蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)辦法原理及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

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1、目前農(nóng)藥在蔬菜中殘留的咨詢題

1.1、農(nóng)藥是把“雙刃劍”，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化學(xué)屬性和對(duì)其使用別當(dāng)，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴(yán)峻超標(biāo)，嚴(yán)峻危害到廣闊人民群眾的健康。

1.2、在我國農(nóng)藥中，70%為有機(jī)磷農(nóng)藥，而在我國生產(chǎn)使用的有機(jī)磷農(nóng)藥中，70%為劇毒、高毒類，而且較多是禁止在蔬菜作物上使用的。

2、農(nóng)藥中毒事件常有報(bào)道，究其緣故

2.1、農(nóng)產(chǎn)品別按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、辦法或安全間隔期施藥，或施用別允許在蔬菜上使用劇毒、高毒類農(nóng)藥；

2.2、如今標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測(cè)定需要經(jīng)過有機(jī)溶劑提取、凈化和用大型分析儀器舉行，無法對(duì)便宜的蔬菜舉行隨時(shí)隨地或快速檢測(cè)而形成的監(jiān)管別到位。

3、農(nóng)藥分類：

3.1、礦物源農(nóng)藥

3.1.1、有效成分起源于礦產(chǎn)無機(jī)物和石油的農(nóng)藥。

3.1.2、代表有硫酸銅、硫磺、石硫合劑、磷化鋁、磷化鋅和石油乳劑等。

3.2、生物源農(nóng)藥

3.2.1、包括植物源農(nóng)藥和動(dòng)物源農(nóng)藥及微生物源農(nóng)藥。

3.2.2、植物類不有植物毒素、植物內(nèi)源激素、植物源昆蟲激素、拒食劑、引誘劑、驅(qū)避劑、絕育劑、增效劑、植物防衛(wèi)素、易株克生物質(zhì)等。

3.2.3、動(dòng)貨物源開辟的農(nóng)藥包括動(dòng)物毒素、昆蟲激素、昆蟲信息素和天敵等。

3.3、按作用方式分類

3.3.1、胃毒素農(nóng)藥（敵百蟲、敵敵畏、甲胺磷、馬拉硫磷）

3.3.2、觸殺性農(nóng)藥（對(duì)硫磷、敵敵畏、甲胺磷、馬拉硫磷）

3.3.3、內(nèi)吸性農(nóng)藥（樂果、甲胺磷、氧樂果、久效磷）

3.3.4、熏蒸性農(nóng)藥（溴甲烷、磷化鋁、敵敵畏）

3.3.5、特異性農(nóng)藥（乙烯利、毒霉素、滅幼脲）

4、目前所使用的農(nóng)藥按其化學(xué)結(jié)構(gòu)大致能夠分為以下幾類：

有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類、雜環(huán)類化合物、其他（苯氧羧酸類、脲類化合物）等。

A、有機(jī)磷類

敵敵畏、甲拌磷、樂果、對(duì)氧磷、對(duì)硫磷、喹硫磷、優(yōu)殺硫磷、敵百蟲、氧化樂果、磷胺、甲基嘧啶磷、馬拉硫磷、辛硫磷、亞胺硫磷、甲胺磷、地亞農(nóng)、甲基毒死蜱、毒死蜱、倍硫酸、殺撲磷、乙酰甲胺磷、巴胺磷、甲基對(duì)硫磷、殺螟硫磷、異柳磷、異柳磷等。

B、有機(jī)氯類

α-666、β-666、γ-666、δ-666、op-DDE、pp’-DDE、op’-DDD、pp’-DDT、op’-DDT、異菌脲、五氯硝基苯、林丹、乙烯菌核利、三氯殺螨醇、功夫、氯硝胺、百菌清、粉銹寧、甲氯菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等。

C、氨基甲酸酯類

涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、3-羥基呋喃丹、涕滅威、呋喃丹、甲萘威、葉蟬散、仲丁威、速滅威等。

d、擬除蟲菌酯類

聯(lián)苯菊酯、二氧苯醚菊酯、功夫菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、呋喃菊酯、芐呋菊酯、右旋丙烯菊等。

5、最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)

最大殘留限量（MaximumResidueLimit，MRL）

在農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許濃度，又稱最高殘留限量，以每千克農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的毫克數(shù)（毫克/千克）表示。

目的：操縱食品中過量農(nóng)藥殘留以保障食用者安全，對(duì)超標(biāo)的產(chǎn)品采取措施，即禁止食用。執(zhí)行和指導(dǎo)合理用藥，農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測(cè)超標(biāo)時(shí)，表明未按規(guī)定用藥。減少國際貿(mào)易糾紛，各國均制訂本國的MRL。

《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》標(biāo)準(zhǔn)

A、GB2763-2014，規(guī)定了387種農(nóng)藥最高殘留限量。國家標(biāo)準(zhǔn)作為一項(xiàng)加強(qiáng)農(nóng)藥治理的措施。

B、其中，針對(duì)蔬菜、水果、茶葉等鮮食農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)多發(fā)、易發(fā)咨詢題，新標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn)增了蔬菜、水果等鮮食農(nóng)產(chǎn)品的限量標(biāo)準(zhǔn)。水果農(nóng)藥殘留限量增加473項(xiàng)，蔬菜（包括食用菌）農(nóng)藥最大殘留限量增加431項(xiàng)。

6、高毒農(nóng)藥禁限用治理措施

6.1、農(nóng)業(yè)部、工業(yè)和信息化部、環(huán)境愛護(hù)部、國家工商行政治理總局和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局與2011年6月15日公布第1XXX號(hào)公告，決定對(duì)高毒農(nóng)藥采取進(jìn)一步禁限用治理措施。

6.2、停止受理苯線磷、地蟲硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷化鎂、磷化鋅、硫線磷、蠅毒磷、治螟磷、特丁硫磷、殺撲磷、甲拌磷、甲基異柳磷、克百威、滅多威、滅線磷、涕滅威、磷化鋁、氧樂果、水胺硫磷、溴甲烷、硫丹等22種農(nóng)藥新增田間試驗(yàn)申請(qǐng)、登記申請(qǐng)及生產(chǎn)許可證申請(qǐng)；停止批準(zhǔn)含有上述農(nóng)藥的新增登記證和農(nóng)藥生產(chǎn)許可證（生產(chǎn)批準(zhǔn)文件）。

6.3、撤銷氧樂果、水胺硫磷早柑橘樹，滅多威在柑橘樹、蘋果樹、茶樹、十字花科蔬菜，硫線磷在柑橘樹、黃瓜，硫丹在蘋果樹、茶樹，溴甲烷在草莓、黃瓜上的登記。

6.4、本公告公布前已生產(chǎn)產(chǎn)品的標(biāo)簽?zāi)軌騽e再更改，但別得接著在已撤銷登記的作物上使用。

6.5、自2011年10月31日起，撤銷（撤回）苯線磷、地蟲硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷化鎂、磷化鋅、硫線磷、蠅毒磷、治螟磷、特丁硫磷等10種農(nóng)藥的登記證、生產(chǎn)許可證（生產(chǎn)批準(zhǔn)文件），停止生產(chǎn)。

6.6、自20XX年10月31日起，停止銷售和使用。

依照以上事情，制定出有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測(cè)辦法，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)一成為十分必要的監(jiān)管措施。

7、農(nóng)藥殘留要緊檢測(cè)辦法有兩種：

7.1、群譜檢測(cè)法：

XXX譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。

群譜法（包括氣相群譜、液相群譜、氣質(zhì)聯(lián)用等）。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、準(zhǔn)確、定性定量；

缺點(diǎn)：成本高、操作復(fù)雜、時(shí)刻較長。

7.2、速測(cè)儀法：

速測(cè)儀法只能作為農(nóng)殘定性分析，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國操縱高毒農(nóng)藥殘留的一種有效辦法，也是目前國內(nèi)和我省應(yīng)用最廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)辦法。

A、速測(cè)儀法的要緊優(yōu)點(diǎn)：

1、該辦法具有快速方便、前處理簡便、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，適用于現(xiàn)場定性測(cè)定，特殊適合在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門開展快速檢測(cè)工作。

2、該辦法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜舉行粗篩，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜操縱在市場之外，幸免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。

B、速測(cè)儀法的要緊缺點(diǎn)：

1、酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)別穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不行，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右；

2、存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，別能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類不的劇毒農(nóng)藥；

3、別適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易浮現(xiàn)假陽性的農(nóng)產(chǎn)品。

8、速測(cè)儀的檢測(cè)辦法有兩種：

1、速測(cè)卡法（紙片法）

2、酶抑制率法（分光光度法）

9、兩種快速檢測(cè)辦法的技術(shù)原理

9.1、依照有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和身邊神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積存，妨礙正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒致死的原理而設(shè)計(jì)。

9.2、假如蔬菜中別含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯群劑反應(yīng)產(chǎn)生顏群。

9.3、假如蔬菜中含有能夠抑制乙酰膽堿的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就別能被水解，從而無顯XXX反應(yīng)。

9.4、在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯XXX劑，用此推斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。

10、速測(cè)卡法（紙片法）

1、試劑

1.1、固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測(cè)卡）。

1.2、pH7.5緩沖液溶液：分不取15.0g磷酸氫二鈉與1.59g無水磷酸二氫鉀用500mL蒸餾水溶解。

2、儀器

2.1、常量天平有條件配備37℃±2℃恒溫裝置。

3、分析步驟

3.1、整體測(cè)定法

3.1.1、選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見放碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，震搖50次，靜置2min以上。

3.1.2、取一片速測(cè)卡，用白群藥片沾取提取液，放置10min以上舉行預(yù)反應(yīng)，有條件時(shí)在37℃恒溫裝置中放置10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。

3.1.3、說速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min或用恒溫裝置3min，使紅XXX藥片與白XXX藥片疊合反應(yīng)。

3.1.4、每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一具緩沖液的空白對(duì)比卡。

3.2、表面測(cè)定法（粗篩法）

3.2.1、擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴緩沖溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。

3.2.2、取一片速測(cè)卡，說蔬菜上的液滴滴在白群藥片上。

3.2.3、放置10min以上舉行預(yù)反應(yīng)，有條件時(shí)在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。

3.2.4、將速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅XXX藥片疊合反應(yīng)。

3.2.5、每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一具緩沖液的空白對(duì)比卡。

結(jié)果判定：

1、結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。

2、與空白對(duì)比卡比較，白群藥片別變?nèi)夯蚵詼\藍(lán)XXX均為陽性結(jié)果。白XXX藥片變?yōu)樘焖{(lán)XXX或與空白對(duì)比卡相同，為陰性結(jié)果。

3、對(duì)陽性結(jié)果的樣品，可用其他分析辦法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

速測(cè)卡法（紙片法）注意事項(xiàng)

1、有點(diǎn)蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍(lán)群產(chǎn)物褪XXX的物質(zhì)，處理這類蔬菜時(shí)，別要讓其汁液太多釋放出來，別要剪得太碎，浸提時(shí)刻別易過長，必要時(shí)可采納整枝蔬菜浸提或采納表面測(cè)定法舉行測(cè)定。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也能夠采取整株（體）蔬菜浸提的辦法，減少群素的干擾。

2、試紙上的提取液別可太多而溢出試紙，亦別可太少而使反應(yīng)別徹底。

3、最好將每一批樣品處理好后一起加樣，一面時(shí)刻過長蒸干。

4、當(dāng)溫度條件低于37℃，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)刻相對(duì)延長，延長時(shí)刻的確定，應(yīng)以空白對(duì)比卡用（體溫）手指捏3分鐘時(shí)能夠變藍(lán)，即可往下操作。注意樣品放置的時(shí)刻應(yīng)與空白對(duì)比卡放置的時(shí)刻一致才有可比性。

5、空白對(duì)比卡別變XXX的緣故：一是藥片表面緩沖溶液加的少，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面別夠濕潤，二是溫度太低。

6、如有條件，將農(nóng)藥速測(cè)卡放在10℃以下保存效果會(huì)更好，每小包產(chǎn)品開封后最好在三天內(nèi)用完，如用別完，可放入將有變?nèi)汗枘z吸潮劑的瓶中密封保存，如發(fā)覺農(nóng)藥測(cè)速卡的紅群藥片由鮮紅橙群變?yōu)榘档暮旨t群，講明紙片已吸潮失效。

PR-3便攜式農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀

操作步驟：

1、接通電源，右側(cè)開關(guān)撥至“開”，打開上蓋按“START”鍵預(yù)熱；

2、當(dāng)預(yù)熱達(dá)到設(shè)置反應(yīng)溫度TEMP時(shí)，聽見“嘩”一聲，屏幕顯示“TEMP1”，預(yù)熱結(jié)束，等待倒計(jì)時(shí)；

3、去試紙外模，插入試紙（白片在下端），在白片上分不加1-2滴提取液；

4、再次按’“START”鍵，單片電腦開始“TEMP1”倒計(jì)時(shí)；

5、當(dāng)聽見延續(xù)“嘩、嘩、嘩”聲，屏幕顯示“CLOS”，提示合上前蓋，進(jìn)入“TEMP2”倒計(jì)時(shí)；

6、當(dāng)聽見六聲“嘩。嘩、嘩”音，本次操作結(jié)束，打開上蓋觀看試紙顏XXX變化；

7、試紙顯示藍(lán)群為陰性，淺藍(lán)群為弱陽性，白XXX為陽性；

8、測(cè)試完畢，向上取下試紙舉行下一次的檢測(cè)。

酶抑制率法（分光光度法）

1、試劑

1.1、pH8.0緩沖溶液：分不取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000mL蒸餾水溶解。

1.2、顯群劑：分不取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20m了緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。

1.3、底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１４嫫趧e超過兩周。

1.4乙酰膽堿酯酶：依照酶的活性事情，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化ΔAo值應(yīng)操縱在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期別超過四天。

1.5、可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔAo值應(yīng)操縱在0.3以上。

2、儀器

2.1、分光光度計(jì)或相應(yīng)測(cè)定儀及常量天平。

3、分析步驟

3.1、樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取液瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出提取液，靜置3~5min，待用。

3.2、對(duì)比溶液測(cè)試：先于試管中加入2。5mL緩沖溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯XXX劑，搖勻后于37℃放置15min以上（每批樣品的操縱時(shí)刻應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻，此刻檢液開始顯群反應(yīng)，應(yīng)馬上放入儀器比群池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAo。

3.3、樣品溶液測(cè)試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其他操作與對(duì)比溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAt。

結(jié)果的表述計(jì)算