基因工程的基本操作程序第步

基因工程的基本操作程序第步第一頁，共十七頁，2022年，8月28日復(fù)習(xí)提問1.基因工程的基本操作程序的四個(gè)步驟2.目的基因主要指什么?也可以是什么?3.獲得目的基因常用的方法。4.基因文庫主要包括哪兩種?5.PCR技術(shù)的原理、條件6.PCR與DNA復(fù)制的區(qū)別（表格）第二頁，共十七頁，2022年，8月28日PCR技術(shù)—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

原理：條件：PCR擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理四種脫氧核苷酸一對引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的兩條鏈為模板溫度控制第三頁，共十七頁，2022年，8月28日PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制PCR技術(shù)解旋酶催化DNA在高溫作用下變性解旋細(xì)胞內(nèi)（主要在細(xì)胞核內(nèi)）細(xì)胞外（主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi)）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）細(xì)胞內(nèi)溫和條件需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行區(qū)別解旋方式場所酶溫度條件前提有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物聯(lián)系①模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成②原料：均為四種脫氧核苷酸第四頁，共十七頁，2022年，8月28日PCR技術(shù)擴(kuò)增過程a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，

斷裂，形成_______

b、復(fù)性（55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈第五頁，共十七頁，2022年，8月28日1.用一定的_________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出____________。2.用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生_________________?！?/p>

核心3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______處，再加入適量___________，形成了一個(gè)重組

DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建第六頁，共十七頁，2022年，8月28日基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心質(zhì)粒DNA分子一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種限制酶

目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合過程，實(shí)際上是不同來源的基因重組的過程。第七頁，共十七頁，2022年，8月28日

科學(xué)家在培育抗蟲棉時(shí)，經(jīng)過了許多復(fù)雜的過程和不懈的努力，才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子(抗蟲基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子(抗蟲基因末端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力。資料:第八頁，共十七頁，2022年，8月28日基因表達(dá)載體的組成：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。a、目的基因b、啟動(dòng)子c、終止子d、標(biāo)記基因等第九頁，共十七頁，2022年，8月28日(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。轉(zhuǎn)化——目的基因進(jìn)入_________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持_____和_____的過程受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)第十頁，共十七頁，2022年，8月28日方法導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——Ca離子處理法(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞第十一頁，共十七頁，2022年，8月28日

目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到受體細(xì)胞的染色體上目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)1.農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物。Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體上2.轉(zhuǎn)化第十二頁，共十七頁，2022年，8月28日1.下表關(guān)于基因工程中有關(guān)基因操作的名詞及對應(yīng)的內(nèi)容，正確的組合是 2、下列屬于獲取目的基因的方法的是()①利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫中提取③從受體細(xì)胞中提?、芾肞CR技術(shù)⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥第十三頁，共十七頁，2022年，8月28日3.細(xì)菌的質(zhì)粒分子帶有一個(gè)抗菌素抗性基因，該抗性基因在基因工程中的主要作用是

A．提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性B．有利于對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測C．增加質(zhì)粒分子的分子量D．便于與外源基因連接4.

有關(guān)基因工程的敘述正確的是A．限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用B．重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的C．質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料第十四頁，共十七頁，2022年，8月28日5.哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成部分()A.啟動(dòng)子B.終止密碼

C.標(biāo)記基因D.目的基因6.下列哪項(xiàng)不是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法()A．基因槍法B．顯微注射法

C.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法D．花粉管通道法第十五頁，共十七頁，2022年，8月28日

胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素，其產(chǎn)量之低和價(jià)格之高可想而知。假如讓你用基因工程的方法使大腸桿菌生產(chǎn)出人的胰島素，想一想，如何設(shè)計(jì)？

嘗試設(shè)計(jì)第十六頁，共十七頁，2022年，8月28日(四)目的基因的檢測與鑒定——檢查是否成功檢測—鑒定—①檢測轉(zhuǎn)基