SDS尿蛋白及本周氏電泳的意義

SDS尿蛋白及本周氏電泳的意義第1頁(yè)/共38頁(yè)腎單位的生理結(jié)構(gòu)和各類(lèi)生理蛋白2百萬(wàn)個(gè)腎單位每天過(guò)濾180升的血漿同時(shí)產(chǎn)生大約1.5升的尿液。腎小管的廢棄物排放

最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白腎小球過(guò)濾白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白第2頁(yè)/共38頁(yè)尿里的蛋白在生理學(xué)角度講，正常的人的尿蛋白量小于150mg/24

h(大約在100mg/L)主要的蛋白是白蛋白(少于30mg/L)病理上的腎功能疾?。寒?dāng)尿蛋白量大于150mg/24

h而此時(shí)，尿蛋白的成分也是不定的。第3頁(yè)/共38頁(yè)尿蛋白含量增加的原因間歇性的

生理因素：食高蛋白飲食后，精神激動(dòng)、劇烈運(yùn)動(dòng)、長(zhǎng)時(shí)間受寒，站立過(guò)久,病理性的：

●腎前性（溢出性）●腎性●腎后性●腎小球損傷●腎小管損傷●混合性●選擇性●非選擇性第4頁(yè)/共38頁(yè)>67kDa<67kDa溢出性蛋白尿血漿中相對(duì)分子質(zhì)量較小或陽(yáng)性電荷蛋白異常增多經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)，超過(guò)腎小管重吸收能力形成蛋白尿。腎小球?yàn)V過(guò)、腎小管重吸收均正常。第5頁(yè)/共38頁(yè)6常見(jiàn)蛋白種類(lèi)及疾病

游離輕鏈見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤

?2微球蛋白見(jiàn)于淋巴組織增生綜合征

溶菌酶見(jiàn)于部分急性粒細(xì)胞白血病

血紅蛋白溶血性疾病,血型不合輸血

α1酸性糖蛋白

見(jiàn)于支氣管肺癌

肌紅蛋白擠壓傷,心肌梗死……腎前性(溢出)蛋白尿第6頁(yè)/共38頁(yè)腎后性蛋白尿

來(lái)源于腎小管代謝產(chǎn)生的、組織破壞分解的、炎癥或藥物刺激泌尿系統(tǒng)分泌的蛋白質(zhì)，進(jìn)入尿液而形成的蛋白尿。第7頁(yè)/共38頁(yè)腎性蛋白尿腎小球性蛋白尿

腎小球?yàn)V過(guò)膜因炎癥、免疫、代謝等因素?fù)p傷后濾過(guò)膜孔徑增大、斷裂和（或）靜電屏障作用減弱。

根據(jù)濾過(guò)膜損傷程度及尿蛋白的組分，尿蛋白分為2類(lèi)：（1）選擇性蛋白尿（selectiveproteinuria）：相對(duì)分子質(zhì)量中等的清蛋白為主

（2）非選擇性蛋白尿（non-selectiveproteinuria）：以相對(duì)分子質(zhì)量較大和中等的蛋白質(zhì)同時(shí)存在為主。反映腎小球毛細(xì)管壁有嚴(yán)重?cái)嗔押蛽p傷。腎小管性蛋白尿

腎小管在受到感染、中毒損傷或繼發(fā)于腎小球疾病時(shí)，因重吸收能力降低或抑制，而出現(xiàn)的以相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白為主的蛋白尿。第8頁(yè)/共38頁(yè)腎小球過(guò)濾大分子量蛋白（主要為＞67kDa）無(wú)法透過(guò)腎小球進(jìn)入腎小管其他決定各種蛋白被過(guò)濾的因素:分析形狀,帶電量,血漿濃度.還有一些血液動(dòng)力學(xué)因素可影響蛋白的過(guò)濾.第9頁(yè)/共38頁(yè)腎小球損傷原因糖尿病感染性損傷(細(xì)菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,單核白血球增多癥

,…)其他系統(tǒng)性疾病(自動(dòng)免疫系統(tǒng),癌癥,…)中毒現(xiàn)象(重金屬,藥物中毒,…)此時(shí),我們可以在尿蛋白中發(fā)現(xiàn)白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。第10頁(yè)/共38頁(yè)腎小管的再次吸收功能在腎小球中被過(guò)濾掉的小分子蛋白，分子量小于67

kDa,將會(huì)在腎小管內(nèi)被重新吸收(內(nèi)吞作用). 99%的在腎小球內(nèi)被過(guò)濾的蛋白,都將會(huì)被重新吸收利用.

例如,

18

g/24-h白蛋白將會(huì)被過(guò)濾掉;

30

mg/24-h白蛋白在人的尿液中被發(fā)現(xiàn).

第11頁(yè)/共38頁(yè)腎小管損傷腎小管損傷將會(huì)改變其對(duì)小蛋白分子的重新吸收能力(小于67

kDa的蛋白)產(chǎn)生原因遺傳原因(Fanconisyndrome)代謝性疾病(糖尿病,草酸中毒)免疫球蛋白單克隆擴(kuò)增(myeloma,Waldenstr?m)藥物作用(氨基甙類(lèi)抗生素)中毒(金屬中毒,氨基甙類(lèi))白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都將會(huì)在尿液中被找到。>67kDa<67kDa<67kDa>67kDa第12頁(yè)/共38頁(yè)混合性損傷混合性蛋白尿腎臟病變同時(shí)或相繼累及腎小球和腎小管時(shí)而產(chǎn)生的蛋白尿。各組分所占比例因病變損害部位不同而不一致。>67kDa<67kDa第13頁(yè)/共38頁(yè)尿液的收集和保存尿液收集:

-24小時(shí)尿

-晨尿中段

要注意是否為間歇性蛋白尿保存

-新鮮尿液 -4°C保存最多一周

-注意防腐，避免反復(fù)凍融（導(dǎo)致IgG濃度降低） -檢測(cè)前離心(10min3000rpm）第14頁(yè)/共38頁(yè)尿蛋白檢測(cè)初級(jí)分析是否有蛋白增加

-直接進(jìn)行總尿蛋白濃度測(cè)定

進(jìn)一步分析:蛋白尿類(lèi)型本周氏蛋白類(lèi)型特異蛋白定量第15頁(yè)/共38頁(yè)定量分析蛋白尿篩查

-溴酚藍(lán)試紙條檢測(cè)(>150-200mg/L):蛋白尿陽(yáng)性變藍(lán)，本周氏蛋白時(shí)會(huì)產(chǎn)生假陰性定量檢測(cè)方法

-比濁法（不建議使用） -建議采用比色法（焦性沒(méi)食子酚紅，考馬斯藍(lán)）第16頁(yè)/共38頁(yè)尿中總蛋白的定量分析無(wú)法檢測(cè)到低濃度的本周氏蛋白第17頁(yè)/共38頁(yè)特異蛋白測(cè)定免疫法定量測(cè)定腎小球性標(biāo)志蛋白:Albumin,IgG,Transferrin腎小管性標(biāo)志蛋白:b2microglobulin,RBP,a1microglobulin

如果需要更多的特異蛋白信息，需要更多的測(cè)試第18頁(yè)/共38頁(yè)尿蛋白電泳

提供更全面的蛋白信息第19頁(yè)/共38頁(yè)在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝膠上主要的尿蛋白電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類(lèi)蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類(lèi)蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW25kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C第20頁(yè)/共38頁(yè)5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa67KDa第21頁(yè)/共38頁(yè)腎小球性蛋白尿血清Glomerularproteins(>67kDa)腎小球性蛋白第22頁(yè)/共38頁(yè)腎小管性蛋白尿SerSerTubularproteins腎小管性蛋白(67kDa<)第23頁(yè)/共38頁(yè)臨床病例2:Lightchainmyeloma輕鏈性骨髓瘤4:MacroscopicHematuria肉眼血尿MW第24頁(yè)/共38頁(yè)5:OverloadProteinuriawithpolymerisedBJ本周氏蛋白多聚體

第25頁(yè)/共38頁(yè)非濃縮尿蛋白電泳的優(yōu)點(diǎn)1.可以直觀地反映出病人是腎小球受損還是腎小管受損，或者是小球小管均受損傷的混合型尿蛋白。2.操作簡(jiǎn)便、尿液無(wú)須濃縮，只需2個(gè)半小時(shí)即可出報(bào)告。3.對(duì)不愿意進(jìn)行腎穿檢查的病人,可作為替代實(shí)驗(yàn)。4.方法敏感，最小檢出限度為15mg/L。5.能得到尿蛋白剖像的電泳譜，便于比較和保存。6.兒童尤以腎小球病變?yōu)橹?直接檢測(cè)24h尿蛋白。7.對(duì)臨床不典型的患者及微量尿蛋白的患者的診斷及各種腎病在治療過(guò)程中的動(dòng)態(tài)分析具有很高的臨床價(jià)值。第26頁(yè)/共38頁(yè)本周氏Bence-Jones蛋白檢測(cè)第27頁(yè)/共38頁(yè)本周氏蛋白（Bence-JonesProteins,BJP)HenryBenceJones于1844年在一個(gè)骨髓瘤患者尿中發(fā)現(xiàn)的一種具有特殊凝溶性質(zhì)的蛋白該種蛋白40－60℃發(fā)生沉淀，加熱煮沸時(shí)溶解，冷卻后又沉淀。后被證明是單克隆的免疫球蛋白輕鏈二聚體。大多數(shù)骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白50~60℃室溫90~100℃第28頁(yè)/共38頁(yè)本周氏蛋白

漿細(xì)胞增生癥影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.....腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病第29頁(yè)/共38頁(yè)本周氏蛋白陽(yáng)性患者多表現(xiàn)為腎臟損害極易誤診為慢性腎炎輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中正常的輕鏈過(guò)剩慢性肝病、紅斑狼瘡等多克隆增殖性疾病伴隨輕鏈單一輕鏈第30頁(yè)/共38頁(yè)

本周氏蛋白免疫固定電泳方法

儀器：Sebia瓊脂糖凝膠電泳儀試劑：本周氏蛋白電泳試劑

方法：點(diǎn)樣，電泳，加抗體反應(yīng)，

條帶檢測(cè)ELP泳道:固定液GAM泳道：抗IgG.A.M重鏈抗血清K泳道：抗

輕鏈抗血清L泳道：抗

輕鏈抗血清Kfree

泳道：抗游離

輕鏈抗血清Lfree泳道：抗

游離輕鏈抗血清重鏈參考泳道復(fù)合輕鏈游離輕鏈第31頁(yè)/共38頁(yè)免疫球蛋白免疫球蛋白是機(jī)體的正常生理成分多克隆分類(lèi)重鏈：IgG、IgA、IgM

、IgD、IgE輕鏈：κ、λ10種類(lèi)型抗復(fù)合輕鏈抗血清結(jié)合位置抗游離輕鏈抗血清結(jié)合位置，不能與完整抗體的輕鏈結(jié)合第32頁(yè)/共38頁(yè)本周氏蛋白檢測(cè)結(jié)果解析游離kappa復(fù)合kappa游離lambda第33頁(yè)/共38頁(yè)

LambdaBenceJonesprotein(G,AorM)kappa

kappaBenceJones2differentlevelsofpolymerization第34頁(yè)/共38頁(yè)BenceJonessuspectedNoBenceJonessuspectedBenceJonessuspectedBencesJonessuspectedBenceJones?BenceJo