醫(yī)學(xué)科研的基本要素

醫(yī)學(xué)科研的基本要素主講老師：陳青山醫(yī)學(xué)院流行病學(xué)教研室醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的三大基本要素：處理因素、受試對(duì)象和實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。例如：用某種然植物藥物治療再生障礙性貧血，觀察比較藥物對(duì)兩組病人血小板上升的影響重組細(xì)胞因子及天然植物藥物即該研究中的處理因素再生障礙性貧血病人即受試對(duì)象血小板數(shù)量變化即實(shí)驗(yàn)效應(yīng)處理因素（包括生物、化學(xué)、物理或內(nèi)外環(huán)境）指根據(jù)研究目的施加于受試對(duì)象的因素；受試對(duì)象指處理因素作用的對(duì)象，醫(yī)學(xué)科研的受試對(duì)象包括人、動(dòng)物、細(xì)胞與分子；實(shí)驗(yàn)效應(yīng)指處理因素作用于受試對(duì)象所產(chǎn)生的效果和反應(yīng)。科研的三大基本要素——構(gòu)成完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，任何科學(xué)研究須確定這三個(gè)基本要素，才能保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確順利地進(jìn)行。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型及要素實(shí)驗(yàn)有不同的分類(lèi)方法，通常按實(shí)驗(yàn)進(jìn)程可將其分為——預(yù)備實(shí)驗(yàn)決定性實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)一、預(yù)備實(shí)驗(yàn)預(yù)備實(shí)驗(yàn)指在正式實(shí)驗(yàn)前所進(jìn)行的小規(guī)模實(shí)驗(yàn)，簡(jiǎn)稱(chēng)預(yù)實(shí)驗(yàn)。預(yù)實(shí)驗(yàn)的目的：檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否完善；確定實(shí)驗(yàn)操作方法是否正確可行；獲得某些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，以確保后續(xù)正式實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。不做預(yù)實(shí)驗(yàn)的后果例如：某課題在觀察基因修飾的骨髓干細(xì)胞對(duì)Fischer344大鼠骨髓重建影響的研究中，研究者僅參照文獻(xiàn)報(bào)道中其他品系大鼠及小鼠骨髓抑制模型在建模時(shí)使用的60Co照射劑量，確定了照射方案，未經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)而直接開(kāi)始正式實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在隨后“正式”實(shí)驗(yàn)中，因所選照射劑量不適合該品系大鼠，多數(shù)模型大鼠在極短時(shí)間內(nèi)死亡，故無(wú)法觀察處理因素產(chǎn)生的效應(yīng)結(jié)果。此外，在實(shí)驗(yàn)中還可遇到許多未知因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，以及實(shí)驗(yàn)者對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法或?qū)嶒?yàn)儀器操作不熟練而造成的實(shí)驗(yàn)偏差等，都應(yīng)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中加以解決。通常采用的方法是利用已知公認(rèn)的肯定（陽(yáng)性）和（或）否定（陰性）的樣本對(duì)實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果的正確性進(jìn)行驗(yàn)證。預(yù)備實(shí)驗(yàn)的分類(lèi)(1)導(dǎo)向性實(shí)驗(yàn)：是為了確定正式實(shí)驗(yàn)的意義而針對(duì)少數(shù)對(duì)象進(jìn)行的小規(guī)模實(shí)驗(yàn)。例如：研究某種降壓藥物的降壓效果首先選取少量高血壓患者作為受試對(duì)象，檢測(cè)這種藥物是否對(duì)血壓有影響。若能觀測(cè)到降壓效果，則再進(jìn)行大規(guī)模的正式實(shí)驗(yàn)，探討該藥的確切療效，并評(píng)價(jià)其對(duì)不同類(lèi)型高血壓患者的療效。(2)篩選性實(shí)驗(yàn)：指從眾多研究對(duì)象或研究指標(biāo)中選出值得深入研究的對(duì)象或需進(jìn)一步驗(yàn)證的指標(biāo)。例如，從大量中草藥中篩選出若干種具有舒張血管功能的藥物，再進(jìn)行藥理學(xué)研究(3)觀測(cè)性實(shí)驗(yàn)：是為搜集正式實(shí)驗(yàn)所需數(shù)據(jù)（如均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)等）而進(jìn)行的小規(guī)模預(yù)試，目的是對(duì)主要實(shí)驗(yàn)的部署進(jìn)行指導(dǎo)。例：研究某藥物的傳染或毒性因子在觀測(cè)實(shí)驗(yàn)中，采用稀釋度間隔很大（如100倍），用于每一稀釋度的動(dòng)物很少（如2只）的策略。取得結(jié)果后，在可能有作用的滴定終點(diǎn)兩側(cè)再選擇間隔?。ㄈ?倍）的稀釋度，同時(shí)使用較多數(shù)量的動(dòng)物（如5只）。通過(guò)此方法，可用最少量動(dòng)物獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。二、正式實(shí)驗(yàn)正式實(shí)驗(yàn)是通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得所需數(shù)據(jù)并確認(rèn)實(shí)驗(yàn)可行性后進(jìn)行的大規(guī)模實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)：有明確的研究目的和可行的設(shè)計(jì)方案，能通過(guò)設(shè)置對(duì)照等實(shí)驗(yàn)手段控制影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的干擾因素。通常在預(yù)實(shí)驗(yàn)后、正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前還需進(jìn)行決定性實(shí)驗(yàn)，即在預(yù)實(shí)驗(yàn)所提供數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行綜合性、整體性、關(guān)鍵性的實(shí)驗(yàn)。預(yù)備實(shí)驗(yàn)、決定性實(shí)驗(yàn)和正式實(shí)驗(yàn)通常在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中構(gòu)成一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)流程，其中預(yù)備實(shí)驗(yàn)和決定性實(shí)驗(yàn)是確保開(kāi)展正式實(shí)驗(yàn)的前提。一般而言，預(yù)備實(shí)驗(yàn)的結(jié)果并不在論文中發(fā)表，而決定性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果往往是論文的第1、2幅圖表。例如，我國(guó)學(xué)者關(guān)于“脾基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)成熟樹(shù)突狀細(xì)胞分化為調(diào)節(jié)性樹(shù)突狀細(xì)胞”的研究于2004年發(fā)表于NatImmu-nol，其中圖3-1為該研究的決定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第二節(jié)處理因素處理因素亦稱(chēng)受試因素，是醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的基本要素之一。一般而言，處理因素是指外界施加于受試對(duì)象的因素，是在實(shí)驗(yàn)中需觀察并闡明其效應(yīng)功能的因素。通常包括——生物因素（如細(xì)菌、病毒、生物制品等）化學(xué)因素（如藥物、激素、毒物等）物理因素（如溫度、射線(xiàn)、手術(shù)等）生物體及其本身的某些特征（如動(dòng)物品系、人的年齡、性別、民族、遺傳特性等）。選擇處理因素時(shí)易犯的錯(cuò)誤：抓不住實(shí)驗(yàn)中的主要處理因素，選擇過(guò)多或過(guò)少的處理因素。選擇過(guò)多使實(shí)驗(yàn)分組及受試對(duì)象的例數(shù)增多，實(shí)驗(yàn)誤差難以控制；選擇過(guò)少則因處理因素過(guò)少使研究工作缺乏深度與廣度。例如：研究者擬觀察類(lèi)風(fēng)濕患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcells，Treg)數(shù)量，分析IL-4，GM-CSF，IL-6及TGF-(3對(duì)其分化發(fā)育及功能的影響。研究中，施加于受試對(duì)象(Treg)的處理因素包括影響Treg分化發(fā)育和功能的4種細(xì)胞因子，由于處理因素過(guò)多，再加之實(shí)驗(yàn)?zāi)康那非逦孰y以確定主要處理因素。需注意如下問(wèn)題：(1)抓住實(shí)驗(yàn)研究中的主要處理因素：主要處理因素通常是在本人或他人提出的某些假設(shè)的基礎(chǔ)上，根據(jù)研究目的的需要與實(shí)施的可能性而確定。(2)找出研究中的非處理因素并加以控制：科學(xué)研究中除確定的處理因素外，凡是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的其他因素均須明確，這些因素被稱(chēng)為非處理因素，或稱(chēng)混雜因素。非處理因素可產(chǎn)生混雜效應(yīng)，影響處理因素效應(yīng)的對(duì)比和分析。(3)處理因素的標(biāo)準(zhǔn)化：處理因素的標(biāo)準(zhǔn)化，即如何保證處理因素在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程始終如一，保持不變，按同一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。施加于受試對(duì)象的處理因素的強(qiáng)度、頻率、持續(xù)時(shí)間及施加方法等，均應(yīng)通過(guò)查閱文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)確定其最佳條件，并使之在整個(gè)研究中相對(duì)固定。如處理因素是細(xì)胞因子，須正確選擇批號(hào)，且分裝儲(chǔ)存方法、施加處理方式、劑量及時(shí)間等均應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化和相對(duì)固定化。一、實(shí)驗(yàn)中的主要處理因素實(shí)驗(yàn)研究中主要處理因素的選擇與確定對(duì)研究結(jié)果的意義至關(guān)重要。確定主要處理因素通?；诒救嘶蛩颂岢龅募僭O(shè)，并根據(jù)研究目的的需要與實(shí)施的可能性而決定。例如：1920年加拿大青年醫(yī)生班廷基于德國(guó)籍俄羅斯裔學(xué)者明科夫斯基提出的“胰腺能分泌某種抗糖尿病物質(zhì)”假說(shuō)，以胰腺分泌物為主要處理因素，探索胰腺分泌物中抗糖尿病物質(zhì)的分離并研究其治療糖尿病的效應(yīng)，最終在生化專(zhuān)家柯利普幫助下獲得可用于臨床治療的胰島素，并首次成功治療一位14歲患兒。班廷等人因此獲得1923年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。如何抓住主要因素——首先熟悉所研究領(lǐng)域的相關(guān)信息和本人前期研究工作的發(fā)現(xiàn)，通過(guò)大量閱讀文獻(xiàn)，為確定主要處理因素奠定基礎(chǔ)。同時(shí)，研究者還應(yīng)根據(jù)研究項(xiàng)目的目的不同，以及人力、物力和時(shí)間的限制，抓住主要因素，合理選擇受試對(duì)象，控制非處理因素對(duì)處理因素效應(yīng)的影響。二、單因素與復(fù)因素根據(jù)施加于受試對(duì)象的處理因素的多少，可將實(shí)驗(yàn)研究分為單因素研究（如觀察單一藥物療效）與復(fù)因素研究（同一實(shí)驗(yàn)中施加一個(gè)以上處理因素）。例如：某研究觀察低氧環(huán)境下基質(zhì)金屬蛋白酶一9對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，低氧環(huán)境和基質(zhì)金屬蛋白酶一9即為實(shí)驗(yàn)中的兩個(gè)處理因素，稱(chēng)為復(fù)因素研究。一次實(shí)驗(yàn)中的處理因素通常不宜過(guò)多否則須增加分組及受試對(duì)象的數(shù)目，實(shí)驗(yàn)條件難以控制且可能加大實(shí)驗(yàn)誤差；處理因素也不能過(guò)少單因素實(shí)驗(yàn)雖簡(jiǎn)單易行，但因處理過(guò)于單一，所能觀察到的結(jié)果和說(shuō)明的問(wèn)題較少，影響研究的廣度、深度和效率，使研究結(jié)論受到限制。解決對(duì)策是，增加處理因素水平。例如：在研究某藥對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲行為的影響時(shí)，將藥物分為大、中、小劑量組，觀察不同劑量藥物對(duì)受試對(duì)象的影響，可有效擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)結(jié)果的信息量。處理因素?cái)?shù)量與不同處理水平之間可有多種組合方式，包括單因素單水平、單因素多水平、多因素單水平和多因素多水平。研究人員宜根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)合理的實(shí)驗(yàn)方案。1．單因素單水平（表3-1）表3-1細(xì)菌脂多糖對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素Y分泌的影響2．單因素多水平（表3-2）表3-2孕激素對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶一9表達(dá)的影響3．多因素單水平（表3-3）表3-3美托康對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用4．多因素多水平（表3-4）表3-4地塞米松抗過(guò)敏效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究三、處理因素與非處理因素科學(xué)研究中除處理因素外，其他能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素稱(chēng)為非處理因素，某些非處理因素也可產(chǎn)生與處理因素相似的效應(yīng)，從而可能掩蓋或混淆處理因素的作用。例如，擬研究雌激素、孕激素對(duì)妊娠早期子宮自然殺傷細(xì)胞(uterinenaturalkillercell，uNK)趨化因子產(chǎn)生的影響處理因素：雌激素和孕激素；受試對(duì)象：孕婦；對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾的因素——年齡、營(yíng)養(yǎng)、健康狀況實(shí)驗(yàn)操作因素（如細(xì)胞分離時(shí)間、方法等）培養(yǎng)液中常用的酚紅指示劑具有雌激素樣作用，可對(duì)上述實(shí)驗(yàn)處理因素造成干擾故應(yīng)選用無(wú)酚紅培養(yǎng)基進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)研究。再如，研究某種傳統(tǒng)藥物與化學(xué)藥物治療再生障礙性貧血病人的療效應(yīng)考慮的非處理因素有年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況等，如果兩種主要處理因素下的兩組病人的年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)等差異過(guò)大，則可能影響藥物療效的比較。對(duì)非處理因素的控制一般通過(guò)設(shè)立對(duì)照組而實(shí)現(xiàn)。每種處理因素均需設(shè)相應(yīng)對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間除處理因素不同外，其他條件須盡量一致。醫(yī)學(xué)研究中對(duì)照組設(shè)置的遵循原則：對(duì)等（除處理因素外，對(duì)照組要具備與實(shí)驗(yàn)組對(duì)等的非處理因素）同步（在整個(gè)研究進(jìn)程中對(duì)照}組與實(shí)驗(yàn)組始終處于同一空間和同一時(shí)間）專(zhuān)設(shè)（任何一個(gè)對(duì)照組均為相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組而專(zhuān)門(mén)設(shè)立）四、處理因素的標(biāo)準(zhǔn)化施加于受試對(duì)象的處理因素須在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持不變，全部實(shí)驗(yàn)條件須一致。如處理因素的施加方法、強(qiáng)度、頻率和持續(xù)時(shí)間等，均須通過(guò)查閱文獻(xiàn)或在預(yù)備實(shí)驗(yàn)中找出各自的合理?xiàng)l件，確定相對(duì)固定的條件和方法。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化處理因素，保證每個(gè)實(shí)驗(yàn)都按照統(tǒng)一進(jìn)行，減少因標(biāo)準(zhǔn)不一致造成的失敗或誤差。例如，為觀察某細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，應(yīng)盡量統(tǒng)一——細(xì)胞因子的廠家、批號(hào)、配制分裝及儲(chǔ)存方法，對(duì)選定的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)如侵襲實(shí)驗(yàn)、凋亡所用實(shí)驗(yàn)等應(yīng)確定實(shí)驗(yàn)方法，建立標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的操作流程，全部實(shí)驗(yàn)條件須保持一致。處理因素若是藥品，則應(yīng)規(guī)定藥品的名稱(chēng)、性質(zhì)、成分、批號(hào)、出廠日期、保存方法等。如研究接觸粉塵量與塵肺發(fā)病時(shí)間的關(guān)系，對(duì)接觸粉塵量這個(gè)因素可標(biāo)化為車(chē)間粉塵平均濃度乘以接觸時(shí)間；若處理因素是針灸，須規(guī)定所用針具的型號(hào)，針刺使用的手法、留針時(shí)間、行針時(shí)間和次數(shù)、穴位、每日針1次或隔日針1次、針幾次1個(gè)療程等；研究中如檢測(cè)臨床標(biāo)本，須首先制定標(biāo)本采集、處理和存放的標(biāo)準(zhǔn)，如取血及組織的時(shí)間、分離存放條件等，避免由于標(biāo)本處理?xiàng)l件不一致所導(dǎo)致的誤差。易犯的錯(cuò)誤：在研究過(guò)程中對(duì)處理因素的標(biāo)準(zhǔn)化不夠重視，研究中經(jīng)常更換不同廠家生產(chǎn)的細(xì)胞因子或單克隆抗體（生產(chǎn)廠家、批號(hào)不一致，生物制劑的活性可能各異）；臨床標(biāo)本的采集與處理缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的概念，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)混亂，難以判斷是標(biāo)本采集和處理不規(guī)范對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，或是處理因素所致的實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。第三節(jié)受試對(duì)象受試對(duì)象是處理因素施加的對(duì)象，亦稱(chēng)實(shí)驗(yàn)對(duì)象或研究對(duì)象。正確選擇受試對(duì)象是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。大多數(shù)醫(yī)學(xué)研究的受試對(duì)象是動(dòng)物或人，也可以是器官、細(xì)胞、分子或基因。醫(yī)學(xué)科研中，受試對(duì)象應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足兩個(gè)基本條件。(l)須對(duì)處理因素敏感：開(kāi)展相關(guān)研究制備動(dòng)物模型時(shí)，須擇敏感性高的動(dòng)物，還須注意年齡（月齡）、性別、體重、窩別、營(yíng)養(yǎng)狀況及生活環(huán)境等因素。(2)反應(yīng)須穩(wěn)定：例如為研究某藥對(duì)高血壓患者的降壓效果，宜選用Ⅱ期高血壓患者作為受試對(duì)象，因Ⅱ期高血壓患者本身血壓波動(dòng)較大，而Ⅲ期高血壓患者對(duì)藥物的敏感性低。受試對(duì)象應(yīng)診斷明確（依照國(guó)內(nèi)或國(guó)際統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)）、具有典型性臨床表現(xiàn)、病史記錄全面（心理狀況、情緒起落、病情程度、病程長(zhǎng)短、生活習(xí)慣、個(gè)人嗜好、飲食狀況、家族史等。一、人體人體是臨床科研中常選用的受試對(duì)象，以人體為研究對(duì)象的實(shí)驗(yàn)研究稱(chēng)為人體觀察或人體實(shí)驗(yàn)研究。人體觀察的受試對(duì)象為人——實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)須符合并通過(guò)生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的倫理審查，須針對(duì)研究目的制定受試對(duì)象人選及剔除原則，并保證臨床資料完整性。人體觀察實(shí)驗(yàn)往往需多方聯(lián)合協(xié)作，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)條件不一致，故在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)對(duì)各環(huán)節(jié)均制定詳盡的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。（一）倫理審查人體觀察在人類(lèi)征服傳染性疾病的過(guò)程中做出重要貢獻(xiàn)。隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展和人類(lèi)社會(huì)進(jìn)步，涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床試驗(yàn)項(xiàng)目的倫理學(xué)問(wèn)題成為學(xué)術(shù)界關(guān)注的焦點(diǎn)之一。人體觀察與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的最大區(qū)別在于前者須采取安全、可靠的方法，不能以損害人體健康為研究的代價(jià)，同時(shí)須遵守人道主義和倫理學(xué)基本原則1964年《赫爾辛基宣言》問(wèn)世，隨后，基于涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床試驗(yàn)的倫理審查，世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)修改的《赫爾辛基宣言》及國(guó)際醫(yī)學(xué)科學(xué)組織理事會(huì)和世界衛(wèi)生組織共同頒布的《涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究的國(guó)際倫理準(zhǔn)則》等，我國(guó)衛(wèi)生部于1998年頒布了《涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）》2007年衛(wèi)生部發(fā)布了《涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）》的通知充分體現(xiàn)了保護(hù)人的生命和健康、維護(hù)人的尊嚴(yán)、尊重和保護(hù)受試者權(quán)益的宗旨。《涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）》的審查原則主要包括：(1)尊重和保障受試者自主決定同意或不同意受試的權(quán)利，嚴(yán)格履行知情同意程序，不得使用欺騙、利誘、脅迫等不正當(dāng)手段使受試者同意受試，允許受試者在任何階段退出受試；(2)對(duì)受試者的安全、健康和權(quán)益的考慮必須高于對(duì)科學(xué)和社會(huì)利益的考慮，力求使受試者最大程度受益和盡可能避免傷害；(3)減輕或者免除受試者在受試過(guò)程中因受益而承擔(dān)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；(4)尊重和保護(hù)受試者的隱私，如實(shí)將涉及受試者隱私的資料儲(chǔ)存和使用情況及保密措施告知受試者，不得將涉及受試者隱私的資料和情況向無(wú)關(guān)的第三者或者傳播媒體透露；(5)確保受試者因受試受到損傷時(shí)得到及時(shí)免費(fèi)治療并得到相應(yīng)賠償；(6)對(duì)于喪失或者缺乏能力維護(hù)自身權(quán)利和利益的受試者（脆弱人群），包括兒童、孕婦、智力低下者、精神病人、囚犯以及經(jīng)濟(jì)條件差和文化程度很低者，應(yīng)當(dāng)予以特別保護(hù)。（二）受試對(duì)象入選原則1．診斷標(biāo)準(zhǔn)

人體觀察研究的受試者須采納國(guó)際或國(guó)內(nèi)公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)（權(quán)威性機(jī)構(gòu)頒布的標(biāo)準(zhǔn)、全國(guó)性專(zhuān)業(yè)學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)或某些權(quán)威著作的標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)），對(duì)有不同分型的疾病應(yīng)列出其分型（或分期、分度、分級(jí)）標(biāo)準(zhǔn)，即診斷標(biāo)準(zhǔn)原則上要遵循公認(rèn)、先進(jìn)、可行的原則，并應(yīng)注明診斷標(biāo)準(zhǔn)的名稱(chēng)、來(lái)源（包括原作者和修訂者）、制定時(shí)間及簡(jiǎn)要的說(shuō)明。2．排除標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)研究目的不同，還應(yīng)考慮某些應(yīng)予排除的因素，其標(biāo)準(zhǔn)各異。一般而言，進(jìn)行新藥臨床研究的病例排除標(biāo)準(zhǔn)，須考慮年齡、合并癥、婦女特殊生理期、病因、病型、病期、病情程度、病程、既往病史、過(guò)敏史、生活史、治療史、鑒別診斷等。3.剔除標(biāo)準(zhǔn)

(1)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)而被誤納入的病例和雖符合納入標(biāo)準(zhǔn)而納入后未曾服藥的病例；(2)觀察中受試者自行退出者；(3)醫(yī)生認(rèn)定受試者應(yīng)退出的病例，涉及——①受試者依從性差、符合納入標(biāo)準(zhǔn)而因某種原因未完成觀察的病例；②發(fā)生嚴(yán)重不良事件、并發(fā)癥和特殊生理變化而不宜繼續(xù)接受觀察的病例；③盲法研究中被破盲的病例；④未按觀察方案規(guī)定用藥的病例；⑤統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況處理，如發(fā)生不良反應(yīng)者應(yīng)計(jì)入不良反應(yīng)的統(tǒng)計(jì)。一般剔除的病例不得超過(guò)總病例數(shù)的5%，如超過(guò)10%則研究結(jié)論不可信。4．觀察臨床資料的完整性觀察表格的科學(xué)性、合理性及臨床研究資料收集的完整準(zhǔn)角與否，直接影響臨床研究質(zhì)量的好壞及成果的重要性。（三）人體實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的設(shè)計(jì)類(lèi)型描述性研究病例報(bào)告、病例分析、橫斷面研究等；分析性研究病例對(duì)照研究、隊(duì)列研究、臨床試驗(yàn)等。1．病例報(bào)告指通過(guò)對(duì)某種罕見(jiàn)病例進(jìn)行記錄和描述，為疾病的發(fā)病表現(xiàn)、機(jī)制及診冶提供詳盡的感性資料，從而可能形成某種新的假設(shè)。病例報(bào)告往往是識(shí)別新出現(xiàn)或不常見(jiàn)的疾病或疾病罕見(jiàn)表現(xiàn)的第一線(xiàn)索。許多疾病均通過(guò)病例報(bào)告而被發(fā)現(xiàn)，如艾滋病、軍團(tuán)病、孕婦服用沙利度胺所致新生兒先天畸形、口服避孕藥增加靜脈血栓栓塞的危險(xiǎn)等。2．橫斷面研究普查指對(duì)某地區(qū)或者某單位所有人員進(jìn)行全面調(diào)查，以了解該地區(qū)或該單位某種疾病的發(fā)病情況。抽樣調(diào)查指從被研究人群中隨機(jī)抽取一部分具有代表性的病例作為研究對(duì)象，描述這部分病例的患病情況。3．病例對(duì)照研究回顧性研究的一種方法，回顧病例組暴露因素，通過(guò)與對(duì)照組暴露因素進(jìn)行比較，研究這些暴露因素的某些指標(biāo)與該疾病發(fā)病率之間的關(guān)系。如研究某種化學(xué)因素或環(huán)境因素對(duì)腫瘤發(fā)病率的影響，通常需采用病例對(duì)照研究方法。4.隊(duì)列研究按照所研究人群是否暴露于某種因素，將受試對(duì)象分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，隨訪(fǎng)觀察兩組人群某病的發(fā)病率，判斷暴露因素與疾病發(fā)病率的關(guān)系。隊(duì)列研究可分為前瞻性隊(duì)列研究和回顧性隊(duì)列研究。5．臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)中的受試對(duì)象一般采用隨機(jī)化原則分為治療組和對(duì)照組，研究者根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康慕o予處理因素，并盡量控制非處理因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。臨床試驗(yàn)可分為——隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)、交叉試驗(yàn)、自身前后對(duì)照試驗(yàn)、非隨機(jī)同期對(duì)照試驗(yàn)和序貫試驗(yàn)等。二、動(dòng)物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是指醫(yī)學(xué)研究中以動(dòng)物作為受試對(duì)象的實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)生命科學(xué)研究不可或缺，已逐漸成為醫(yī)學(xué)各學(xué)科（如生理、病理、心理及藥物研發(fā)等）發(fā)展的基礎(chǔ)，推動(dòng)了諸多領(lǐng)域的突破性進(jìn)展。（一）動(dòng)物保護(hù)與倫理審查近20年來(lái)，人們對(duì)動(dòng)物福利及倫理日趨關(guān)注，許多國(guó)家通過(guò)了動(dòng)物福利法案，并成立“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)”，某些國(guó)際著名學(xué)術(shù)刊物已要求論文作者提供所在單位“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)”的審查和批準(zhǔn)。1988年我國(guó)頒布《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》2006年9月又制定并印發(fā)《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》總則中還提出善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，倡導(dǎo)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的“3R”原則：①Reduce，即減少每次實(shí)驗(yàn)中所需動(dòng)物數(shù)量；②Refine，善待動(dòng)物，盡量減少動(dòng)物所受痛苦和傷害；③Replace，即使用其他手段替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。（二）動(dòng)物的選擇為正確選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前須大量閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，以了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)知識(shí)。1．常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

醫(yī)學(xué)研究中常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、豬、牛、羊、地鼠、貓、獼猴、黑猩猩、馬、鹿等。2．選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般原則(1)遵循國(guó)際及我國(guó)相應(yīng)的動(dòng)物福利及倫理要求，嚴(yán)格執(zhí)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的國(guó)際通用“3R”原則。(2)生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)須選用與人的機(jī)能、代謝及疾病特點(diǎn)相似的動(dòng)物，利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)某些相近的特性，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)人類(lèi)疾病的發(fā)生、發(fā)展及規(guī)律進(jìn)行推斷和探索。例如，不同哺乳動(dòng)物，其機(jī)體各系統(tǒng)組成、組織結(jié)構(gòu)均存在許多相似點(diǎn)，其生命活動(dòng)的基本功能具有相近的特性。從進(jìn)化角度，猩猩和猴與人類(lèi)最接近，其在解剖學(xué)、組織器官功能、白細(xì)胞抗原及染色體帶型等方面與人類(lèi)非常相似，故選用這些動(dòng)物所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)于人類(lèi)，具有很強(qiáng)的說(shuō)服力，但這些動(dòng)物的研究成本昂貴。(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇中須充分利用不同品種、品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在的某些特殊反應(yīng)，選擇解剖、生理特點(diǎn)符合本實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物。例如：家兔對(duì)體溫變化十分敏感，宜選用作發(fā)熱、解熱及致熱原檢查實(shí)驗(yàn)；觀察避孕藥對(duì)排卵影響的實(shí)驗(yàn)宜選用兔、貓；以高膽固醇膳食飼喂兔、雞、豬、犬、猴等動(dòng)物，均可誘發(fā)高脂血癥或動(dòng)脈粥樣硬化，而猴和豬的心臟冠狀動(dòng)脈前降支還形成斑塊及大片心肌梗死，情況與人更為相似，故動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)多選用豬、猴及；家犬的胰腺、胃較小，宜用于胰腺摘除術(shù)及胃腸道生理的研究；大鼠無(wú)膽囊，不會(huì)嘔吐，故不能用于膽功能觀察；犬、貓、猴等動(dòng)物嘔吐反應(yīng)敏感，適宜用于嘔吐實(shí)驗(yàn)；對(duì)具有雌激素活性的藥物進(jìn)行避孕藥效研究，不能選用小鼠與大鼠。(4)首先選擇結(jié)構(gòu)、功能簡(jiǎn)單且能反映研究指標(biāo)的動(dòng)物。在能反映實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的情況下，宜盡量選用結(jié)構(gòu)功能簡(jiǎn)單的動(dòng)物，如被作為模式生物的果蠅，其生活史短（僅12天左右）、飼養(yǎng)簡(jiǎn)便、染色體數(shù)少（只有4對(duì)），同時(shí)具有較復(fù)雜的生命現(xiàn)象，不僅成為遺傳學(xué)研究的絕好材料，在抗感染免疫及腫瘤侵襲特性等研究中也具有廣泛應(yīng)用前景。(5)選擇適齡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許多疾病模型的建立對(duì)動(dòng)物年齡有要求，若選擇不當(dāng)，則不能成功建模。例如誘導(dǎo)免疫耐受，一般需使用胎鼠或幼齡鼠；慢性實(shí)驗(yàn)或觀察動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，應(yīng)選擇幼齡動(dòng)物；開(kāi)展老年醫(yī)學(xué)研究，通常選用代謝和功能反應(yīng)接近老年的老齡動(dòng)物。（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指專(zhuān)供醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、獸醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的科研、教學(xué)、醫(yī)療、鑒定、診斷、生物制品所用的動(dòng)物。其特點(diǎn)是——由人工飼養(yǎng)、繁育而成；所攜帶的微生物及寄生蟲(chóng)受到控制；遺傳背景明確或來(lái)源清楚。按微生物學(xué)要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4個(gè)等級(jí)：①I(mǎi)級(jí)，即普通動(dòng)物(conventionalani-nals，CV)微生物控制要求中級(jí)別最低的動(dòng)物，可用于教學(xué)示教及預(yù)實(shí)驗(yàn)，但須不存在可能傳染給人類(lèi)的各種疾病，如皮膚真菌、寄生蟲(chóng)、結(jié)核桿菌等；②Ⅱ級(jí)，即清潔動(dòng)物(cleanan-mals，CI)用于開(kāi)展一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，其除不帶有普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，還應(yīng)不攜帶可能危害動(dòng)物和干擾科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的病原體，如流行性腹瀉病毒、絲蟲(chóng)病、球蟲(chóng)病、蠕蟲(chóng)（除蛔蟲(chóng)外）病等；③Ⅲ級(jí)，即無(wú)特定病原體動(dòng)物(specificpathogen-freeanimals，SPF)動(dòng)物為剖官產(chǎn)或子宮切除產(chǎn)，均按純系要求進(jìn)行繁殖，在隔離環(huán)境下飼養(yǎng)，動(dòng)物體內(nèi)無(wú)致病菌，此類(lèi)動(dòng)物是目前國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，適用于所有科研實(shí)驗(yàn)；④Ⅳ級(jí)，即無(wú)菌動(dòng)物germ-freeanimals，GF)和悉生動(dòng)物(gnotobioticanimals)前者指在全封閉條件下飼養(yǎng)的純系動(dòng)物，采用當(dāng)前手段無(wú)法檢出任何病原體。后者又稱(chēng)已知菌動(dòng)物，指用與無(wú)菌動(dòng)物相同的方法飼養(yǎng)，但明確體內(nèi)所給予的已知微生物的動(dòng)物，一般將1～3種已知微生物植入無(wú)菌動(dòng)物體內(nèi)獲得。Ⅳ級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般用于具有特殊目的和要求的實(shí)驗(yàn)，如病原研究、宿主與微生物之間關(guān)系研究、抗腫瘤研究等。按照遺傳學(xué)特性要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4類(lèi)：①I(mǎi)類(lèi)即近交系，或稱(chēng)為純系其經(jīng)20代以上全同胞或親子交配而成，基因純合程度達(dá)98%以上，故動(dòng)物個(gè)體間在遺傳特征上高度一致，對(duì)處理因素反應(yīng)的離散性較小，實(shí)驗(yàn)組間可比性強(qiáng)，如常用于制備單克隆抗體的BALB/c小鼠屬近交系小鼠；②Ⅱ類(lèi)為突變系動(dòng)物指通過(guò)基因變異而具有某種遺傳缺陷的純系動(dòng)物，常用于制備疾病模型（如裸鼠、糖尿病小鼠、侏儒癥小鼠等），目前借助轉(zhuǎn)基因技術(shù)或基因敲除技術(shù)，可制備高表達(dá)特定基因或使特定基因缺陷的動(dòng)物，以觀察動(dòng)物發(fā)育及其生理功能改變；③Ⅲ類(lèi)為遠(yuǎn)交系動(dòng)物，又稱(chēng)封閉群是通過(guò)非近親交配方式進(jìn)行繁殖一定代次的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)群體，如我國(guó)昆明種小鼠多為采用隨機(jī)交配而成的遠(yuǎn)交系，大鼠遠(yuǎn)交系常用Wistar大鼠和SD大鼠；④Ⅳ類(lèi)為雜交群，或稱(chēng)異系雜交由不同品系間交配而產(chǎn)生。雜交一代動(dòng)物不僅遺傳背景清楚，且由于雜種優(yōu)勢(shì)，其適應(yīng)性強(qiáng)，反應(yīng)較均一，是使用極為廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。三、細(xì)胞細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，也是生命活動(dòng)的基本單位，在生物進(jìn)化中處于核心地位。細(xì)胞水平研究是最基本的實(shí)驗(yàn)研究模型。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)是以細(xì)胞作為受試對(duì)象的研究。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)主要內(nèi)容包括——從體內(nèi)分離細(xì)胞；借助細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)模擬體內(nèi)生理?xiàng)l件，使其在人工條件下生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代；以細(xì)胞模型研究細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等。細(xì)胞生物學(xué)行為主要研究——細(xì)胞周期、細(xì)胞分裂、細(xì)胞增殖與分化、細(xì)胞凋亡與壞死、細(xì)胞逆境適立、細(xì)胞間相互作用、物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞遷移及其相關(guān)信號(hào)通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)等，有利于更精確地了解生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、繁殖、運(yùn)動(dòng)、遺傳、變異、衰老和死亡等基本生命現(xiàn)象。以細(xì)胞為受試對(duì)象的研究具有如下特點(diǎn)：可體外操作；可直接觀察處理因素所致的效應(yīng)；可進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)生物學(xué)現(xiàn)象觀察；實(shí)驗(yàn)的安全性和可重復(fù)性好；尤其適合研究信號(hào)通路中信號(hào)分子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制。體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)研究存在一定局限性：①難以精確模擬機(jī)體內(nèi)環(huán)境、正常細(xì)胞的比例及細(xì)胞一細(xì)胞間的相互影響；②難以真實(shí)反映機(jī)體的整體調(diào)節(jié)；③培養(yǎng)方法可能影響細(xì)胞形態(tài)及功能，且實(shí)驗(yàn)操作易受各種因素干擾，故須嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，才能獲得可靠結(jié)果。細(xì)胞與細(xì)胞系的類(lèi)型：1．正常細(xì)胞與正常細(xì)胞系借助機(jī)械研磨、酶消化及磁珠分選等技術(shù)從正常人體組織器官分離目的細(xì)胞（如各種免疫細(xì)胞、不同來(lái)源的干細(xì)胞等）。除血細(xì)胞外，多數(shù)正常組織來(lái)源的細(xì)胞具有貼壁生長(zhǎng)、接觸生長(zhǎng)抑制等特點(diǎn)，且正常細(xì)胞有一定壽命，在體外傳代培養(yǎng)若干代后即會(huì)死亡。2．腫瘤細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞系目前已建立的細(xì)胞系中以腫瘤細(xì)胞系為最多。腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與研究在闡明癌癥發(fā)生發(fā)展機(jī)制及抗癌新藥研發(fā)中具有重要價(jià)值。體外細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行腫瘤研究具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)不受機(jī)體內(nèi)環(huán)境因素影響，從而避免個(gè)體差異，有利于探討各種物理、化學(xué)和生物因素對(duì)腫瘤細(xì)胞生命活動(dòng)的影響。(2)便于同時(shí)從細(xì)胞、分子與基因三個(gè)水平研究腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及癌變發(fā)生饑制。(3)能長(zhǎng)期傳代、保存，便于觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和遺傳行為的改變。(4)能快速篩選抗癌藥物，適宜進(jìn)行耐藥機(jī)制的研究。(5)研究周期較短，經(jīng)濟(jì)。體外培養(yǎng)存在缺點(diǎn)：長(zhǎng)期培養(yǎng)可使細(xì)胞生物學(xué)特性發(fā)生改變例如：黑色素瘤B16細(xì)胞系在體外多次傳代后，產(chǎn)黑色素能力及貼壁能力下降；NK92細(xì)胞系體外長(zhǎng)期傳代，其表達(dá)某些標(biāo)志性表面分子的能力降低甚至喪失，如從NKG-2D陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性，即喪失原有生物學(xué)特性，故應(yīng)特別注意細(xì)胞傳代的代數(shù)問(wèn)題。所獲結(jié)果并非完全代表體內(nèi)情況。3．原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞、細(xì)胞株經(jīng)特殊分離方法從胚胎、組織器官及外周血等處分離的細(xì)胞在體外培養(yǎng)，該類(lèi)細(xì)胞被稱(chēng)為原代細(xì)胞。相應(yīng)培養(yǎng)技術(shù)稱(chēng)為原代培養(yǎng)技術(shù)。離體時(shí)間越短，原代培養(yǎng)細(xì)胞性狀與體內(nèi)相似性越大，故將原代細(xì)胞作為受試對(duì)象時(shí)，應(yīng)注意處理因素和作用時(shí)間。4．細(xì)胞庫(kù)資源5．人工修飾的細(xì)胞四、分子DNA、RNA和蛋白質(zhì)是三種重要的生物大分子，是生命現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。以上述三種生物大分子為受試對(duì)象，研究其結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及調(diào)節(jié)，此乃揭示正?；虍惓ＩF(xiàn)象發(fā)生機(jī)制的重要途徑。（一）DNADNA是生物體的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，具有貯存和傳遞遺傳信息的作用。遺傳物質(zhì)的最小功能單位（DNA分子中含特定遺傳信息的核苷酸序列）稱(chēng)為基因單倍體細(xì)胞中全部基因?yàn)橐粋€(gè)基因組。（二）RNA細(xì)胞內(nèi)的信息一般按信息的儲(chǔ)存形式(DNA)、功能形式(RNA)到編碼蛋白質(zhì)的順序進(jìn)行傳遞，此即生物學(xué)的中心法則。（三）蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)組蛋白質(zhì)是經(jīng)mRNA翻譯而產(chǎn)生，一個(gè)細(xì)胞在特定生理或病理狀態(tài)下表達(dá)的全部蛋白質(zhì)種類(lèi)稱(chēng)為蛋白質(zhì)組(proteome)。蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要體現(xiàn)者，以其為受試對(duì)象的研究包括蛋白質(zhì)的時(shí)空分布、結(jié)構(gòu)、功能及其相互作用方式。疾病發(fā)生通常由蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能非常所致，故蛋白質(zhì)分子被視為治療人類(lèi)疾病和抗傳染病藥物的主要靶點(diǎn)。第四節(jié)檢測(cè)指標(biāo)（效果反應(yīng)）效果反應(yīng)是處理因素作用于受試對(duì)象所致的實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，是醫(yī)學(xué)研究的核心內(nèi)容。效果反應(yīng)須通過(guò)具體檢測(cè)指標(biāo)而表達(dá)，后者指可被儀器檢測(cè)或研究者感知的特征或現(xiàn)象，可通過(guò)定性或定量方式體現(xiàn)處理因素作用前后受試對(duì)象某些生理、病理或生化指標(biāo)的變化。合理的指標(biāo)選擇可體現(xiàn)——實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)科學(xué)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性。一、指標(biāo)選擇的原則檢測(cè)指標(biāo)的選擇須遵循客觀性、特異性、靈敏性和精確性等基本原則。某些效應(yīng)如采用單一指標(biāo)檢測(cè)、判斷結(jié)果，其可信度不足，往往采用至少兩種以上方法（如檢測(cè)細(xì)胞凋亡）。研究者應(yīng)根據(jù)研究的目的和擬揭示問(wèn)題的角度，選擇能說(shuō)明問(wèn)題的指標(biāo)。另外，還需注意指標(biāo)間的關(guān)聯(lián)性，避免相似指標(biāo)的堆積，造成不必要的時(shí)間、精力和財(cái)力的浪費(fèi)。（一）指標(biāo)的客觀性(l)主觀指標(biāo)：其來(lái)自觀察者或受試對(duì)象的主觀判斷或感受，例如觀察者對(duì)受試對(duì)象精神狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、異常行為等總體表現(xiàn)的評(píng)價(jià)以及受試對(duì)象對(duì)疼痛、眩暈、焦慮等主觀癥狀的感受和描述等。例如：檢查痛覺(jué)時(shí)，用針刺深度或壓強(qiáng)進(jìn)行定量，但什么深度發(fā)生疼痛仍有賴(lài)于受試者主觀感覺(jué)和敘述而判斷，故仍屬主觀指標(biāo)。(2)客觀指標(biāo)：其數(shù)據(jù)通過(guò)設(shè)備或儀器測(cè)定而獲得，能真實(shí)顯示效果反應(yīng)大小或性質(zhì)，其數(shù)據(jù)的真實(shí)性與所用儀器或設(shè)備的精密性有關(guān)，而不受人為主觀因素干擾。例如：應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)膜表面蛋白表達(dá)；定量PCR儀檢測(cè)基因；臨床上檢測(cè)血液生化指標(biāo)等。（二）指標(biāo)的靈敏度指標(biāo)靈敏度指處理因素的作用水平發(fā)生變化時(shí)，指標(biāo)效應(yīng)量的增減幅度。靈敏度大小一般根據(jù)檢測(cè)指標(biāo)所能正確反映的最小數(shù)量級(jí)或水平而確定。靈敏度高的指標(biāo)對(duì)外界反應(yīng)靈敏，能顯示處理因素的微小效應(yīng)，從而減少假陰性發(fā)生率，醫(yī)學(xué)科研中常用的聚合酶鏈反應(yīng)法、放射免疫分析法等，均具有很高靈敏度。靈敏度低的指標(biāo)則難以正確反映處理因素的效應(yīng)，易造成假陰性，故應(yīng)盡量選擇高靈敏性的指標(biāo)。（三）指標(biāo)的精確性指標(biāo)的精確性涉及兩重含義：①精密度，指同一現(xiàn)象重復(fù)觀察時(shí)，各次測(cè)定值與平均值的接近程度，即檢測(cè)指標(biāo)的可重復(fù)性，精密度常用變異系數(shù)或標(biāo)準(zhǔn)差表示，反映隨機(jī)誤差的大??；②準(zhǔn)確度，指測(cè)定值與真實(shí)值接近的程度，體現(xiàn)所觀察結(jié)果的真實(shí)程度，主要受系統(tǒng)誤差影響。理想的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)應(yīng)既準(zhǔn)確又精密，而首先保證準(zhǔn)確、可靠。（四）指標(biāo)的特異性為更好體現(xiàn)處理因素的效應(yīng)，所選擇的檢測(cè)指標(biāo)還應(yīng)具有特異性，即所選擇的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)能特異性反映某一特定現(xiàn)象，且不易受其他因素干擾。指標(biāo)的特異性越高，越能體現(xiàn)處理因素的作用效果。（五）指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性選擇檢測(cè)指標(biāo)時(shí)，還應(yīng)注意指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性，即檢測(cè)指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)?zāi)康膽?yīng)具有本質(zhì)的相關(guān)性，能正確反映處理因素的效應(yīng)。為使所選檢測(cè)指標(biāo)具有關(guān)聯(lián)性，研究者須充分了解和熟練掌握相關(guān)領(lǐng)域的背景知識(shí)，分析事物間相關(guān)程度，從而選擇關(guān)聯(lián)性高的檢測(cè)指標(biāo)。（六）指標(biāo)的穩(wěn)定性指標(biāo)的穩(wěn)定性是指用此指標(biāo)所觀察到的數(shù)據(jù)波動(dòng)幅度的大小，波動(dòng)幅度小，穩(wěn)定性好；波動(dòng)幅度大，穩(wěn)定性差。（七）指標(biāo)的可行性指標(biāo)的可行性包括兩個(gè)方面：①檢測(cè)指標(biāo)的設(shè)置應(yīng)盡可能明確易懂，指標(biāo)數(shù)據(jù)易于采集、計(jì)算，采集的數(shù)據(jù)須進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化處理，方便各項(xiàng)指標(biāo)的定量處理，盡量不采用實(shí)際操作中難以采集或處理的指標(biāo)；②獲得檢測(cè)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)方法和各項(xiàng)指標(biāo)的計(jì)算方法均須簡(jiǎn)便、科學(xué)、易于掌握。（八）指標(biāo)的可比性指標(biāo)的可比性，包括：①縱向可比性，指從時(shí)間上可通過(guò)檢測(cè)指標(biāo)來(lái)分析處理因素的實(shí)驗(yàn)效應(yīng)；②橫向可比性，指可通過(guò)檢測(cè)指標(biāo)分析比較各組處理因素的效果反應(yīng)。另外，檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)符合公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)，以保證指標(biāo)間的可比性。還須考慮選擇指標(biāo)的認(rèn)可性。還應(yīng)注意：(l)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集處理與保存：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中標(biāo)本的采集、處理及保存須嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化。如提取組織總RNA時(shí)，所采集的新鮮組織應(yīng)立即處理或置液氮中保存，所使用的實(shí)驗(yàn)用品須無(wú)RNA酶污染并經(jīng)高壓滅菌。(2)指標(biāo)的檢測(cè)方法應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要保證實(shí)驗(yàn)儀器、實(shí)驗(yàn)方法和所用試劑固定不變，盡量減少其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。尤其是對(duì)同一實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證時(shí)，若采用不同實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往出現(xiàn)顯著性差別。例如，臨床血小板計(jì)數(shù)試驗(yàn)中，若檢測(cè)標(biāo)本采用不同抗凝劑，則可能因抗凝劑促血小板聚集程度的不同而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果(3)多種檢測(cè)指標(biāo)相互補(bǔ)充：醫(yī)學(xué)科研中，由于單一指標(biāo)的局限性，往往難以全部體現(xiàn)處理因素的作用效應(yīng)，而需選用不同檢測(cè)指標(biāo)，以相互驗(yàn)證和互為補(bǔ)充。例如，臨床上采用多項(xiàng)指標(biāo)判斷肝功能。但強(qiáng)調(diào)多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)并非意味著所選擇的檢測(cè)指標(biāo)越多越好，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，按照指?biāo)選擇的基本原則確定合理的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。(4)檢測(cè)指標(biāo)的可靠性和穩(wěn)定性：確定檢測(cè)指標(biāo)后，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須對(duì)該指標(biāo)進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，以保證指標(biāo)的可靠性和穩(wěn)定性。二、指標(biāo)的種類(lèi)醫(yī)學(xué)科研所采用的檢測(cè)指標(biāo)繁多，應(yīng)用時(shí)須根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、指?biāo)性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行選擇。根據(jù)指標(biāo)所能反映的機(jī)體基本特征，可分為形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、免疫學(xué)、生理學(xué)等指標(biāo)。（一）形態(tài)學(xué)指標(biāo)判斷處理因素對(duì)受試對(duì)象影響，最直觀的檢測(cè)指標(biāo)就是形態(tài)學(xué)檢測(cè)，其通過(guò)肉眼或借助儀器設(shè)備觀察受試對(duì)象形態(tài)學(xué)改變而獲得結(jié)果，包括解剖學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)、醫(yī)學(xué)影像等指標(biāo)。形態(tài)學(xué)指標(biāo)能直觀測(cè)定受試對(duì)象大體水平、組織水平及細(xì)胞、亞細(xì)胞水平的變化，包括腫瘤瘤體大小、轉(zhuǎn)移灶多少、細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)化、蛋白質(zhì)分子的功能定位及組織與病理學(xué)改變等。（二）生化指標(biāo)生化指標(biāo)一般指機(jī)體的肝功能、腎功能、電解質(zhì)、血糖、血脂、蛋白質(zhì)及各種酶類(lèi)等的檢測(cè)。受試對(duì)象生化指標(biāo)改變，代表其相應(yīng)組織或細(xì)胞功能狀態(tài)的變化，如轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定與肝功能的關(guān)系，肌酐和尿素氮水平與腎功能的關(guān)系等。實(shí)驗(yàn)研究中須根據(jù)研究目的和受試對(duì)象不同而選擇相應(yīng)生化指標(biāo)進(jìn)行效應(yīng)測(cè)定。（三）生物物理學(xué)指標(biāo)細(xì)胞生物物理學(xué)變化（如細(xì)胞電泳率、滲透脆性、膜流動(dòng)性等）能反映細(xì)胞生物學(xué)特性的變化。（四）免疫學(xué)指標(biāo)免疫學(xué)指標(biāo)是指基于抗原一抗體反應(yīng)而衍生的一系列檢測(cè)指標(biāo)（如ELISA、放射免疫、ELISPOT試驗(yàn)等），其特點(diǎn)是特異性及靈敏度高。此外，免疫學(xué)指標(biāo)還包括諸多細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)（如CTL功能檢測(cè)等）。（五）生理指標(biāo)生理指標(biāo)種類(lèi)較多，包括體溫、脈搏、呼吸、血壓和肺活量等。檢測(cè)生理學(xué)指標(biāo)是揭示人體和動(dòng)物生理及病理現(xiàn)象的重要手段。根據(jù)處理因素作用于受試對(duì)象所產(chǎn)生的效應(yīng)而選擇檢測(cè)指標(biāo)，通常需與研究目的緊密關(guān)聯(lián)，僅選一個(gè)指標(biāo)并不能確認(rèn)相應(yīng)的受試效應(yīng)，往往需要不同指標(biāo)的結(jié)合。三、處理與效應(yīng)處理因素指研究者根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖┘咏o受試對(duì)象的特定實(shí)驗(yàn)措施，而實(shí)驗(yàn)效應(yīng)指處理因素作用于受試對(duì)象后所引起的反應(yīng)，故處理因素和實(shí)驗(yàn)效應(yīng)間存在一定聯(lián)系，處理因素水平的變化往往引起實(shí)驗(yàn)效應(yīng)指標(biāo)的改變。研究者須正確處理處理因素與效應(yīng)間的關(guān)系，才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)合理性。在醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中，研究者須通過(guò)查閱文獻(xiàn)及進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定處理因素的合理用量。第五節(jié)實(shí)驗(yàn)誤差和誤差的控制在醫(yī)學(xué)科研實(shí)踐中，由于各種非處理因素的影響，實(shí)驗(yàn)所獲結(jié)果往往會(huì)偏離客觀事實(shí)，即測(cè)量值與真實(shí)值間存在一定差異，稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)誤差(error)。若將實(shí)驗(yàn)誤差控制在一定范圍內(nèi)，所獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍可反映客觀事實(shí)。因此，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須清楚地了解非處理因素產(chǎn)生的原因及過(guò)程，并采取相應(yīng)措施減少誤差產(chǎn)生，以保證結(jié)果的真實(shí)性和可靠性。一、誤差的意義及其性質(zhì)實(shí)驗(yàn)誤差難以避免，若其超過(guò)一定限度，所獲測(cè)量值與真實(shí)值間的差異增大，可造成實(shí)驗(yàn)假象，最終導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。因此，醫(yī)學(xué)研究中須意識(shí)到誤差的存在，并采取有效措施控制誤差，避免錯(cuò)誤結(jié)論的產(chǎn)生。根據(jù)誤差產(chǎn)生的原因和性質(zhì)，可將誤差分為兩類(lèi)：1．隨機(jī)誤差(randomerror)又稱(chēng)為偶然誤差(accidentalerror)，是一類(lèi)由隨機(jī)因素所致的誤差。醫(yī)學(xué)科研中隨機(jī)誤差不可避免，具有隨機(jī)、變化、不恒定的性質(zhì)，即使排除系統(tǒng)誤差后仍然存在，主要表現(xiàn)為抽樣誤差。2．系統(tǒng)誤差(systcmalicerror)又稱(chēng)可測(cè)誤差，指在一定實(shí)驗(yàn)條件下所呈現(xiàn)的一定規(guī)律的誤差，其產(chǎn)生原因通?？芍Ｏ到y(tǒng)誤差屬恒定誤差，具有方向性、系統(tǒng)性、規(guī)律性系統(tǒng)誤差(systcmalicerror)產(chǎn)生原因①儀器、試劑因素，即儀器未作校正或所測(cè)指標(biāo)的數(shù)值超出儀器所設(shè)定的測(cè)量范圍。試劑純度、批號(hào)、生產(chǎn)廠家等不同；②方法因素，即所選擇的實(shí)驗(yàn)方法不當(dāng)或方法本身有缺陷；③條件因素，即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的條件不同，如實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度、通風(fēng)條件等不同；④人為因素，研究者未按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。另外，不同研究者的技術(shù)水平、經(jīng)驗(yàn)、操作習(xí)慣及標(biāo)準(zhǔn)掌握各異，也可能導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生。系統(tǒng)誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響較恒定，有一定規(guī)律，其大小和方向從理論上可測(cè)量。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中，應(yīng)設(shè)法消除系統(tǒng)誤差的影響，對(duì)不能排除的系統(tǒng)誤差，研究者應(yīng)對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)記錄，估計(jì)其影響程度，以供結(jié)果分析時(shí)參考。例如：臨床上應(yīng)用常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELLSA)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，實(shí)驗(yàn)材料和操作（如板的包被、單克隆抗體制備、酶標(biāo)記物制備等）可導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果的誤差，出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。這種誤差可測(cè)量，對(duì)結(jié)果的影響較恒定，可通過(guò)嚴(yán)格排查而搞清楚產(chǎn)生的原因，屬系統(tǒng)誤差。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，ELISA技術(shù)極易受多因素（如孔與孔間交叉污染、加試劑的不均一性、實(shí)驗(yàn)程序以及儀器故障等）的影響，而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。這種誤差是隨機(jī)出現(xiàn)，不可預(yù)測(cè)，屬隨機(jī)誤差。隨機(jī)誤差與系統(tǒng)誤差并非截然分開(kāi)、固定不變，二者在一定條件下可相互轉(zhuǎn)換。例如，某廠生產(chǎn)的一批sysmexK-4500血液分析儀，若其中一臺(tái)儀器所測(cè)得的白細(xì)胞數(shù)值偏低，對(duì)于這一批血液分析儀來(lái)說(shuō)，此現(xiàn)象屬隨機(jī)誤差；但若研究者使用這臺(tái)儀器進(jìn)行大量樣本血常規(guī)檢測(cè)，所獲白細(xì)胞數(shù)值大部分偏低，這一誤差則屬系統(tǒng)誤差。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差大于隨機(jī)誤差，應(yīng)分析誤差產(chǎn)生的原因，予以降低或消除，并采取一定措施預(yù)防。若系統(tǒng)誤差很小，可按隨機(jī)誤差處理。二、誤差的表現(xiàn)形式實(shí)驗(yàn)中常會(huì)出現(xiàn)各種各樣的誤差，若不加控制，則難以突出研究本身所尋求的差異。醫(yī)學(xué)研究中，誤差常表現(xiàn)為抽樣誤差、非均勻性誤差、條件誤差、順序誤差、估計(jì)誤差、感官誤差以及過(guò)失誤差等形式。1．抽樣誤差(samplingerror)

由于受試對(duì)象本身存在個(gè)體差異，研究時(shí)所抽取的樣本僅是總體觀察對(duì)象的一小部分，故樣本統(tǒng)計(jì)量與總體參數(shù)間或各樣本統(tǒng)計(jì)量間存在一定差異，這種由于個(gè)體差異所致的誤差稱(chēng)為抽樣誤差。生物間個(gè)體差異所引起的誤差有的難以控制，不可避免。即使抽取同齡、同性別的不同個(gè)體測(cè)量其血糖變化，所得測(cè)量值間必然存在一定差異。2．非均勻性誤差(heterogeneityerror)

指由于抽樣不均勻所致的誤差。醫(yī)學(xué)研究中，應(yīng)按照隨機(jī)原則對(duì)每個(gè)觀察對(duì)象進(jìn)行抽樣。若違反此原則，所獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果即易出現(xiàn)偏差。例如，研究?jī)煞N降壓藥物對(duì)高血壓病人的治療效果，選取某一時(shí)段門(mén)診和住院的高血壓患者作為受試對(duì)象，若將其任意分配到兩組，其中一組門(mén)診患者占多數(shù)，而另一組住院患者占多數(shù)。由于住院病人病情偏重，可能影響所在組的整體療效，則所獲治療效果很難反映真實(shí)療效。3．條件誤差(conditionalerror)

指實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于組間或組內(nèi)不同個(gè)體間實(shí)驗(yàn)條件不同而引起的誤差。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除處理因素外，還常受許多非處理因素的影響，如時(shí)間、季節(jié)、室內(nèi)溫度及濕度、儀器設(shè)置、操作用具、光照、營(yíng)養(yǎng)、心理狀態(tài)、飼養(yǎng)動(dòng)物的條件等。這些因素在組間或組內(nèi)的不同均可引起條件誤差，若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未正確控制、合理消除這些非處理因素的影響，則會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷偏差。例如，研究者為觀察不同劑量鏈脲佐菌素(STZ)對(duì)SD大鼠糖尿病腎病模型形成的影響，隨機(jī)將50只雄性SD大鼠分為5組，1組為對(duì)照組，另外4組為實(shí)驗(yàn)組（模型組）；實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔一次性注射不同劑量STZ，對(duì)照組未采取任何處理措施，然后檢測(cè)不同劑量STZ處理各組動(dòng)物相應(yīng)指標(biāo)的變化，以此判斷STZ對(duì)SD大鼠糖尿病腎病模型形成的影響。此實(shí)驗(yàn)中，在制備大鼠模型時(shí)僅考慮了給實(shí)驗(yàn)組注射STZ，而忽視STZ系用枸櫞酸緩沖液配制。因此，在對(duì)實(shí)驗(yàn)組施加處理因素的同時(shí)，應(yīng)給對(duì)照組注射枸櫞酸緩沖液，消除枸櫞酸緩沖液對(duì)結(jié)果的干擾，由此得出的結(jié)論才具科學(xué)合理性。4．順序誤差(sequenceerror)

指總是按照固定的順序（時(shí)間／次序）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而引起的誤差。順序誤差易被人們忽視，但在某些情況下它也可對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成一定影響。例如，采用刮痧治療A、B、C、D四組不同病的病人，檢測(cè)相關(guān)生理代謝指標(biāo)變化。若研究者始終按A、B、C、D的順序，且操作者的手法始終由重到輕，則難以區(qū)分最終結(jié)果的差異是因疾病不同所致，還是因順序關(guān)系導(dǎo)致手法輕重不同所致。為控制順序誤差，研究者須在實(shí)驗(yàn)時(shí)采用隨機(jī)方法決定各組順序。5．估計(jì)誤差(errorofestimate)

指研究者對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)時(shí)產(chǎn)生的誤差，主要由于研究者心理偏向性或?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)能力不同所致。研究者往往具有使實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符的傾向，故當(dāng)研究結(jié)果和預(yù)期結(jié)果出現(xiàn)差異時(shí)，研究者會(huì)在心理上出現(xiàn)偏向性，從主觀上找出很多理由以維護(hù)自己期望的結(jié)果。另外，由于對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)能力不同造成的估計(jì)誤差也普遍存在。6．感官誤差指通過(guò)視覺(jué)、嗅覺(jué)、觸覺(jué)和聽(tīng)覺(jué)等感官來(lái)判定某項(xiàng)指標(biāo)時(shí)所引起的誤差。例如，用pH試紙比色確定所配制緩沖溶液的pH值時(shí)，由于研究者視覺(jué)差異而致判斷pH值的大小可能不同。7．過(guò)失誤差(grosserror)

指由于研究者失誤所致的誤差。能導(dǎo)致過(guò)失誤差的原因很多，例如研究者未通過(guò)查閱文獻(xiàn)等方式充分了解實(shí)驗(yàn)的背景，即可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)主觀片面考慮不周；或由于實(shí)驗(yàn)者進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄時(shí)馬虎大意，也會(huì)產(chǎn)生過(guò)失誤差。另外，還應(yīng)區(qū)分實(shí)驗(yàn)誤差和實(shí)驗(yàn)中發(fā)生的錯(cuò)誤，兩者是不同的。例如，由于儀器故障、操作錯(cuò)誤等造成的實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤可通過(guò)認(rèn)真檢查、仔細(xì)操作而得到完全控制和消除，但實(shí)驗(yàn)誤差則不可避免，故實(shí)驗(yàn)中應(yīng)盡量采取有效措施以降低和控制誤差。三、誤差的控制1．嚴(yán)格按隨機(jī)化原則抽樣和分組醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中，由于非處理因素造成的誤差在所難色，故在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須采用隨機(jī)化方法，使受試對(duì)象隨機(jī)均勻地分配到各個(gè)處理組及對(duì)照組，以避免各種非處理因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的影響。常用的隨機(jī)抽樣和分組方法包括單純隨機(jī)法和分層隨機(jī)法，研究者應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮褪茉噷?duì)象的數(shù)目和特點(diǎn)采用合適的隨機(jī)方法。只有做到真正隨機(jī)化才能達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?．合理設(shè)置對(duì)照組設(shè)置對(duì)照是為了最大限度地消除非處理因素的干擾。在選擇接受處理因素的實(shí)驗(yàn)組時(shí)，應(yīng)同時(shí)設(shè)立不施加處理因素的對(duì)照組，保證各組間除處理因素外，其他條件基本一致，以更好顯示處理因素的作用。合理設(shè)置對(duì)照組是控制各種非處理因素造成實(shí)驗(yàn)誤差的最重要手段之一。對(duì)照存在多種形式（如空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照、自身對(duì)照等），研究者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和目的合理設(shè)置對(duì)照組。3．保持組間均衡組間均衡是指各組受試對(duì)象除處理因素不同外，其他基礎(chǔ)參數(shù)、實(shí)驗(yàn)條件等應(yīng)均衡一致，這樣各組所獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果才具有可比性，才能正確反映處理因素的作用，結(jié)論具有說(shuō)服力。4.交叉的原則交叉的原則也是控制誤差的方法。例如，建立大鼠糖尿病模型時(shí)，須對(duì)實(shí)驗(yàn)組大鼠尾靜脈注射用枸櫞酸緩沖液配制的鏈脲佐菌素(STZ)，而對(duì)照組則須尾靜脈注射枸櫞酸緩沖液。若大鼠數(shù)量較多，通常需要兩個(gè)人同時(shí)進(jìn)行注射。但在進(jìn)行注射時(shí)，兩人應(yīng)交叉進(jìn)行，如各負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)組的一半和對(duì)照組的一半，避免由于個(gè)人注射技術(shù)的差異所致的實(shí)驗(yàn)誤差。5．實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)驗(yàn)證指通過(guò)在相同實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)同一實(shí)驗(yàn)生行獨(dú)立的多次重復(fù)，以驗(yàn)證所得結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。由于實(shí)驗(yàn)中的隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差不可避免，若僅進(jìn)行一次測(cè)量，則結(jié)果不能反映真實(shí)客觀情況，所產(chǎn)生誤差也較大。隨測(cè)量次數(shù)增多，有一部分誤差可相互抵消。6.選擇合適的樣本含量

實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)根據(jù)研究目的、檢測(cè)指標(biāo)的性質(zhì)等對(duì)所需的樣本含量進(jìn)行準(zhǔn)確估計(jì)。7．實(shí)驗(yàn)方法和操作流程的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)涉及的方法和流程進(jìn)行具體規(guī)定，制定明確標(biāo)準(zhǔn)。如在選擇受試對(duì)象時(shí)應(yīng)規(guī)定嚴(yán)格的納入、排除標(biāo)準(zhǔn)；處理因素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)保持不變；樣本收集及處理流程、試劑選用和配制、儀器使用標(biāo)準(zhǔn)和操作方法、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)等，均應(yīng)有具體規(guī)定，并在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程中嚴(yán)格遵守，不能自行更改。四、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制質(zhì)量控制指從事醫(yī)學(xué)科研的研究者為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性所采取的一系列措施，是控制實(shí)驗(yàn)誤差的一種手段。廣義上，質(zhì)量控制應(yīng)貫穿于實(shí)驗(yàn)的每一環(huán)節(jié)，包括實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施、資料搜集和整理、結(jié)論獲得等各階段。狹義上，質(zhì)量控制主要指對(duì)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)測(cè)量階段的控制。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，研究者往往僅對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并僅根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)作出處理因素是否有效的結(jié)論。但由于統(tǒng)計(jì)學(xué)差異僅說(shuō)明實(shí)驗(yàn)所獲數(shù)據(jù)間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并不說(shuō)明此差異是否是處理因素作用的結(jié)果，是否具有實(shí)際意義。實(shí)驗(yàn)每一個(gè)環(huán)節(jié)節(jié)都可能受某些未知因素的影響，若控制不好，所得結(jié)果可能出現(xiàn)較大誤差，甚至有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。因此，