分析化學(xué)畢業(yè)論文

分析化學(xué)畢業(yè)論文

參考文獻(xiàn)

TLC、GC、HPLC法測定山奈中活性成份化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院

08級材料科學(xué)班

張曉榮

021指導(dǎo)老師

滿都拉

講師摘要:[目的]定性的分析蒙藥山奈中的活性化學(xué)成分。[方法]將山奈經(jīng)過脂肪抽出器然后利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，利用硅膠柱和展開劑分離，提取活性成分做薄層色譜、高效液相色譜，氣相色譜。[結(jié)果]分離出山奈中含有的活性成分。[結(jié)論]選擇建立化學(xué)成分的分離測定方法可對山奈中的活性成分準(zhǔn)確進(jìn)行分離和檢測。關(guān)鍵詞：定性分析

薄層色譜

高效液相色譜

氣相色譜

山奈又名三奈、沙姜多年生宿根草本。塊狀根莖，單生或數(shù)枚連接，淡綠色或綠白色，芳香；根粗壯。山奈所含的山奈酚是黃色針狀結(jié)晶，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明具有廣泛的活性，不僅對心血管消化系統(tǒng)有一定療效，而且具有抗炎，抗菌，抗病毒，解痙等作用。由于山奈類化合物是中藥有效成份之一，研究野薔薇中山奈類化合物的含量將有助于探索有效成分與療效間的關(guān)系[1]。

目前國內(nèi)對山奈中的有效成分的測定主要有分光光度分析法，薄層-化學(xué)發(fā)光法和高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）法。薄層-化學(xué)發(fā)光法的感染因素較多，結(jié)果準(zhǔn)確度不高，光譜分析法的干擾因素較多，結(jié)果準(zhǔn)確度不高，本實(shí)驗(yàn)嘗試?yán)肏PLC[2]方法、氣相色譜（GasChromatography，GC）和薄層色譜（ThinLayerchromatography，TLC）對山奈中山奈酚的含量進(jìn)行了測定，HPLC方法簡單、分析時(shí)間短、精密度高、分離度好，可用于實(shí)際樣品中的確認(rèn)和測定，對研究開發(fā)天然藥物有一定的參考價(jià)值[1]。1山奈有效成分的提取材料與設(shè)備

1材料：山奈（研缽研磨充分備用），薄層硅膠板：硅膠厚度：；

2設(shè)備：脂肪抽出器，平底燒瓶，恒溫加熱磁力攪拌器，電子天平，循環(huán)水式多用真空泵，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。山奈活性成分提取方法山奈化學(xué)成分提取

1.將山奈用研缽研磨成細(xì)粉，將粉末稱重，每10g一份，分成四份。

2.用大濾紙將稱好的山奈粉末包成柱狀，上下用濾紙封口。包裝時(shí)應(yīng)注意藥品包直徑應(yīng)小于脂肪抽出器的直徑，以免發(fā)生堵塞。

3.將藥裝入脂肪抽出器，取100ml無水乙醇，倒入脂肪抽出器中，使乙醇溶液將山奈藥包完全浸泡14個小時(shí)，其余的乙醇溶液倒入平底燒瓶中。

4.加熱燒瓶，使其虹吸5次。溫度保持燒瓶中的溶液恒沸即可，過高將發(fā)生爆沸使藥品燒結(jié)。

5

.停止加熱，將虹吸管內(nèi)的液體及燒杯中的液體倒出，用容量瓶收取并注上標(biāo)簽。山奈化學(xué)成分的濃縮

1.裝好儀器，檢查裝置的氣密性，以免發(fā)生漏氣，無法真空抽氣。旋轉(zhuǎn)端的燒瓶中，加入藥品時(shí)，不超過燒瓶的三分之二。

2.打開旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，設(shè)置溫度為65℃，操作時(shí)應(yīng)該注意出氣閥以及旋轉(zhuǎn)端燒瓶的情況。一旦旋轉(zhuǎn)端的燒瓶出現(xiàn)氣泡時(shí)，說明即將爆沸時(shí)，此時(shí)應(yīng)及時(shí)打開出氣閥，以防止其爆沸，倒吸。

3.當(dāng)冷凝管及廢液燒瓶不再有廢液滴出時(shí)，出現(xiàn)黃總棕色的油狀物質(zhì)濃縮完成。

在濃縮過程中圓底燒瓶中如果有氣泡一定要及時(shí)排除，整個系統(tǒng)的氣密性一定要好[3]。2薄層色譜分析山奈化學(xué)成分

將薄板切割成5cm×2cm的薄板，使用時(shí)在硅膠板距兩端各1cm

處用鉛筆輕輕的劃兩條平行直線，標(biāo)起始線為

L1，終止線為

L2

。并在起始處用鉛筆輕輕標(biāo)記1、2兩個點(diǎn)樣點(diǎn)，用毛細(xì)吸管蘸取山奈提取液，在起始線

L1

上的處1點(diǎn)樣，在2處用配好的葛根湯溶液點(diǎn)樣。點(diǎn)好樣將其放入加入少量甲醇溶液的燒杯中密封4—5個小時(shí)，將其取出放入干燥箱干燥，然后將其放入加入少量碘的燒杯中密封2-3小時(shí)顯色[4]。3山奈化學(xué)成分的氣相色譜色譜分析原理

以惰性氣體作為流動相，利用試樣中各組分在色譜柱中的氣相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)汽化后的試樣被載氣帶入色譜柱中運(yùn)行時(shí)，組分就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次（103-106）的分配（吸附－脫附－放出）由于固定相對各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同）,因此各組份在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過一定的柱長后，便彼此分離，順序離開色譜柱進(jìn)入檢測器，產(chǎn)生的離子流信號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。山奈和基準(zhǔn)物質(zhì)甲醇溶液的氣相色譜圖圖1山奈活性成分氣相色譜圖由圖1山奈活性成分氣相色譜圖可以看出圖中出現(xiàn)在了10個大小不一的峰，說明山奈中可能含有很多種活性成分。圖2基準(zhǔn)物質(zhì)甲醇?xì)庀嗌V圖上圖中出現(xiàn)了基本平穩(wěn)的直線，說明甲醇基準(zhǔn)液為純凈物質(zhì)。

山奈、基準(zhǔn)液甲醇?xì)庀嗌V對比結(jié)論通過2個圖的對比，可以得出在較純的基準(zhǔn)液溶解的山奈中含有多種活性成分。4硅膠柱層析液分離山奈的化學(xué)成分儀器和藥品

1.儀器：層析管

錐形瓶三角漏斗針樣過濾器（規(guī)格：孔徑φ13）

2.藥品：甲醇

電子清洗劑硅膠（60-100目）

裝置如右圖：展開劑分離步驟先將層析柱洗凈干燥（層析管中須有的海石頭砂），然后將用甲醇溶液泡好的硅膠裝入柱中，必須裝填均勻，嚴(yán)格排除空氣，灌進(jìn)去的硅膠不能裂縫。本實(shí)驗(yàn)采取濕法裝填，將泡好的硅膠慢慢倒入柱中，將管子下端活塞打開，使溶劑流出，硅膠粒漸漸下沉，并用玻璃棒輕敲壁身，直至硅膠面不再下降。加完硅膠后，繼續(xù)讓甲醇流出，至硅膠穩(wěn)定不變?yōu)橹埂Ｕ归_劑配置如下表：組號三氯甲烷：甲醇（v/v）總量（ml）19∶120023∶120031∶120041∶320051∶9200

讓甲醇全部流出（硅膠不面露出）保持硅膠平面的平整（用甲醇調(diào)整），關(guān)閉塞子，順著柱子壁慢慢滴入藥品溶液展開以后打開塞子，讓柱子中的液體慢慢流出（1-2滴每秒）。

在整個過程中不要讓硅膠露出液面，以及柱子中的硅膠干裂從而形成氣泡。用洗脫劑按順序進(jìn)行洗脫，用10個錐形瓶接溶液，每個錐形瓶接100ml，流速控制每秒1滴。將錐形瓶收集的溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮。濃縮時(shí)，應(yīng)將溫度設(shè)置為60℃，防止溫度過高發(fā)生爆沸或者藥物燒結(jié)。

在濃縮好的藥品中加入1ml甲醇，將其充分震蕩溶解，過針樣過濾器，以備用于高效液相色譜。5高效液相色譜(HPLC)測定山奈成分儀器與試劑

儀器：Waters

2487dualλ

AbsorbanceDetector

檢測池BinaryHPLC

Pump

高效液相色譜儀

試劑：甲醇

針樣過濾器過濾后的山奈化學(xué)成分實(shí)驗(yàn)原理

液—液分配色譜法(Liquid-liquidPartitionChromatography）及化學(xué)鍵合相色譜(ChemicallyBondedPhaseChromatography)流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。

色譜條件：流動相：40%水&60%甲醇

流速：1mol/min檢測波長：254nm

當(dāng)峰出現(xiàn)平臺時(shí)，說明藥物濃度較大，需要將其稀釋。液相色譜實(shí)驗(yàn)步驟

最佳波長的選擇選擇高靈敏度的檢測波檢測量。在200~490nm下對μg/ml的山奈酚進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果選擇254nm為實(shí)驗(yàn)最佳吸收波長[1]。

將濃縮好過濾好的10個樣品，進(jìn)行高效液相色譜分析。由于對樣品進(jìn)行高效液相分析的時(shí)候，藥物濃度不宜過大，相圖中出現(xiàn)平臺時(shí)說明藥物濃度大，需要將其稀釋。山奈高效液相色譜圖圖3（1）號山奈高效液相色譜圖圖中出現(xiàn)了2個獨(dú)立的峰說明活性成分分離較好圖4（2）號山奈試劑高效液相色譜圖圖中只出現(xiàn)一個獨(dú)立的峰，說明山奈經(jīng)過硅膠柱分離較為有效。6結(jié)論圖5葛根湯高效液相色譜圖上圖中只出現(xiàn)一個獨(dú)立的峰，說明此藥物的成分較為純凈

通過以上薄層色譜、氣相色譜、硅膠柱分離、液相色譜和純藥物的高效液相色譜圖進(jìn)行比較可以得出：在未進(jìn)行硅膠柱分離之前的山奈藥物中含有多種活性成分（見圖1），其成分較為復(fù)雜難以確定，山奈提取物通過硅膠柱分離以后，所得的試劑進(jìn)行高效液相分析后，其在液相色譜圖中出現(xiàn)獨(dú)立的峰（見圖3、圖4）。說明在選擇合適的展開劑后，可以用硅膠柱將山奈的活性成分很好的分離開來。且PHLC方法快速、簡便、精密度和回收率都較好，能準(zhǔn)確測定山奈中的活性成分[5]，這有利于了解和檢測其具體所含有活性成分的臨床藥效，對開發(fā)蒙藥有一定的參考價(jià)值。7致謝

在本次畢業(yè)設(shè)計(jì)過程中，滿都拉老師對該論文從選題、構(gòu)思、資料收集到最后定稿的各個環(huán)節(jié)給予細(xì)心指引與教導(dǎo)，使我對液相測譜、氣相測譜有了深刻的認(rèn)識，使我得以最終完成畢業(yè)設(shè)計(jì)，在此表示衷心感謝。參考文獻(xiàn)[1]迪麗努爾·馬里克，米麗班·霍加艾合買提，沙拉買提.野薔薇中山奈酚含量測定方法的研究[J].食品安全，2011,36（5）:279-280[2]曹曉芝,袁成,王景詳.高效液相色譜法測定血漿中羥乙基蘆丁的濃度<+>.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志[3]邢軍,張瑞,李友廣.新疆紫花苜蓿中黃酮類色素的提取研究[J].食品工業(yè)科技,2008,29(3):186-189[4]張瑞,胡娜娜,邢軍.薄層色譜法和硅膠柱層析法分離新疆紫花苜蓿中黃酮類化合物的研究[J].食品科技,2011,36(1):178-179

TLC,

GC,HPLCmethodforthedeterminationoftheactiveingredientinthe

shannai

CollegeofChemistryandEnvironmentalScience08MaterialsScienceclassesZhang

XiaorongInstructor

Man

Dula

LecturerAbstract:

[Objective]TheactivechemicalingredientinqualitativeanalysisofMongolianMedicine

shannai,

[Method]

shannai

afterthefatoutandthenusetherotaryevaporator,silicagelcolumnandsolventseparationtoextracttheactiveingredienttodobyTLC,HPLC,GC.[Results]TheseparationoftheactiveingredientcontainedinthecomingChennai.

[Conclusion]

Choosetoestablishthechemicalcomposi