel的自動填充功能完成1～30的編號。2.在B2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個隨機數(shù)字，然后同樣利用其自動填充功能在B2～B31生成一列隨機數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機數(shù)是會隨著單元格的操作而變化的。故需選中“B2”至“B31”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進行選擇性粘貼。

第四十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日

3.選中A列、B列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對話框中,選擇以‘’隨機數(shù)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,按“確定”按扭,則按B列隨機數(shù)字的大小完成A列、B列的排序。4.分別在C2～C11、C12～C21和C22～C31單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標同時選中A、B、C列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”命令,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。（見表1）第五十頁，共八十四頁，2022年，8月28日隨機區(qū)組分組

隨機區(qū)組分組是按照一定條件，將幾個條件相同的試驗對象分為一個區(qū)組，然后在每個區(qū)組內(nèi)部按隨機化原則，將每個對象分配到各組。例：將SD大鼠32只，體重180g～220g,按體重大小配成8個單位組,每個單位組中的4只大鼠隨機分配接受A、B、C、D4種處理,試給出隨機化分組的結(jié)果

1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號、區(qū)組號、隨機號，隨后在A2A3中分別鍵入1、2，然后拖動鼠標利用excel的自動填充功能完成1～32的編號。

2.在C2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個隨機數(shù)字，然后同樣利用其自動填充功能在C2～C33生成一列隨機數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機數(shù)是會隨著單元格的操作而變化的。故需選中“C2”至“C33”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進行選擇性粘貼。

第五十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日3.選中A、B、C列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“區(qū)組”為“主要關(guān)鍵字”排序“,隨機數(shù)”為“次要關(guān)鍵字”排序,然后,單擊“確定”按鈕,即完成以區(qū)組單位的隨機數(shù)字排序4.分別在C2～C11、C12～C21和C22～C31單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標同時選中A、B、C列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”命令,在彈出的“排序”對話框中,選擇以“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。5.在“D1”中鍵入“分組號”,在“D2”、“D3”、“D4”和“D5”中分別依次鍵入“1”、“2”、“3”和“4”,對余下的各個區(qū)組,同樣依次輸入“1”、“2”、“3”和“4”,作為同一區(qū)組內(nèi)4對象的分組號。第五十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日

6.單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對話框中,選擇“編號”為排序的“主要關(guān)鍵字”,單擊“確定”按鈕,這樣就可以得到各個實驗對象的分組編號。（見表2）第五十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日②分層分組法：將動物先按雌雄分層，然后分別稱體重，將體重相同的放在一起，不同體重的動物放在不同的動物盒中，按實驗設(shè)計要求分別放在各組動物盒中，使每只動物都有相同的機會分配到各組，如此分組的結(jié)果，各實驗組動物平均體重基本一致。

第五十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日③抽簽法：如有小鼠40只，要隨機分為四組，可將小鼠從1-40編號，將準備的號簽也編1-40號，然后將號簽充分混合后，隨機各抽10個號，然后對號將小鼠分配到各個組去；第五十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日④摸球法：如實驗所需設(shè)四組，即可用40只雌雄各半的小鼠，將小鼠按體重大小排列，雄性鼠編為1-20號，雌性鼠編為21-40號，然后用紅、黃、藍、綠四種彩球表示甲、乙、丙、丁四組，將數(shù)量相等四種顏色的球放入一個口袋里，充分混合后，每次摸取都要徹底混合，每次摸出一個，然后放回袋中，若第一次摸出是紅球，就將第一鼠放入甲組，第二次摸出的綠球，就將第二號放入丁組，第三次摸出的又是紅球，因已出現(xiàn)過紅球，可不計再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的籃球，將第三號鼠放入丙組，第四號鼠不必再摸球決定，剩下的乙組就是第四號鼠，如此類推，將鼠分配完畢。第五十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日五、實驗動物的麻醉

動物麻醉是消除動物手術(shù)疼痛，便于實驗操作，保證動物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。動物全身麻醉分四期：1.第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運動與運動失調(diào)；2.第二期：不隨意興奮期，由意識完全喪失至規(guī)則的自動呼吸開始時止。3.第三期：外科麻醉期，4.第四期：延髓麻醉期，進入此期，麻醉已嚴重過量。第五十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日麻醉方法與麻醉藥麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動物麻醉。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）第五十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日常用麻醉藥的劑量及注射途徑種類戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV豬<45kg>45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM第五十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日麻醉注意事項

麻醉前應(yīng)準確稱體重；注意麻醉劑量，麻醉劑量與動物品種、健康狀況有關(guān)；麻醉過程中注意觀察動物的反應(yīng)情況；注意保溫，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動物體溫水平；靜脈注射時，速度要均勻，不宜太快。注射速度過快是引起動物死亡的重要因素之一；如麻醉深度不夠，必須經(jīng)過一定時間后，才能補充麻醉劑，如戊巴比妥鈉至少須在第1次注射5分鐘以后，苯巴比妥鈉至少須經(jīng)過30分鐘以上。一般情況下，補加劑量1次不得超過原注射量的1.4～1.5；第六十頁，共八十四頁，2022年，8月28日麻醉注意事項動物在麻醉狀態(tài)體溫容易下降，手術(shù)中和手術(shù)后要采取保暖措施；及時處理麻醉過量的動物，使用10%的咖啡因，按0.1ml/kg靜脈注射或用10%的可拉明按0.2~0.5ml/kg靜脈或肌肉注射。第六十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日六、實驗動物的采尿方法代謝籠法導(dǎo)尿法壓迫膀胱法第六十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日七、實驗動物處死方法

頸椎脫臼處死法

斷頭處死法

擊打頭蓋骨處死法

放血處死法空氣栓塞處死法過量麻醉處死法第六十三頁，共八十四頁，2022年，8月28日八、試驗記錄的標準化與規(guī)范化實驗紀錄的定義指在檢測、研究過程中，應(yīng)用實驗、觀察、調(diào)查或資料分析等方法，根據(jù)實際情況直接記錄或統(tǒng)計形成的各種數(shù)據(jù)、文字、圖表、聲像等原始資料。第六十四頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄規(guī)范化的目的保證實驗記錄真實、規(guī)范、完整，提高檢測或研究的質(zhì)量。

實驗記錄的基本要求真實、及時、準確、完整、防止漏記和隨意涂改。不得偽造、編造數(shù)據(jù)。第六十五頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄的用紙

本研究機構(gòu)統(tǒng)一帶頁碼標號幅面一致保持完整第六十六頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄應(yīng)包括的內(nèi)容實驗名稱實驗?zāi)康膶嶒炘O(shè)計起止時間實驗人員實驗環(huán)境實驗材料實驗步驟觀察指標實驗結(jié)果結(jié)果分析操作者、復(fù)核者簽名負責人檢查、簽署意見第六十七頁，共八十四頁，2022年，8月28日基本要求

原始性真實性完整性可溯源性第六十八頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄的書寫豎用橫寫，不用鉛筆；用字規(guī)范、字跡工整；縮寫正確，譯注原文；術(shù)語單位，符合標準。

第六十九頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄的保存避免水浸、墨污、卷邊保持整潔完好無破損、不丟失第七十頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄的歸檔實驗負責人和記錄人在記錄后簽名課題負責人或上一級研究人員定期檢查實驗記錄，并簽署檢查意見研究工作結(jié)束后整理歸檔第七十一頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗記錄中易出現(xiàn)的問題實驗名稱：

1．子實驗缺課題名稱或缺實驗名稱。

2．未指明代號的解釋權(quán)由誰負責。第七十二頁，共八十四頁，2022年，8月28日實驗設(shè)計或方案3．缺或不完整。4．無設(shè)計者和（或）審批者