免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測

免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測第一頁，共三十一頁，2022年，8月28日免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測概述1、乙肝表面抗原和乙肝表面抗體2、麻疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測3、風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測4、白喉和破傷風(fēng)凝集抗體檢測5、百日咳凝集抗體和IgG抗體檢測6、其它還包括乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎三型抗體檢測等第二頁，共三十一頁，2022年，8月28日從檢測類別上分類1、免疫成功率檢測（初免兒童抗體水平檢測）2、人群抗體水平檢測（涉及到多個年齡組）3、疾病和疫情的實驗室（血清學(xué)）診斷包括麻疹、風(fēng)疹等發(fā)熱岀疹性疾病診斷、白喉和破傷風(fēng)以及百日咳的實驗室診斷等。第三頁，共三十一頁，2022年，8月28日初免和健康人群——檢測樣品的獲得1、一般情況下都應(yīng)通過抽樣獲得被調(diào)查對象，然后，對調(diào)查對象采集靜脈血。2、常見的抽樣方法：單純隨機(jī)出樣——抽簽法和隨機(jī)數(shù)字表法系統(tǒng)抽樣整群抽樣分層抽樣多階段抽樣第四頁，共三十一頁，2022年，8月28日常用的抽樣方法多階段抽樣組群抽樣批質(zhì)量保證抽樣接種率調(diào)查抽樣方法——按容量比例概率抽樣(PPS)與批質(zhì)量檢驗抽樣（LQAS）相結(jié)合的方法特點：分層多階段抽樣；先抽鄉(xiāng)級單位，再抽村級單位，最后再抽調(diào)查對象，采集血標(biāo)本。第五頁，共三十一頁，2022年，8月28日回避1、隨意確定一個鄉(xiāng)或村；2、在鄉(xiāng)級接種門診等候隨便采血；3、在村級由村醫(yī)帶領(lǐng)（隨意）到幾個家庭采血；；4、到學(xué)校任意找一個班級或幾個班級隨意采集血；5、以上這樣做，既浪費資源，結(jié)果也無代表性。第六頁，共三十一頁，2022年，8月28日制定采血調(diào)查表按照調(diào)查目的制定采血登記表，一般采用過錄表。有時使用個案表，如病例調(diào)查。調(diào)查時，一定要注意被調(diào)查者信息的收集和保持完整。有時為了達(dá)到某一目的，按照過去調(diào)查時掌握的情況，人為確定某些“好的”和“不好的”鄉(xiāng)或村進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查。第七頁，共三十一頁，2022年，8月28日血標(biāo)本的采集現(xiàn)一般多采用靜脈采血，采血量一般3-5ml，能滿足的血清量，一個人份可以同時能滿足檢測多項指標(biāo)的要求。同時，對于有重大意義的血清標(biāo)本，還同時能夠滿足備份的要求。尤其是對于2-5歲以下幼兒的采血，每個縣級單位一定要有2-3名技術(shù)數(shù)量的人員，才能夠保證血標(biāo)本的采集。采血時一定要制定編號規(guī)則，統(tǒng)一編號，血標(biāo)本采集后及時標(biāo)號。第八頁，共三十一頁，2022年，8月28日血清標(biāo)本的收集和保存血標(biāo)本采集后一定要及時分離血清，切不可長時間在常溫下放置，否則可能會導(dǎo)致污染，廢棄。血標(biāo)本采集后最好是放在室溫凝集，及時離心后，分離出血清，血清標(biāo)本-20℃保存。血標(biāo)本采集后4℃保存可能要在一定程度上會降低抗體滴度。如果需要過夜最好是放在4℃保存。第九頁，共三十一頁，2022年，8月28日血清標(biāo)本的收集和保存1、血清標(biāo)本盡量避免反復(fù)凍融，反復(fù)多次凍融也會降低抗體滴度；2、必要時將分成幾份分別保存，可避免反復(fù)凍存。3、血清標(biāo)本分離后，及時將血標(biāo)本上的號碼轉(zhuǎn)移至血清標(biāo)本上，避免號碼混淆，并及時與采血單核對。第十頁，共三十一頁，2022年，8月28日采血和血清收集用品1、采血現(xiàn)多用一次性采血針（針連著管）和采血管（無菌）；2、收集血清多用1.5ml尖底、旋蓋、管體和旋蓋帶鏈接的離心管盛放血清。3、當(dāng)血清較多時，也可使用2-3ml凍存管。第十一頁，共三十一頁，2022年，8月28日血清學(xué)檢測環(huán)境條件及設(shè)備1、生物安全二級實驗室。2、儀器設(shè)備：培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜、酶標(biāo)儀（405nm、450nm、490nm、650nm)、洗板機(jī)、加樣器（移液器）。3、加樣器：單道和多道（8道和12道）單道：1-10μl、1-20μl、5-50μl、5-200μl多道：5-50μl、5-200μl等。第十二頁，共三十一頁，2022年，8月28日血清學(xué)檢測的其它用品1、振蕩器、離心機(jī)、水浴箱、天平、高壓鍋2、吸管、燒杯、量筒等3、常用化學(xué)試劑第十三頁，共三十一頁，2022年，8月28日免疫監(jiān)測及其評價詳見Word文檔。第十四頁，共三十一頁，2022年，8月28日ELISA實驗的質(zhì)量控制詳見pdf文件。第十五頁，共三十一頁，2022年，8月28日乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測1、國內(nèi)多家試劑公司生產(chǎn)，靈敏度和特異度、重復(fù)性等指標(biāo)各不相同。2、國內(nèi)多數(shù)公司生產(chǎn)的試劑大多是過關(guān)的，我們現(xiàn)多使用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的。3、考察一家公司生產(chǎn)的試劑可以從靈敏度和特異度、重復(fù)性三個指標(biāo)來考察。4、制備自己的質(zhì)控血清，以檢查不同廠家、不同批次的試劑的穩(wěn)定性和可用性。第十六頁，共三十一頁，2022年，8月28日乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測1、結(jié)果影響因素試劑穩(wěn)定性；取樣和血清本身如融血、脂類成分、藥物成分等；操作者人為誤差和誤操作；儀器設(shè)備穩(wěn)定性；不遵守操作規(guī)程，等實驗中影響結(jié)果最多見的就是血脂。第十七頁，共三十一頁，2022年，8月28日乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測2、HBsAg陽性結(jié)果的對待對于HBsAg陽性結(jié)果一定要謹(jǐn)慎；檢查血清（肉眼觀察的）狀態(tài)；查看其HBsAb結(jié)果；雙份（孔）重復(fù)檢測；必要時更換試劑重復(fù)檢測；相隔一定時間再次采血雙孔雙項目重復(fù)檢測。第十八頁，共三十一頁，2022年，8月28日麻疹I(lǐng)gG抗體檢測麻疹I(lǐng)gG抗體檢測原始試劑：指中國CDC國家麻疹實驗室生產(chǎn)的自己包被酶標(biāo)板的半定量的試劑；試劑主要成分：麻疹病毒抗原、細(xì)胞對照抗原、酶標(biāo)記抗抗體、底物（鄰苯二胺，OPD）；其他：無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、檸檬酸、雙氧水、吐溫-20、硫酸等。檢測方法：詳見Word文檔第十九頁，共三十一頁，2022年，8月28日麻疹I(lǐng)gG抗體檢測麻疹I(lǐng)gG抗體檢測試劑盒：國內(nèi)過關(guān)的試劑盒不多，且多為定性試劑，結(jié)果只能提供抗體陽性率，不能計算免疫水平，結(jié)果提供的信息較少；目前，過關(guān)的國外試劑，而且國內(nèi)常使用的是德國維潤賽潤公司生產(chǎn)的試劑盒，實驗只需要一孔既可以定性和定量檢測麻疹抗體水平，結(jié)果以mIU/ml表示；第二十頁，共三十一頁，2022年，8月28日維潤賽潤麻疹I(lǐng)gG結(jié)果1、抗體≤150mIU/ml沒有保護(hù)水平；抗體≥200mIU/ml達(dá)到保護(hù)水平；抗體在150~200之間為可疑結(jié)果。2、既可以計算陽性率，亦可以計算GMT-抗體幾何平均低度（平均水平）。3、試劑重復(fù)性與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑相當(dāng)；4、結(jié)果水平與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑亦相當(dāng)；5、但GMT的計算較麻煩，但借助于計算機(jī)還是比較容易的。6、試劑價格較高，96T一般要1800元。第二十一頁，共三十一頁，2022年，8月28日麻疹I(lǐng)gM抗體檢測1、原始試劑—來自nmlab，試劑需要自己包被，整個實驗需要2-3天，實驗者要求經(jīng)過正規(guī)培訓(xùn)，結(jié)果不好控制，難度較大，現(xiàn)已不再使用，但熟悉整個實驗操作對于使用試劑盒來說是有很大幫助的。2、現(xiàn)多使用試劑盒檢測，國產(chǎn)和進(jìn)口的都有，但價格懸殊。3、現(xiàn)國內(nèi)麻疹實驗室網(wǎng)絡(luò)（國家、省、市級）多使用的有：廣東珠海海泰、北京貝爾試劑；進(jìn)口德國維潤賽潤試劑等第二十二頁，共三十一頁，2022年，8月28日麻疹I(lǐng)gM抗體檢測4、從檢測原理上來劃分：捕獲法和間接法兩種。捕獲法應(yīng)該是優(yōu)于間接法，只是間接法在實驗時加入了非特異性因子吸附劑，以去除血清中的類風(fēng)濕因子——非特異性因子。國內(nèi)試劑都是捕獲法，維潤賽潤是間接法。5、來自nmlab的原始試劑檢測方法詳見Word講稿。6、來自珠海海泰的試劑檢測方法詳見Word講稿。第二十三頁，共三十一頁，2022年，8月28日風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測試劑：1、原來是原始狀態(tài)的試劑；現(xiàn)多采用試劑盒進(jìn)行檢測；2、目前國產(chǎn)試劑盒據(jù)我所知只有深圳科潤達(dá)公司生產(chǎn)的試劑盒可以使用；進(jìn)口的試劑就是德國維潤賽潤的試劑。目前這兩家公司的試劑在全國麻疹風(fēng)疹實驗室網(wǎng)絡(luò)中廣泛使用。3、風(fēng)疹I(lǐng)gG試劑我沒有使用過，大家感興趣可以自己去篩選。如德國維潤賽潤的試劑。第二十四頁，共三十一頁，2022年，8月28日風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測4、風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測與麻疹I(lǐng)gM抗體檢測一樣，也有間接法和捕獲法?，F(xiàn)將深圳科潤達(dá)公司生產(chǎn)的試劑檢測方法簡述如下。5、風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測主要用于麻疹疑似病例麻疹I(lǐng)gM抗體陰性血清的檢測，以及高度懷疑為風(fēng)疹暴發(fā)流行疫情的實驗室診斷。6、詳見Word文檔。第二十五頁，共三十一頁，2022年，8月28日白喉、破傷風(fēng)凝集抗體檢測1、白喉、破傷風(fēng)凝集抗體檢測方法一樣，只是致敏血球不一樣。2、目前，國內(nèi)只有北京生研所流行病室和中國藥品生制品鑒定所生產(chǎn)該試劑，但每年非常不規(guī)范，時常斷貨。不能保證正常血清學(xué)監(jiān)測之需要。3、試劑主要是白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素致敏的致敏血球和對照血球，致敏血球是兩種，對照血球是一種，一般都以綿羊紅細(xì)胞作為載體。4、檢測方法詳見Word文檔。第二十六頁，共三十一頁，2022年，8月28日百日咳凝集抗體檢測方法1、百日咳凝集抗體檢測方法現(xiàn)在多使用微量凝集實驗，這主要是針對以前全細(xì)胞百白破疫苗，即針對百日咳菌體抗原所涉及的實驗。2、隨著無細(xì)胞百白破疫苗的廣泛推廣和使用，其相應(yīng)的抗原和抗體也隨之發(fā)生改變，所以檢測方法也要發(fā)生改變，只是目前實驗方法和檢測試劑需要篩選。3、有關(guān)微量凝集試驗方法和酶標(biāo)實驗方法詳見Word講稿。第二十七頁，共三十一頁，2022年，8月28日乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測1、乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測是2008年國家要求省級考核市級績效考核的內(nèi)容。2、有關(guān)三類抗體的詳細(xì)檢測方法，在績效考核中沒有做出詳細(xì)規(guī)定，對于前兩種抗體現(xiàn)多采用ELISA方法進(jìn)行檢測，國內(nèi)有多家試劑公司生產(chǎn)，只是質(zhì)量各不相同，大家可以自己進(jìn)行篩選。兩種檢測方法都是定性檢測。3、結(jié)合自己所掌握的實驗技術(shù)和方法，以及對調(diào)查對象的詳細(xì)的接種情況，結(jié)果情況等綜合進(jìn)行考察。第二十八頁，共三十一頁，2022年，8月28日脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測1、這方面的檢測做的比較少，目前常常使用的方法有兩種：脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）和ELISA法檢測三型IgG抗體。2、脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）檢測比較復(fù)雜，需要培養(yǎng)細(xì)胞，對人員和設(shè)備要求較高。該方法是定量檢測。3、ELISA法檢測三型IgG抗體相對要簡單得多，目前國內(nèi)有成品試劑盒出售，只是定性檢測，一般方法簡單。4、有關(guān)兩種檢測方法詳見Word文檔。第二十九頁，共三十一頁，2022年，8月28日結(jié)核菌素試驗在人體身上進(jìn)