儀器分析實(shí)驗(yàn)講義

儀器分析實(shí)驗(yàn)講義實(shí)驗(yàn)一高效液相色譜儀的認(rèn)識(shí)與使用一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)，熟悉各單元組件的功能2、 掌握高效液相色譜分離的工作原理二、 實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，其與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，混合物在兩相間經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中流出。三、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程1、打開(kāi)電源2、 按順序依次打開(kāi)高效液相色譜儀的工作站、檢測(cè)器、高壓輸液泵、柱溫箱。3、 講解各部分各個(gè)單元的功能作用4、 示范進(jìn)樣操作5、觀察基線是否平穩(wěn)，有無(wú)噪音6、觀察譜圖，了解峰高和半峰寬的意義四、 思考題1、 高效液相色譜儀是有哪幾部分組成的？各起什么作用？繪制工作原理圖并簡(jiǎn)述其工作流程。2、 高效液相色譜儀實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中有哪些要注意的事項(xiàng)？（樣品的處理、流動(dòng)相得處理、進(jìn)樣前排氣、色譜柱的連接與保養(yǎng)等）實(shí)驗(yàn)二氨基酸的分離鑒定—紙色譜法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)對(duì)氨基酸的分離，學(xué)習(xí)運(yùn)用紙色譜法分離混合物的基本原理，掌握紙色譜的操作方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理紙色譜（PaperChromatography，簡(jiǎn)稱PC）,也叫紙層析，是以濾紙作為惰性支持物的分配色譜，濾紙纖維上有親水性的羥基，通過(guò)吸附一層水作為固定相，通常把有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。有機(jī)溶劑自上而下流動(dòng)稱為下行色譜，自下而上流動(dòng)稱為上行色譜。流動(dòng)相流經(jīng)支持物時(shí)，與固定相之間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。物質(zhì)被分離后在紙色譜圖譜上的位置用Rf值（比移值）來(lái)表示：Rf值=原點(diǎn)到色譜點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離在一定條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)，其大小受物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)物質(zhì)組成與比例、pH值、選用濾紙質(zhì)地和溫度等多種因素影響。此外，樣品中的鹽分、其他雜質(zhì)以及點(diǎn)樣過(guò)多均會(huì)影響的有效分離。無(wú)色物質(zhì)的紙色譜圖譜可用光譜法（紫外光照射）或顯色法鑒定，氨基酸紙色譜圖譜常用茚三酮或吲哚醌作為顯色劑，本實(shí)驗(yàn)采用茚三酮作為顯色劑。三、 儀器與試劑（一） 實(shí)驗(yàn)器材（1）層析缸（2）毛細(xì)管（3）噴霧器（4）培養(yǎng)皿（5）電吹風(fēng)機(jī)（6）層析濾紙（新華一號(hào)）（7）針線、直尺（二） 實(shí)驗(yàn)試劑（1） 擴(kuò)展劑：4份水飽和的正丁醇和1份冰乙酸的混合物。將20毫升正丁醇與5毫升冰乙酸放入分液漏斗中與15毫升水混合，充分振蕩，靜置后分層，放出下層水層，取漏斗內(nèi)的擴(kuò)展劑約5毫升置于小燒杯中做平衡溶劑，其余的倒入培養(yǎng)皿中備用。（2） 氨基酸溶液：5mg/mL的賴氨酸、谷氨酸、丙氨酸溶液以及它們的混合液。（3）顯色劑：0.5%水合茚三酮正丁醇溶液。四、 操作步聚準(zhǔn)備：將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中，取長(zhǎng)22厘米，寬14厘米的色譜濾紙一張，在濾紙的一端距邊緣2-3厘米處用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔2厘米作一記號(hào)，等待點(diǎn)樣。點(diǎn)樣：用毛細(xì)管將各氨基酸樣液分別點(diǎn)在7個(gè)位置上，注意一定要每個(gè)點(diǎn)用一個(gè)毛細(xì)管，避免混用污染。樣點(diǎn)干燥后再點(diǎn)2-3次，每點(diǎn)在濾紙上的擴(kuò)散直徑范圍在3毫米內(nèi)為最佳。擴(kuò)展：用針線將濾紙縫成圓筒狀，注意紙的兩邊不能接觸，留一定縫隙。將盛有約20毫升擴(kuò)展劑的培養(yǎng)皿迅速置于密閉的色譜缸中，并將濾紙垂直立于培養(yǎng)皿中，點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線1厘米，待溶劑上升至距離濾紙上端2厘米左右時(shí)取出濾紙，用鉛筆在溶劑前沿劃一邊界線，自然干燥或用電吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑。顯色：用噴霧器均勻噴上0.5%茚三酮正丁醇溶液，然后置100°C烘箱烘烤5分鐘或用電熱風(fēng)吹干即可顯出各色譜斑點(diǎn)。Rf計(jì)算：計(jì)算各種氨基酸的Rf值。五、思考題1．各樣品的Rf值分別是多少？為什么不同的氨基酸有不同的Rf值，影響本實(shí)驗(yàn)Rf值精確性的因素有哪些？實(shí)驗(yàn)三紫外分光光度計(jì)的使用、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庾贤饪梢?jiàn)分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)、性能及使用方法二、 實(shí)驗(yàn)原理紫外分光光度法(UltravioletSpectrophtometry),又稱紫外吸收光譜法(UltravioletMoleculorAbsorptionSpectrophtometry),它是研究分子吸收190.0?llOO.Onm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷,是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過(guò)測(cè)定分子對(duì)紫外光的吸收,可以對(duì)大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物進(jìn)行定性和定量測(cè)定。定性分析時(shí),可在相同的條件下,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,通過(guò)比較未知樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜圖對(duì)未知樣進(jìn)行鑒定。在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下,可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖或有關(guān)的電子光譜數(shù)據(jù)表進(jìn)行比較。三、 儀器與試劑CintralOe型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(GBC公司)容量瓶(1000ml、250ml)比色管(50ml)吸量管(5ml、10ml)高錳酸鉀,賴氨酸,乙烯,丁二烯,苯甲醛準(zhǔn)確稱取高錳酸鉀，賴氨酸，乙烯，丁二烯，苯甲醛各1.000g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉(zhuǎn)移到1000ml的容量瓶中,作為儲(chǔ)備液。四、 實(shí)驗(yàn)步驟打開(kāi)儀器及計(jì)算機(jī)、顯示器、打印機(jī)電源，進(jìn)入“Spectral”軟件操作系統(tǒng)，待儀器自檢結(jié)束，點(diǎn)擊OK,進(jìn)入操作主頁(yè)面。波長(zhǎng)掃描確定波長(zhǎng)掃描參數(shù)：狹縫寬度1.5nm光度測(cè)量形式吸光值掃描范圍200?500nm掃描速度1000nm/min數(shù)據(jù)間隔點(diǎn)1nm存儲(chǔ)文件 選擇路徑和文件名(如F:\phenol.UVD)做基線將盛有參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴?，點(diǎn)擊“Baseline開(kāi)始進(jìn)行基線掃描(3)波長(zhǎng)掃描將盛有樣品和參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴罚c(diǎn)擊“Scan”開(kāi)始掃描(4)定性分析將試樣的波長(zhǎng)掃描圖與已知樣的在相同條件下的波長(zhǎng)掃描圖或已知的譜圖相比較，對(duì)試樣進(jìn)行定性分析五、打印結(jié)果將各物質(zhì)掃描得到的譜圖打印出來(lái)。六、問(wèn)題討論1、 紫外可見(jiàn)分光光度法的定性的依據(jù)是什么？2、 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的主要組成部件有哪些？3、 說(shuō)明紫外可見(jiàn)分光光度法的特點(diǎn)及適用范圍。實(shí)驗(yàn)四可見(jiàn)分光光度法測(cè)定樣品中的總鐵、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆湛梢?jiàn)分光光度計(jì)的工作原理和使用方法,能夠采用工作曲線法測(cè)定樣品中某種單一組分的含量二、實(shí)驗(yàn)原理可見(jiàn)吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷，是研究物質(zhì)光譜的分析方法。通過(guò)測(cè)定分子對(duì)可見(jiàn)光的吸收，可以對(duì)大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物進(jìn)行定性和定量測(cè)定。利用測(cè)量物質(zhì)對(duì)某一單色光吸收程度來(lái)進(jìn)行測(cè)定的。鹽酸羥胺的作用是將溶液中的Fe3+還原成可與鄰二氮菲反應(yīng)的Fe2+，便于測(cè)定溶液中總鐵含量。醋酸鈉溶液的作用是作為緩沖劑，調(diào)節(jié)溶液合適的pH,以保持鄰二氮菲顯色劑的穩(wěn)定性。三、 試劑和儀器可見(jiàn)分光光度計(jì)燒杯100ml容量瓶200，100，50ml洗瓶移液管10、5、2ml濾紙洗耳球硫酸亞鐵銨鄰二氮菲鹽酸羥胺醋酸鈉四、 實(shí)驗(yàn)步驟1、 配制l.OOOmg?mL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，再將其稀釋至lO.Opg?mLT鐵標(biāo)準(zhǔn)操作溶液。2、 分別配制100g?L-1鹽酸羥胺溶液100mL、 1.5g?L-1鄰二氮菲溶液100mL、l.Omol?L-1醋酸鈉溶液100mL。3、 準(zhǔn)備8個(gè)潔凈的50mL容量甁；4、 在6支容量瓶中各加入10.0pg?mL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL；在另2支容量甁中分別加入5ml未知試液。5、 加入1mL100g?L-1鹽酸羥胺溶液，再分別加入2mL1.5g?L-1鄰二氮菲，5mL1.0mol?L-1醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至標(biāo)線，搖勻；6、 用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在510nm下，測(cè)定并記錄各溶液吸光度。五、 問(wèn)題討論1、 繪制上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算待測(cè)樣品的含量？2、 為什么選擇試劑空白？其作用是什么？工作波長(zhǎng)是如何選擇的?實(shí)驗(yàn)五苯丙氨酸含量的測(cè)定、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 了解紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)、性能及使用方法2、 熟悉定性、定量測(cè)定的方法二、 實(shí)驗(yàn)原理紫外分光光度法（UltravioletSpectrophtometry）,又稱紫外吸收光譜法（UltravioletMoleculorAbsorptionSpectrophtometry）,它是研究分子吸收190.0?llOO.Onm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷,是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過(guò)測(cè)定分子對(duì)紫外光的吸收,可以對(duì)大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物進(jìn)行定性和定量測(cè)定。定性分析時(shí),可在相同的條件下,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,通過(guò)比較未知樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜圖對(duì)未知樣進(jìn)行鑒定。在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下,可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖或有關(guān)的電子光譜數(shù)據(jù)表進(jìn)行比較。定量分析是在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定不同濃度苯丙氨酸的標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光值,并自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再在相同的條件下測(cè)定未知樣品的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可得出未知樣中苯丙氨酸的含量。三、 儀器與試劑CintralOe型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（GBC公司）容量瓶（1000ml、250ml）比色管（50ml）吸量管（5ml、10ml）苯丙氨酸（AR）準(zhǔn)確稱取苯丙氨酸1.000g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉(zhuǎn)移到1000ml的容量瓶中，作為儲(chǔ)備液。四、 實(shí)驗(yàn)步驟打開(kāi)儀器及計(jì)算機(jī)、顯示器、打印機(jī)電源，進(jìn)入“Spectral”軟件操作系統(tǒng)，待儀器自檢結(jié)束，點(diǎn)擊OK,進(jìn)入操作主頁(yè)面。波長(zhǎng)掃描（1） 確定波長(zhǎng)掃描參數(shù)：狹縫寬度1.5nm光度測(cè)量形式吸光值掃描范圍 200?500nm掃描速度1000nm/min數(shù)據(jù)間隔點(diǎn)1nm存儲(chǔ)文件選擇路徑和文件名（如F:\phenol.UVD）（2） 做基線將盛有參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴罚c(diǎn)擊“Baseline開(kāi)始進(jìn)行基線掃描（3）波長(zhǎng)掃描

將盛有樣品和參比液的比色皿分別放入?yún)⒈裙饴泛蜆悠饭饴?，點(diǎn)擊“Scan”開(kāi)始掃描(4)定性分析將試樣的波長(zhǎng)掃描圖與已知樣的在相同條件下的波長(zhǎng)掃描圖或已知的譜圖相比較，對(duì)試樣進(jìn)行定性分析3．定量分析標(biāo)準(zhǔn)系列的配制于5支50ml的比色管中，用吸量管分別加入0.5ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。確定定量分析參數(shù)設(shè)置a：方法對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)讀取次數(shù) 1對(duì)每個(gè)樣品的重復(fù)讀取次數(shù)1是否需要測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)樣品線性校正曲線線性計(jì)算方式用峰高計(jì)算定量的數(shù)值計(jì)算方式用峰高計(jì)算定量的數(shù)值b：樣品總共測(cè)量樣品的個(gè)數(shù)輸入待測(cè)樣品的名稱苯酚輸入待測(cè)樣品的名稱苯酚樣品標(biāo)簽從第幾號(hào)開(kāi)始編輯輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度值在std欄中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行標(biāo)識(shí)C：質(zhì)量控制需要質(zhì)量控制對(duì)有問(wèn)題的測(cè)量結(jié)果標(biāo)記后繼續(xù)測(cè)量輸入允許的最大濃度輸入允許的最低濃度d：儀器狹縫1.5nm測(cè)定形式吸光值強(qiáng)度倍數(shù)1工作波長(zhǎng)270nm積分時(shí)間5s把空白液注入兩個(gè)比色皿內(nèi)，并分別放入?yún)⒈群蜆悠饭饴?，按“zero”進(jìn)行調(diào)零，然后按“OK”e：報(bào)告需要報(bào)告 要在線報(bào)告f：結(jié)果儲(chǔ)存輸入選擇的路徑與文件名⑶按“RUN”開(kāi)始定量測(cè)量，按照提示放入各樣品⑷按“View”，觀察標(biāo)準(zhǔn)、樣品及校正曲線五、問(wèn)題討論1、紫外可見(jiàn)分光光度法的定性、定量分析的依據(jù)是什么？實(shí)驗(yàn)六谷物維生素B2含量熒光分光光度法一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諢晒夥止夤舛扔?jì)的使用；了解熒光分光光度計(jì)的檢測(cè)原理。二、 實(shí)驗(yàn)原理維生素B2（即核黃素）在445nm紫外光激發(fā)下產(chǎn)生熒光，在一定濃度范圍內(nèi)其熒光強(qiáng)度與核黃素濃度成正比。用連二亞硫酸鈉還原核黃素成無(wú)熒光物質(zhì)，由還原前后熒光強(qiáng)度之差與內(nèi)標(biāo)熒光強(qiáng)度的比值，計(jì)算樣品中核黃素的含量。三、主要試劑和儀器主要試劑熒光分光光度計(jì)；分析天平(感量1mg，0.1mg)；電熱恒溫水?。痪呷ＡЭ潭仍嚬?，15mL。儀器鹽酸:0.1mol/L鹽酸溶液：將&5mL鹽酸用水稀釋至lOOOmL；冰乙酸；0.02mol/L冰乙酸溶液:將1.8mL冰乙酸用水稀釋至lOOOmL；無(wú)水乙酸鈉:或結(jié)晶乙酸鈉,2.5mol/L水溶液,205g無(wú)水乙酸鈉或345g結(jié)晶乙酸鈉溶于水。稀釋至lOOOmL；高錳酸鉀:40g/L水溶液，貯于棕色瓶中，置于暗處。該溶液可保存一周；過(guò)氧化氫:100mL/L水溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；核黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液：核黃素貯備液I：核黃素；于五氧化二磷干燥器中干燥24h,稱取0.0500g，溶解于0.02mol/L乙酸溶液中，在蒸汽浴上恒速攪動(dòng)至溶解，冷卻后定容至500mL,盛入棕色瓶加甲苯覆蓋，低溫(4°C)保存；該溶液每毫升含O.lmg核黃素；核黃素貯備液II：取核黃素貯備液1,10mL，用0.02mol/L乙酸溶液,定容至100mL,盛入棕色瓶中加甲苯覆蓋，低溫(4C)保存；該溶液每毫升含10pg核黃素；核黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液：取核黃素貯備液II5mL,用水定容至100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配；該溶液每毫升含0.5pg核黃素；測(cè)定樣品前，預(yù)先在相同的條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作液的熒光強(qiáng)度，如有異常，需重新配制標(biāo)準(zhǔn)溶液；熒光素標(biāo)準(zhǔn)溶液：熒光素貯備液：稱取熒光素；0.0500g，用水溶解后定容至lOOOmL。盛入棕色瓶中，低溫(4C)保存；該溶液每毫升含5Opg熒光素;熒光素標(biāo)準(zhǔn)工作液：取熒光素貯備液ImL,用水定容至lOOOmL，盛入棕色瓶中，低溫保存；該溶液每毫升含0.05mg熒光素；連二亞硫酸鈉理$2。4）。四．試樣的選取和制備選取有代表性的谷物樣品（帶殼籽粒需脫殼），揀凈雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。將樣品在60?65°C烘干后粉碎，過(guò)60號(hào)篩（0.25mm）,裝入磨口瓶中備用。五、 實(shí)驗(yàn)步驟稱樣：稱取谷物樣品2?5g（準(zhǔn)確至0.001g）,約含核黃素5mg。將待測(cè)樣品置于100mL容量瓶中。制備樣液：往盛樣品的容量瓶中加75mL鹽酸溶液，于沸水浴中加熱30min。開(kāi)始加熱的5?10min時(shí)常搖動(dòng)容量瓶，以防樣品結(jié)塊。冷卻至室溫后，加5mL乙酸鈉溶液搖勻，用水定容。該試液的pH為4.5。通過(guò)中速干濾紙過(guò)濾，棄去最初的5?10mL濾液，收集濾液于100mL錐形瓶中。以下操作應(yīng)避免直射光。雜質(zhì)氧化：于a、b、c三支15mL刻度試管中各吸入樣液10mL（同時(shí)做平行），往試管a加入1mL核黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液，往試管b、c各加入1mL蒸餾水。然后各加入冰乙酸1mL，旋搖混勻后逐個(gè)加入高錳酸鉀溶液0.5mL，旋搖混勻，靜置2min再逐個(gè)加入過(guò)氧化氫溶液0.5mL旋搖，使高錳酸鉀顏色在10s內(nèi)消退。加蓋搖動(dòng)試管，使試管中的氣體逸盡。測(cè)定：用熒光素溶液調(diào)整熒光儀，使其穩(wěn)定于一定數(shù)值，作為儀器工作的固定條件。調(diào)激發(fā)波長(zhǎng)445nm，發(fā)射波長(zhǎng)530nm，測(cè)定試管a、b的熒光強(qiáng)度，樣液在儀器中受激發(fā)光照射不超過(guò)10s。在試管c中加入20?30mg連二亞硫酸鈉，搖動(dòng)溶解，并使試管中的氣體逸出，迅速測(cè)定其熒光強(qiáng)度作為空白。若溶液出現(xiàn)渾濁，不能讀數(shù)。六、 結(jié)果的計(jì)算計(jì)算公式B－C VR式中:A核黃素（Mg/g，干基）= 人dXX— —管a（樣液加標(biāo)樣）的A－B Vm（1－H）1熒光強(qiáng) 度；B 管b（樣液加水）的熒光強(qiáng)度；C—管c（樣液加連二亞硫酸鈉）的熒光強(qiáng)度，空白；R—口入核黃素標(biāo)樣的量，Mg；液的初始體積，mL；——測(cè)定時(shí)取樣液的體積，mL；m—品質(zhì)量，g；H―品的水分百分率。實(shí)驗(yàn)七認(rèn)識(shí)紅外光譜儀及其使用（化學(xué)系）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆杖芤涸嚇蛹t外光譜圖的測(cè)繪方法，利用紅外光譜圖進(jìn)行化合物的鑒定。二、 實(shí)驗(yàn)原理在紅外光譜分析中，固體試樣和液體試樣都可采用合適的溶劑制成溶液，置于光程為0.01—1mm的液槽中進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)液體試樣量很小或沒(méi)有合適的溶劑時(shí)，就可直接測(cè)定其純液體的光譜。通常是將一滴純液體夾在兩塊鹽片之間以得到一層液膜，然后放入光路中進(jìn)行測(cè)定，這種方法適用于定性分析。制作溶液試樣時(shí)常用的溶劑有CC14（適用于高頻范圍）、cs2、（適用于低頻范圍）、chci3等，對(duì)于高聚物則多采用四氫呋喃（適用于氫鍵研究）、甲乙酮、乙醚、二甲亞砜、氯苯等。一般選擇溶劑時(shí)應(yīng)做到：（1）要注意溶劑—溶質(zhì)間的相互作用，以及由此引起的特征譜帶的位移和強(qiáng)度的變化，例如在測(cè)定含羥基及氨基的化合物時(shí)，要注意配成稀溶液，以避免分子間的締和；（2）由于溶劑本身存在著吸收，所以選擇時(shí)要注意溶劑的光譜，通常其透光率小于35%的范圍內(nèi)將會(huì)有干擾，大于70%的范圍內(nèi)則認(rèn)為是透明的；（3）使用的溶劑必須干燥，以消除水的強(qiáng)吸收帶，防止損傷槽鹽片；（4）有些溶劑由于易揮發(fā)、易燃且有毒性，使用時(shí)必須小心。進(jìn)行紅外光譜定性分析，通常有兩種方法：（1）用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照在相同的制樣和測(cè)定條件下（包括儀器條件、濃度、壓力、濕度等），分別測(cè)繪被分析化合物（要保證試樣的純度）和標(biāo)準(zhǔn)的純化合物的紅外光譜圖。若兩者吸收峰的頻率、數(shù)目和強(qiáng)度完全一致，則可認(rèn)為兩者是相同的化合物。（2）查閱標(biāo)準(zhǔn)光譜圖標(biāo)準(zhǔn)的紅外譜圖集，常見(jiàn)的有薩特勒（Sadtler）紅外譜圖集，“API”紅外光譜圖，“DMS”周邊缺口光譜卡片。上述的定性分析方法，一般是驗(yàn)證被分析的化合物是否為所期待的化合物的一種鑒定方法。如果要用紅外光譜定性未知物的結(jié)構(gòu)，則必須結(jié)合其他分析手段進(jìn)行譜圖解析。如果解析結(jié)果是前人鑒定過(guò)的化合物，則可繼續(xù)采用上述方法進(jìn)行鑒定。如是未知物，就需得到其他方面的數(shù)據(jù)（如核磁共振譜、質(zhì)譜、紫外光譜等），以提出最可能的結(jié)構(gòu)式。三、 儀器與試劑IR—400型紅外分光光度計(jì)或7400型紅外分光光度計(jì)；洗耳球；2mL注射器；可拆式液槽；固定式液槽（0.5mm和0.1mm）；—組已知分子式的未知試樣、四氯化碳、氯仿、丙酮四、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程1、液膜法用滴管吸取未知液體試樣，滴1?2滴于一鹽片上，再壓上另一鹽片，兩塊鹽片將會(huì)由于毛細(xì)作用而粘在一起，中間形成一層厚度小于0.01mm的液膜層。將兩鹽片小心地放置在可拆液槽的后框片上，蓋上前框片，旋上四個(gè)螺帽，為避免用力不均勻?qū)е蔓}片破碎，必須同時(shí)對(duì)角地小心旋緊，然后放入儀器的光路中測(cè)繪其吸收光譜，用同樣方法測(cè)繪二至三個(gè)未知試樣的紅外光譜圖。按教師要求，配制1—2種未知試樣的四氯化碳溶液（1%）和氯仿溶液（5%），用2毫升注射器將溶液注入進(jìn)0.5mm液槽或0.1mm液槽的試樣注入口，直至試樣溶液由液槽上部試樣出口小孔溢出為止，并立即用塞子塞住入口和出口，然后將液槽放到儀器的測(cè)量光路中。另取一相同厚度的液槽，注入相應(yīng)量的溶劑（與試樣中的溶劑量應(yīng)大致相同）后，放到參比光路中，隨即測(cè)繪它們的紅外光譜圖。注意：測(cè)量完畢后應(yīng)立即倒出試樣，并清洗液槽，可用注射器從試樣注入口注入溶劑，由試樣出口將溶劑抽出，速度要慢，以防溶劑迅速蒸發(fā)時(shí)空氣中濕氣凝集在鹽片上而損壞鹽片。清洗三次后，用洗耳球吹入干燥空氣使之干燥，對(duì)于可拆式液槽，應(yīng)卸下鹽片，用棉花浸丙酮后擦去試樣，再使其干燥。3、查閱薩特勒紅外光譜圖按教師給出的未知試樣的分子式，使用薩特勒紅外光譜圖的分子式索引，根據(jù)分子式中各元素的數(shù)目順序查出可能的光譜號(hào)（光柵），再根據(jù)光譜號(hào)找出與未知試樣光譜圖相同的標(biāo)準(zhǔn)譜圖，進(jìn)行對(duì)照，并確定該試樣是什么化合物。五、結(jié)果處理1、在測(cè)繪的譜圖上準(zhǔn)確標(biāo)出所有吸收峰的波數(shù)。2、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖查到的結(jié)構(gòu)，列表討論譜圖上的主要吸收峰，并分別指出其歸屬。六、思考題1、用固定液槽測(cè)量溶液試樣時(shí)，為什么要用另一液槽裝入溶劑后作出參比？2、配制試樣溶液后，應(yīng)如何選擇溶劑？實(shí)驗(yàn)八 工業(yè)廢水pH值的測(cè)定一、目的用PHS-2C型酸度計(jì)測(cè)量溶液的PH值，學(xué)會(huì)PHS-2C型酸度計(jì)的使用。二、實(shí)驗(yàn)原理pH計(jì)是用電位法測(cè)量溶液pH值的儀器，由pH復(fù)合電極插入被測(cè)溶液后，復(fù)合電極的電位隨氫離子溶度的變化而變化，這一變化符合能斯特方程，與復(fù)合的參比電極一起形成電極電位，這一變化可以用輸入阻抗高的毫伏計(jì)測(cè)量電池的電動(dòng)勢(shì)，再由儀器轉(zhuǎn)換為相對(duì)應(yīng)的pH值。由于水樣的pH值常常隨空氣中CO2等因素的改變而改變，因此水樣分析要及時(shí)。三、 儀器與試劑250ml容量瓶3只，塑料洗瓶1只，鄰苯二甲酸氫鉀，混合磷酸鹽，四硼酸鈉，蒸餾水。四、 測(cè)定步驟1、 按標(biāo)準(zhǔn)緩沖液配制方法配制各250ml緩沖溶液。配制pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的試劑為市售定量藥品，用時(shí)剪開(kāi)裝有鄰苯二甲酸氫鉀，混合磷酸鹽，四硼酸鈉的塑料袋，將粉末倒入250ml容量瓶中，以少量無(wú)CO2蒸餾水沖洗塑料袋內(nèi)壁數(shù)次，轉(zhuǎn)入容量瓶，試劑完全溶解后，容量瓶加蒸餾水并稀釋到刻度，搖勻，貼上寫(xiě)有緩沖液名稱，配制日期，配制人標(biāo)簽，備用。2、 先用pH試紙粗略測(cè)定一下被測(cè)工業(yè)廢水的酸堿性，然后按儀器使用方法（見(jiàn)附錄二）用酸性或堿性緩沖溶液校正儀器。3、 測(cè)5個(gè)工業(yè)廢水樣液，記錄顯示pH值，取平均值。五、 注意事項(xiàng)1、 含油脂的水樣必須濾去油脂后才能使用復(fù)合電極。2、 若樣液為強(qiáng)堿溶液，應(yīng)控制溫度在15°C以上，迅速測(cè)量后立即將電極沖洗干凈。思考題酸度計(jì)為什么要用已知pH值的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液校正？實(shí)驗(yàn)九認(rèn)識(shí)氣相色譜儀及使用（化學(xué)系）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 了解氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)，熟悉各單元組件的功能2、 掌握氣相相色譜分離的工作原理二、 實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，其與固定相發(fā)生相