腫瘤免疫治療技術(shù)-TIL細(xì)胞療法專題

1.黑色素瘤一項(xiàng)LN-144治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的II期的臨床試驗(yàn)，入組的轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者必須接受至少一次全身治療，這其中包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑，也包括BRAF抑制劑。一共62名患者療效可評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：LN-144治療的客觀緩解率(ORR)為38%，疾病控制率(DCR)為80%，其中2名患者完全緩解，23名患者部分緩解。3.晚期肺癌2.晚期結(jié)直腸癌在2016年發(fā)表的文獻(xiàn)中，一名轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者接受了靶向KRASG12D突變的TIL治療后，患者肺部的7個(gè)轉(zhuǎn)移灶中有6個(gè)明顯縮小，其中3個(gè)完全消失?；颊咴?年后仍然沒有疾病進(jìn)展。肺癌是全球發(fā)病和死亡最高的癌癥，盡管近年來靶向和免疫治療發(fā)展已經(jīng)讓肺癌越來越趨于慢性病的治療，但是對(duì)于一些患者來說，當(dāng)最后的保底藥物PD-1發(fā)生耐藥后，仍讓患者們感到恐慌。這項(xiàng)試驗(yàn)共有32名患者參加，最終有16名患者接受TILS治療，其中12名患已超過一年。另一名患者的緩解即將得到確認(rèn)。4.晚期宮頸癌一項(xiàng)LN-145用于晚期宮頸癌的II期臨床試驗(yàn)，數(shù)據(jù)最亮眼。這項(xiàng)臨床試驗(yàn)入組的大多為二至三種治療失敗的晚期宮頸癌患者，屬于難治性病例，一共27名患者療效可評(píng)價(jià)。疾病控制率(DCR)為85%，其中3名患者腫瘤完全消失，9名患者腫瘤明顯縮小。5.轉(zhuǎn)移性乳腺癌KIAA0368，CADPS2和CTSB)的TILs，治療22個(gè)月后，患者腫瘤完全消失，且4年Medicine)雜志上。二、目前腫瘤免疫治療可以分為兩大類：一類是免疫檢查點(diǎn)抗體類藥物，用于解除腫瘤微環(huán)境對(duì)免疫的耐受和屏蔽作用，阻斷被屏蔽的免疫信號(hào)，讓免疫細(xì)胞保持對(duì)腫瘤產(chǎn)生攻擊的能力，治療方法多為針對(duì)PD-1、PD-L1、CTLA-4等靶點(diǎn)的小分子藥物和抗體藥物。二是過繼T細(xì)胞療法(adoptiveT-celltherapy，ACT)，也就是我們常說的免疫T，TCR-T，TIL(腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞)等療法在不同層面上解決了T細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí)別性難題，逐漸在臨床試驗(yàn)中體現(xiàn)出優(yōu)異的療效。1、什么是TIL細(xì)胞？TIL(TumorInfiltratingLymphocytes，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞)是一種從腫瘤組織中分離出的浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞。這些淋巴細(xì)胞中有部分是針對(duì)腫瘤特異性突變抗原的T細(xì)胞，是深入到敵軍內(nèi)部打擊能力最強(qiáng)的免疫細(xì)胞，被認(rèn)為是一種機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)。2、什么是TIL細(xì)胞療法？TIL細(xì)胞療法是指從腫瘤組織中分離腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞，在體外培養(yǎng)和大量擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的療法。TIL療法的效應(yīng)細(xì)胞是經(jīng)過天然選擇與富集，腫瘤特異性T細(xì)胞比例高且多樣性豐富的群體，與CAR-T細(xì)胞療法和PD-1/PD-L1抗體相比，具有多靶點(diǎn)、腫瘤趨向和浸潤(rùn)能力強(qiáng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。三、TIL免疫療法的具體步驟與流程是什么呢？1.我們得到病人的腫瘤組織塊，其中混雜著體積較大的腫瘤細(xì)胞以及體積小而圓的T淋巴細(xì)胞;2.腫瘤樣本被運(yùn)送到專有的GMP設(shè)施，在那里TIL被分離并繁殖，將不同種類的T淋巴細(xì)胞在細(xì)胞板上克隆化，并加入高濃度的IL-2來選擇培養(yǎng)，在三周內(nèi)產(chǎn)生數(shù)十億TIL。四、TIL細(xì)胞與其他細(xì)胞的不同3.在IL-2的刺激下不同種類的T淋巴細(xì)胞都得到了克隆擴(kuò)增，形成了細(xì)胞群;4.用病人的腫瘤細(xì)胞和擴(kuò)增后的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，凡是能夠發(fā)生殺瘤效應(yīng)的T淋巴細(xì)胞群作為陽性TIL群留下，其余的丟棄;5.用負(fù)載了腫瘤特異性抗原的樹突狀細(xì)胞(DC)進(jìn)一步擴(kuò)增培養(yǎng)腫瘤特異性的TIL;6.患者開始一周的預(yù)處理治療(清髓)以準(zhǔn)備接受TIL。TIL產(chǎn)品作為一次性療法使用，在TIL輸注后立即接受多達(dá)6劑白細(xì)胞介素2(IL-2)，來支持患者體內(nèi)TIL的生長(zhǎng)和激活。K2.TIL細(xì)胞來自于腫瘤組織內(nèi)部，有60%以上能識(shí)別腫瘤細(xì)胞，有很強(qiáng)的靶向性。3.TIL細(xì)胞殺傷力高，比LAK強(qiáng)50-100倍。4.宿主處于免疫抑制狀態(tài)，反而有利于增強(qiáng)TIL的殺傷作用，適合與放化療聯(lián)用。5.TIL細(xì)胞的擴(kuò)增能力比LAK細(xì)胞強(qiáng)。6.采用定向篩選技術(shù)后，TIL的療效顯著增強(qiáng)，且通常只需要注射一次。五、TIL和老一代細(xì)胞免疫療法的不同乍一看，TIL療法和魏則西用過被國(guó)家叫停的CIK療法很像，這兩者有何區(qū)別？它們都屬于細(xì)胞免疫療法，基本都是從患者身上提取免疫細(xì)胞，體外擴(kuò)增，然后輸回去。但TIL和老一代細(xì)胞免疫療法，比如CIK，有兩個(gè)非常重要的區(qū)別：1.1.免疫細(xì)胞來源不同，TIL的免疫細(xì)胞來自于腫瘤組織，而CIK來自血液。腫瘤里分離出的免疫細(xì)胞，有60%以上能識(shí)別腫瘤，而血液里面分離的免疫細(xì)胞，這個(gè)比例不到0.5%。不能識(shí)別癌細(xì)胞的免疫細(xì)胞，對(duì)患者來說沒用。相比從血液里面分離細(xì)胞，提取新鮮腫瘤組織，從中分離TIL在技術(shù)上難很多，也是為啥很多人明知TIL更好，卻還持之以恒推銷CIK的原因。2.新一代TIL療法增加了定向篩選過程，確保只擴(kuò)增識(shí)別腫瘤細(xì)胞的免疫細(xì)胞。TIL不僅分離出的免疫細(xì)胞更對(duì)口，而且擴(kuò)增的時(shí)候會(huì)再篩選，確保只留下針對(duì)癌癥的免疫細(xì)胞。以上兩點(diǎn)區(qū)別，造成TIL療法中輸回的是大量專門針對(duì)癌細(xì)胞的免疫細(xì)胞，而CIK輸回的細(xì)胞雖然也不少，但多數(shù)是打醬油的。六、TIL細(xì)胞療法與其它新的免疫療法的不同1.CAR-T：CAR-T細(xì)胞療法是指將經(jīng)過設(shè)計(jì)的CAR-T細(xì)胞可在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)生長(zhǎng)，達(dá)到數(shù)十億之多將擴(kuò)增后的CAR-T細(xì)胞注入到患者體內(nèi)，注入之后的T細(xì)胞也會(huì)在患者體內(nèi)增殖，并殺死具有相應(yīng)特異性抗原的腫瘤細(xì)胞。CAR是一種蛋白質(zhì)受體，可使T細(xì)胞識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的特定蛋白質(zhì)(抗原)，表達(dá)CAR的T細(xì)胞可識(shí)別并結(jié)合腫瘤抗原，進(jìn)而攻擊腫瘤細(xì)胞。這種表達(dá)CAR的T細(xì)胞被稱為CAR-T。CAR-T對(duì)白血病和B細(xì)胞淋巴瘤的效果好，對(duì)實(shí)體瘤的效果不盡如意，主要是缺少理想的靶標(biāo)。理想的目標(biāo)抗原是僅在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的腫瘤特異性抗原。不幸的是腫瘤表達(dá)的大多數(shù)抗原不具備腫瘤特異，因此大多數(shù)的CAR都以腫瘤相關(guān)性抗原作為靶點(diǎn)，但這往往會(huì)導(dǎo)致“脫靶”的可能性。2.TCR療法：T細(xì)胞受體 (TCR)是指，將患者體內(nèi)的普通T細(xì)胞分離出來，利用基因工程技術(shù)引入新的基因，使轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞表達(dá)能夠識(shí)別癌細(xì)胞的TCR，回輸?shù)交颊唧w內(nèi)從而殺死腫瘤細(xì)胞的治療方法。TCR的作用機(jī)制是向普通T細(xì)胞中引入新的基因，使得新的T細(xì)胞能夠表達(dá)TCR從而有效識(shí)別腫瘤細(xì)胞，引導(dǎo)T細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞。TCR能靶向源自突變的腫瘤新生抗原，腫瘤新生抗原對(duì)腫瘤本身具有非常特異性的優(yōu)勢(shì)，減輕了脫靶識(shí)別的危險(xiǎn)。但是TCR工程改造存在一定的問題。首先，T細(xì)胞內(nèi)源性的TCR仍然存在，抑制了表面表達(dá)和產(chǎn)生錯(cuò)配假體TCR，導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因TCR功能的下降，有可能導(dǎo)致自身反應(yīng)或/和移植物抗宿主病(GVHD)。其次，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因隨機(jī)整合，非病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)例如“睡美人”轉(zhuǎn)座系統(tǒng)也會(huì)存在至少半隨機(jī)基因整合，帶來安全性問題。3.TIL療法與CAR-T和TCR細(xì)胞療法的區(qū)別在于，T細(xì)胞不需要經(jīng)過基因工程的改造。TIL療法由靶向癌細(xì)胞中多種抗原的T細(xì)胞組成，因此可以通過多個(gè)靶點(diǎn)激發(fā)對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性反應(yīng)。而CAR-T和TCR細(xì)胞療法通常只能靶向一個(gè)抗原，這讓癌細(xì)胞可能更容易對(duì)它們產(chǎn)生抗性。目前，TCR和CAR-T療法在治療實(shí)體瘤方面進(jìn)展有限，而TIL療法已經(jīng)在多種癌癥類型中產(chǎn)生了可喜的療效。七、TIL免疫療法的優(yōu)勢(shì)1.針對(duì)性地殺死癌細(xì)胞利用腫瘤殺傷性TIL淋巴細(xì)胞進(jìn)行癌癥免疫治療具有特異性，針對(duì)性殺死癌細(xì)胞，腫瘤病灶明顯縮小。定向篩選過程，確保只擴(kuò)增識(shí)別腫瘤細(xì)胞的免疫細(xì)胞。2.抗復(fù)發(fā)性強(qiáng)抗復(fù)發(fā)性強(qiáng)，對(duì)于手術(shù)后殘存腫瘤細(xì)胞的清除，對(duì)于手術(shù)后抗復(fù)發(fā)性與轉(zhuǎn)移治3.適應(yīng)多種實(shí)體腫瘤適應(yīng)癥廣，對(duì)原發(fā)腫瘤、轉(zhuǎn)移灶均有明顯療效。體外實(shí)驗(yàn)后回輸，安全性高，回輸次數(shù)少，副作用小。胃癌肺癌肝癌乳腺癌腎癌食道癌子宮頸癌膽管癌卵巢癌腦瘤黑色素瘤!這些免疫細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)后，重新注入到患者體內(nèi)。同時(shí)，研究團(tuán)隊(duì)聯(lián)合使用了免疫增強(qiáng)藥物白細(xì)胞介素2和另一種“明星抗癌藥”PD-1抑制劑Keytruda，Keytruda即屬于另一種免疫療法免疫檢查點(diǎn)阻斷，在某些癌癥中有顯著的效果?，F(xiàn)在，大量的研究已經(jīng)證實(shí)腫瘤細(xì)胞會(huì)通過產(chǎn)生一些逃蛋白來偽裝自己，如PD-L1和CTLA-4剎車分子，抑制免疫細(xì)胞的反應(yīng)。因此，很多科學(xué)家對(duì)于TIL療法和PD-1