黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)

千里之行，始于足下。第2頁/共2頁精品文檔推薦黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)一、利用紫外光譜測定黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)

大多數(shù)黃酮類化合物在甲醇中的紫外汲取光譜由兩個要緊汲取帶組成。浮現(xiàn)在300～400XXX之間的汲取帶稱為帶Ⅰ，浮現(xiàn)在240～280XXX之間的汲取帶稱為帶Ⅱ。別同類型的黃酮化合物的帶Ⅰ或帶Ⅱ的峰位、峰形和汲取強(qiáng)度別同，所以從紫外光譜能夠猜測黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型。

當(dāng)向黃酮類化合物的甲醇（或乙醇）溶液中分不加入甲醇鈉（NaOMe）、乙酸鈉（NaOAc）、乙酸鈉-硼酸（NaOAc-H3BO3）、三氯化鋁或三氯化鋁-鹽酸（AlCl3/HCl）試劑能使黃酮的酚羥基離解或形成絡(luò)合物等，導(dǎo)致光譜發(fā)生變化。據(jù)此變化能夠推斷各類化合物的結(jié)構(gòu)，這些試劑對結(jié)構(gòu)具有診斷意義，稱為診斷試劑。

黃酮和黃酮醇類

（一）黃酮、黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征

黃酮或黃酮醇的帶Ⅰ是由B環(huán)桂皮?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的汲取，帶Ⅱ是由A環(huán)的苯甲?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的汲取。

黃酮和黃酮醇的UV光譜圖形相似，僅帶Ⅰ位置別同，黃酮帶Ⅰ位于304～350XXX，黃酮醇帶Ⅰ位于358～385XXX。利用帶Ⅰ的峰位別同，能夠區(qū)不這兩類化合物。

黃酮、黃酮醇的B環(huán)或A環(huán)上取代基的性質(zhì)和位置別同將妨礙帶Ⅰ或帶Ⅱ的峰位和形狀。例如，7和4′位引入羥基、甲氧基等含氧取代基，可引起相應(yīng)汲取帶向紅位移。又如3-或5-位引入羥基，因能與C4＝O形成氫鍵締合，前者使帶Ⅰ向紅位移，后者使帶Ⅰ、帶Ⅱ均向紅位移。B環(huán)上的含氧取代基逐漸增加時，帶Ⅰ向紅位移值（XXX）也逐漸增加，但別能使帶Ⅱ產(chǎn)生位移。有時（例如3′，4′-位有2個羥基或2個甲氧基或亞甲二氧基）僅也許妨礙帶Ⅱ的形狀，使帶Ⅱ歧分為雙峰或1個主峰（Ⅱb位于短波處）和1個肩峰（sh）或彎曲（Ⅱa位于長波處）。

A環(huán)上的含氧取代基增加時，使帶Ⅱ向紅位移，而對帶Ⅰ無妨礙，或妨礙甚微（但5-羥基例外）。

黃酮或黃酮醇的3-，5-或4′-羥基被甲基化或苷化后，可使帶Ⅰ向紫位移，3-OH甲基化或苷化使帶Ⅰ（328～357XXX）與黃酮的帶Ⅰ的波長范圍重疊（且光譜曲線的形狀也相似），5-OH甲基化使帶Ⅰ和帶Ⅱ都向紫位移5～15XXX，4′-OH甲基化或苷化，使帶Ⅰ向紫位移3～10XXX。其他位置上的羥基取代對甲醇中的紫外光譜幾乎沒有妨礙。

（二）利用診斷試劑對黃酮、黃酮醇類化合物UV光譜的妨礙檢出羥基位置1．甲醇鈉（NaOMe），要緊是推斷是否有4′-OH，3、4′－二OH或3、3′、4′－三OH。

2．乙酸鈉，較為突出的是推斷是否有7-OH。［舉例講明］

3．乙酸鈉/硼酸要緊推斷A環(huán)或B環(huán)是否有鄰二酚羥基（5，6-二OH除外）。［舉例講明］

4．三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸，為推斷有無鄰二酚羥基，3-OH、5-OH提供信息。

（三）異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征

這三類化合物都有苯甲酰系統(tǒng)，而無桂皮酰結(jié)構(gòu)，因此它們的紫外光譜都有強(qiáng)的帶Ⅱ汲取，異黃酮帶Ⅱ汲取在245～270XXX，而二氫黃酮和二氫黃酮醇的帶Ⅱ在270～295XXX，普通只受A環(huán)的含氧取代基的妨礙，A環(huán)含氧取代基數(shù)

增加，汲取峰向紅位移。

（四）利用診斷試劑對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類化合物的UV光譜的妨礙推斷羥基位置

1．甲醇鈉

①帶Ⅱ向紅位移，示A環(huán)上有羥基。

②如有5，6，7-或5，7，8-三羥基或3′，4′-二羥基，則汲取帶將隨放置的延長而逐漸衰退。

③二氫黃酮、二氫黃酮醇帶Ⅱ向紅位移的大小取決于是否有游離的5-OH。

2．乙醇鈉

①乙醇鈉使7-羥基異黃酮的帶Ⅱ向紅位移6～20XXX，但6-位有含氧取代基時，乙醇鈉幾乎別能使帶Ⅱ產(chǎn)生挪移。4′，5，6，7-四羥基異黃酮的紫外光譜隨時刻延長而衰退。

②乙醇鈉使5，7-二羥基二氫黃酮和5，7-二羥基二氫黃酮醇帶Ⅱ向紅位移34～37XXX，而其相應(yīng)的5-去氧化合物則挪移51～58XXX。5，6，7-三羥基二氫黃酮的紫外光譜隨時刻延長而衰退。

3．乙醇鈉/硼酸

別能用NaOAc/H3BO3對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類的紫外光譜的妨礙來檢查B環(huán)鄰位二羥基，因為它們的B環(huán)與要緊發(fā)XXX團(tuán)缺少有效的共軛。但它們中的A環(huán)有6，7-二羥基時，加入NaOAc/H3BO3后使帶Ⅱ向紅位移10～15XXX。

4．三氯化鋁和三氯化鋁/鹽酸

①異黃酮、二氫黃酮（也許也包括二氫黃酮醇）的A環(huán)如有鄰二羥基（6，7-或7，8-，別包括5，6-），則帶Ⅱ在AlCl3中比在AlCl3/HCl中向紅位移11～30XXX。

②有5-羥基的異黃酮，其帶Ⅱ在AlCl3/HCl存在下與在甲醇中的光譜相比，向紅位移10～14XXX，而有5-羥基的二氫黃酮和有5-羥基的二氫黃酮醇類的帶Ⅱ在同樣事情下向紅位移20～26XXX。目標(biāo)檢測：

黃酮類化合物的鑒不與結(jié)構(gòu)測定如今多依靠于譜學(xué)的綜合解析，而化學(xué)辦法和群譜辦法已落至輔助地位。未知黃酮類化合物的鑒定，多在測定分子式的基礎(chǔ)上，利用PPC或TLC得到的Rf值或hRf值與文獻(xiàn)比較或分析對照樣品在甲醇溶液中及加入各種診斷試劑后得到的紫外及可見光譜舉行剖析。并且，關(guān)于化合物的顏群反應(yīng)，以及在提取分離過程中所表現(xiàn)的行為（如溶解度、酸或堿中的溶解事情、鉛鹽沉淀等）也應(yīng)注意分析。但這些辦法均有一定局限性，并曾導(dǎo)致得出過一些錯誤結(jié)論。質(zhì)子核磁共振（1H—NMR）因為可定量測定H的個數(shù)，以及依照質(zhì)子的化學(xué)位移和芳香氫核之間的自旋偶合所提供的信息（裂分?jǐn)?shù)目及偶合常數(shù)大?。纱_定黃酮母核上的取代模式。近來由于儀器分辨率的別斷改進(jìn)，加以同核去偶、溶劑位移以及核磁共振技術(shù)的使用，1H－NMR譜的測定對分析天然黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)差不多成為一種很重要的手段。然而正如往后談到的那樣，在黃酮類化合物的1H-NMR譜上，有時要想確切指認(rèn)每個信號并別是一件容易的情況。例如當(dāng)黃酮類母核的A-環(huán)上惟獨(dú)一具芳香氫核時，要想與H-3信號區(qū)不，算是十分困難的咨詢題。解決這種咨詢題，13C核磁共振(13C－NMR)技術(shù)有非常大的優(yōu)勢。加上各種取代基位移及苷化位移效應(yīng)的發(fā)覺，使得圖譜的解析工作大大簡化。所以，13C-NMR技術(shù)在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定中發(fā)揮著越來越重要的作用。質(zhì)譜（MS）技術(shù)，

尤其場解析質(zhì)譜（FD－MS）與快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB－MS）及串聯(lián)質(zhì)譜（MS－MS）的浮現(xiàn)與應(yīng)用，使其成為黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定的重要手段之一（質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢是只需要微量的樣品就可獲得有關(guān)整個分子結(jié)構(gòu)及其要緊碎片結(jié)構(gòu)的重要信息）。

實(shí)際工作中常常依照需要，靈便、綜合運(yùn)用上述辦法和手段，并輔以必要的化學(xué)辦法，以求結(jié)構(gòu)鑒定獲得中意的結(jié)果。

二、XXX譜法在黃酮類化合物鑒不中的應(yīng)用

紙群譜（PPC）適用于分離各種天然黃酮類化合物及其苷類的混合物?；旌衔锏蔫b定常采納雙向群譜法。以黃酮苷類來講，普通第一向展開采納某種醇性溶劑，如n-BuOH－HOAc－H2O（4∶1∶5上層，BAW）、t-BuOH－HOAC－H2O（3∶1∶1，TBA）或水飽和的n-BuOH等，這些要緊是依照分配作用原理舉行分離。第二向展開溶劑則用水或下列水溶液，如：2％～6％HOAc、3％NaCl及HOAc-濃HCl－H2O（30∶3∶10）等。它們要緊是依照吸附作用原理舉行分離。

黃酮類化合物苷元普通宜用醇性溶劑或用C6H6－HOAc－H2O（125∶72∶3）、CHCl3－HOAC－H2O（13∶6∶l）、PhOH-H2O（4∶1）或HOAC一濃HCl-H2O（30∶3∶3）舉行分離。而花XXX苷及花群苷苷元，則可用含HCl或HOAC的溶液作為展開劑。

多數(shù)黃酮類化合物在紙XXX譜上用紫外光燈檢查時，能夠看到有XXX斑點(diǎn)，以氨蒸氣處理后常產(chǎn)生明顯的顏XXX變化。此外還可噴以2％AlCl3（甲醇）溶液（在紫外光燈下檢查）或1％FeC13－1％K3Fe(CN)6（1∶1）水溶液等顯群劑。黃酮類化合物苷元中，平面性分子如黃酮、黃酮醇、查耳酮等，用含水類溶劑如3％～5％HOAC展開時，幾乎停留在原點(diǎn)別動（Rf＜0.02＝；而非平面性分子如二氫黃酮、二氫黃酮醇、二氫查耳酮等，因親水性較強(qiáng)，故Rf值較大(0.10～0.30)。黃酮類化合物分子中羥基苷化后，極性即隨之增大，故在醇性展開劑中Rf值相應(yīng)落低，同一類型苷元，Rf值依次為：苷元＞單糖苷＞雙糖苷。以在BAW中展開為例，多數(shù)類型苷元（花群苷元例外）Rf值在0.70以上，而苷則小于0.70。但在用水或2％～8％HOAC，3％NaCl或1％HCl展開時，則上列順序?qū)嵉?，苷元幾乎停留在原點(diǎn)別動，苷類的Rf值可在0.5以上，糖鏈越長，則Rf值越大。另外，糖的結(jié)合位置對Rf值也有重要的妨礙。別同類型黃酮類化合物在雙向PPC展開時常常浮現(xiàn)在特定的區(qū)域，所以可猜測它們的結(jié)構(gòu)類型以及判定是否成苷以及含糖數(shù)量。除PPC外，TLC用于黃酮類化合物的鑒定也日趨廣泛。普通采納吸附薄層群譜，常用的吸附劑有硅膠與聚酸胺，其次是纖維素。

硅膠薄層群譜；用于分離與鑒定弱極性黃酮類化合物較好。分離黃酮苷元常用的展開劑是甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5∶4∶1），并能夠依照待分離成分極性的大小適當(dāng)?shù)卣{(diào)整甲苯與甲酸的比例。另外尚有苯-甲醇(95：5)、苯-甲醇-醋酸（35∶5∶5）、氯仿一甲醇（8.5∶1.5∶7∶0.5）、甲苯-氯仿-丙酮(4O∶25∶35)、丁醇一吡啶-甲酸(40∶10：∶)等分離黃酮苷元的衍生物如甲醚或醋酸乙酯等中性成分，可用苯-丙酮（9∶1）、苯-醋酸乙酯(7.5∶2.5）等為展開劑。

聚酸胺薄層群譜：適用范圍較廣，特殊適合于分離合游離酚羥基的黃酮及其苷類。由于聚酸胺對黃酮類化合物吸附能力較強(qiáng)，因而需要能夠破壞其氫鍵締合的溶劑為展開劑。

在大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。常用的展開劑有乙醇一水(3∶2)、水-

乙醇-乙酸丙酮(4∶2∶1)、水-乙醇-甲酸-乙酸丙酮(5∶1.5∶l：0.5)、水飽和的正丁醇一醋酸（100∶1∶100∶2）、丙酮-水（1∶1）、丙酮-95％乙醇-水（2∶1∶2）、95％乙醇-醋酸（100∶2）、苯-甲醇-丁酮（60∶20∶20）等。

Stahl總結(jié)前人的工作，介紹了一些黃酮苷元和黃酮苷用硅膠、聚酸胺與纖維素三種薄層群譜和四種混合溶劑作為展開劑所得到的hRf值。

三、紫外及可見光譜在黃酮類化合物鑒不中的應(yīng)用

紫外及可見分光光度法是鑒不黃酮類化合物結(jié)構(gòu)的一種重要手段，普通程序如下：

（1）測定樣品在甲醇溶液中的UV光譜；

（2）測定樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到的UV及可見光譜。常用的診斷試劑有甲醇鈉（NaOMe）．醋酸鈉（NaOAc）、醋酸鈉一硼酸（NaOAc－H3BO3）．三氯化鋁（AICI3）及三氯化鋁一鹽酸（AICI3－HCI）等。

提取與分離

一、提取

黃酮類化合物在花、葉、果等組織中，普通多以苷的形式存在，而在木部堅硬組織中，則多以游離苷元形式存在。

黃酮苷類以及極性稍大的苷元（如羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等），普通可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些極性較大的混合溶劑舉行提取。其中用得最多的是甲醇－水（1∶1）或甲醇。一些多糖苷類則能夠用沸水提取。在提取花青素類化合物時，可加入少量酸（如0.1％鹽酸）。但提取普通黃酮苷類成分時，則應(yīng)當(dāng)慎用，以免發(fā)生水解反應(yīng)。為了幸免在提取過程中黃酮苷類發(fā)生水解，常按普通提取苷的辦法事先破壞酶的活性。大多數(shù)黃酮苷元宜用極性較小的溶劑，如氯仿、乙醚、醋酸乙酯等提取，對多甲氧基黃酮的游離苷元，可用苯舉行提取。對得到的粗提取物可舉行精制處理，常用的辦法有：

（一）溶劑萃取法：利用黃酮類化合物與混入的雜質(zhì)極性別同，選用別同溶劑舉行萃取可達(dá)到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性群素。而某些提取物的水溶液經(jīng)濃縮后則可加入多倍量濃醇，以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖類等水溶性雜質(zhì)。

有時溶劑萃取過程也能夠用逆流分配法延續(xù)舉行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水一醋酸乙酯，正丁醇一石油醚等。

溶劑萃取過程在除去雜質(zhì)的并且，往往還能夠收到分離苷和苷元或極性苷元與非極性苷元的效果。

（二）堿提取酸沉淀法

黃酮苷類雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再將堿水提取液調(diào)成酸性，黃酮苷類即可沉淀析出。此法簡便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷提取都應(yīng)用了那個辦法?，F(xiàn)以從槐米中提取蘆丁為例講明該法的操作過程。

槐米（槐樹SOphorajaponicaL．花蕾）加約6倍量水，煮沸，在攪拌下徐徐加入石灰乳至pH8～9，在此pH條件下微沸20～30min，趁熱抽濾，殘渣再加4倍量的水煎一次，趁熱抽濾。合并濾液，在60～70t的條件下，用濃鹽酸將合并濾液調(diào)至PH為5，攪勻后靜置24h，抽濾。用水將沉淀物洗至中性，60℃干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶，70一80℃干燥后得蘆丁純品。

在用堿酸法舉行提取純化時，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度別宜過離，以免在強(qiáng)堿性下，尤其加熱時破壞黃酮母核。在加酸酸化時，酸性也別宜過強(qiáng)，以免生成樣鹽，致

使析出的黃酮類化合物又重新溶解，落低產(chǎn)品收率。當(dāng)藥材中含有大量果膠、粘液等水溶性雜質(zhì)時，如花、果類藥材，宜用石灰乳或石灰水代替其他堿性水溶液舉行提取，以使上述含羧基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，別被溶出。這將有利于黃酮類化合物的純化處理。

（三）炭粉吸附法

要緊適于苷類的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無黃酮反應(yīng)時為止。過濾，收集吸附苷的炭末，依次用沸水、佛甲醇、7％酚一水、15％酚一醇溶液舉行洗脫。對各部分洗脫液舉行定性檢查（或用PPC鑒定）。經(jīng)過對BaPtisialecontei中黃酮類化合物的研究證明，大部分黃酮耷類可用7％酚一水洗下。洗脫液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮至小體積，再用乙酸振搖除去殘留的酚，余下水層減壓濃縮即得較純的黃酮苷類成分。

二、分離

現(xiàn)將較常用的分離辦法介紹如下：

（一）柱XXX譜法

分離黃酮類化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉等。此外，也實(shí)用氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等。

1．硅膠柱群譜此法應(yīng)用范圍最廣，要緊適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及離度甲基化（或乙醇化）的黃酮及黃酮醇類。少數(shù)事情下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類等。供試硅膠中混存的微量金屬離子，應(yīng)預(yù)先用濃鹽酸處理除去，以免干擾分離效果。

2．聚酰胺柱群譜對分離黃酮類化合物來講，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強(qiáng)度要緊取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。聚酰胺柱XXX譜可用于分離各種類型的黃酮類化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等。以Baptisialecontei為例：黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時大體有下述規(guī)律：

（1）苷元相同，洗脫先后順序普通是：叁糖苷、雙糖苷、單糖苷、苷元。

（2）母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減慢。當(dāng)分子中羥基數(shù)目相并且，羥基位置對吸附也有妨礙，聚酰胺對處于羰基間位或?qū)ξ坏牧u基吸附力大于鄰位羥基，故洗脫順序為：具有鄰位羥基黃酮，具有對位（或間位）羥基黃酮。

（3）別同類型黃酮化合物，先后流出順序普通是：異黃酮、二氫黃酮醇、黃酮、黃酮醇。

（4）分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附，故查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。上述規(guī)律也適用于黃酮類化合物在聚酰胺薄層群譜上的行為。

3．葡聚糖凝膠（Sephadexgel）柱群譜關(guān)于黃酮類化合物的分離，要緊用兩種型號的凝膠：Sephadex－G型及Sephadex－LH－廠－型。用葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的機(jī)制是：

分離游離黃酮時，要緊靠吸附作用。凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目。但分離黃酮苷時，則分子篩的性質(zhì)起主導(dǎo)作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體。

表6-5中Ve為洗脫樣品時需要的溶劑總量或洗脫體積；V0為柱子的空體積。Ve／V0數(shù)值越小講明化合物越容易被洗脫下來。上表所列數(shù)據(jù)清晰地表明：苷元的羥基數(shù)越多，Ve／V0越大，越難以洗脫，而苷的分子量越大，其上聯(lián)結(jié)糖的數(shù)目越多，則Ve／V0越小，越容易洗脫。

葡聚糖凝膠柱群譜中常用的洗脫劑有：

（1）堿性水溶液（如0．1mol／LNH4OH），含鹽水溶液（0．5mol／LNaCI等）。（2）醇及含水醇，如甲醇，甲醇－水（別同比例），叔丁醇－甲醇（3：1）、乙醇等。

（3）其他溶劑，如含水丙酮、甲醇－氯仿等。

（二）鉛鹽法

此法過去曾用于研究，目前已非常少采納。普通是在乙醇或甲醇溶液中依次加入適量中性醋酸鉛、堿式醋酸鉛水液，分不使具有鄰二酚羥基成分（包括黃酮）及含羥基成分，具有普通酚羥基的成分分離，再分不將鉛鹽沉淀懸浮于醇中，脫鉛后得到成分。

（三）硼酸鉻合法

有鄰二酚羥基的黃酮類化合物可與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水，借此可與無鄰二酚羥基的黃酮類化合物相互分離。

（四）pH梯度萃取法

pH梯度萃取法適合于酸性強(qiáng)弱別同的游離的黃酮類化合物的分離，將混合物溶于有機(jī)溶劑（如乙醚）中，依次用5％NaHCO3（萃取出7，4′－二羥基黃酮）、5％Na2CO3（萃取出7－或4′－羥基黃酮）、0.2％NaOH（萃取出具普通酚羥基黃酮）、4％NaOH（萃取出5－羥基黃酮）萃取而使之分離。

聚酰胺薄膜的分離機(jī)制要緊是分子鍵氫鍵和吸附。當(dāng)展開劑為別同比例的醇-水時，其分離機(jī)制與反相板類似，苷元較苷的Rf值低；當(dāng)展開劑為有機(jī)溶劑時，分離機(jī)制與正相板類似，苷元較苷的Rf值高。

常用顯XXX劑多了去了，看你是要用于鑒不啥了。

碘蒸氣是通用顯群劑，對非常多化合物都顯黃棕XXX。碘顯XXX過程中由碘蒸氣分子與化合物發(fā)生結(jié)合而顯群。

香草醛濃硫酸顯群原理是使羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯XXX。

比如：（1）礬酸銨一濃硫酸溶液（Mandelin試劑）為1％礬酸銨的濃硫酸溶液。如遇阿托品顯紅群，可待因顯藍(lán)XXX，士的寧顯紫群到紅群。

（2）鉬酸銨一濃硫酸溶液（Frohde試劑）為1％鉬酸鈉或鉬酸銨的濃硫酸溶液，如遇烏頭堿顯黃棕群，小檗堿顯棕綠群，阿托品別顯群。

（3）甲醛一濃硫酸試劑（Marquis試劑）為30％甲醛溶液0.2ml與10ml濃硫酸的混合溶液。如遇嗎啡顯橙XXX至紫群，可待因顯紅群至黃棕XXX。

（4）濃硫酸如遇烏頭堿顯紫XXX、小檗堿顯綠XXX，阿托品別顯群。

（5）濃硝酸如遇小檗堿顯棕紅XXX，秋水仙堿顯藍(lán)群，咖啡堿別顯群。

(1)重絡(luò)酸鉀-硫酸:檢查普通有機(jī)物.

噴灑劑:5克重絡(luò)酸鉀溶于100毫升40%硫酸中.

薄層檢查:噴灑后加熱到150℃至班點(diǎn)浮現(xiàn)

(2)熒光素-溴:檢查別飽和化合物

噴灑劑:0.1克熒光素溶于100毫升乙醇中

溴試劑:5%的溴的四氯化碳溶液

噴灑后處理:噴灑熒光素溶液后,放置存有溴溶液的缸內(nèi),可于紫外線分析燈下檢

查熒光,熒光素與溴化和成曙紅(Eosin)(無螢光),而別飽和化合物則成溴加成物,保留了原有熒光;若點(diǎn)樣較多,則呈黃XXX斑點(diǎn),底板呈紅XXX.

(3)碘:檢查普通有機(jī)物.

辦法:a層析譜放密閉缸內(nèi)或瓷盤內(nèi)，缸內(nèi)預(yù)先放有碘結(jié)晶少許，大部分有機(jī)化合物呈棕群斑點(diǎn)。

B層析譜放碘蒸氣中5分鐘（或噴5％碘的氯仿溶液）取出置空氣中待過量的碘蒸氣全部揮發(fā)后，噴1％淀粉的水溶液，斑點(diǎn)轉(zhuǎn)成藍(lán)群。

（4）硫酸：通用

噴灑劑：5％的濃硫酸乙醇溶液，或15％濃硫酸正丁醇溶液，或濃硫酸－醋酸（1：1）噴灑后處理：空氣中干燥15分鐘，再熱至110℃直至浮現(xiàn)顏群或熒光。（5）硝酸銀－氫氧化銨（Tollen-Zaffaroni）試劑：檢查還原性物質(zhì)。

溶液I:0.1%N硝酸銀;溶液II:5N氫氧化銨

噴灑劑:I和II以1:5混合(臨用前混合)

噴灑后處理:105℃加熱5~10分鐘,至深黑群斑點(diǎn)浮現(xiàn).

(6)磷鉬酸或磷鎢酸,硅鎢酸:檢查還原性物質(zhì),類脂體,生物堿,甾體

噴灑劑:5~10%磷鉬酸或磷鎢酸或硅鎢酸乙醇溶液

噴灑后處理:120℃加熱至斑點(diǎn)浮現(xiàn).

沉淀試劑:1克硅鎢酸溶于20毫升水中,加10%鹽酸至強(qiáng)堿性.

生物堿

(7)硫酸??=硫酸:檢查生物堿及含碘化合物

噴灑劑:0.1克硫酸?混懸于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加熱至沸,逐滴加入濃硫酸至澄清.

噴灑后處理:110℃加熱數(shù)分鐘至斑點(diǎn)浮現(xiàn).

(8)碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑:檢查生物堿及其他含氟化合物.

溶液I:0.85克次硝酸鉍溶于10毫升冰醋酸40毫升水中

溶劑II:8克碘化鉀溶于20毫升水中.

制備液I+II,等體積混合.可用于棕XXX瓶中保存較長時刻,普通制備液可作沉淀試劑用.

噴灑液:制備液1毫升與2毫升醋酸,10毫升水混合即得

(9).碘化汞鉀(Mayer)試劑:檢查生物堿.

制備液:13.55克氯化汞和49.8克碘化鉀各溶于20毫升水中,等體積混合并用水稀釋至1000毫升.

噴灑液:制備液加1/10體積的17%鹽酸.

噴灑后處理:觀看斑點(diǎn),并于紫外線熒光分析燈下檢出.

(10)?酸納-濃硫酸(Mandelin)試劑:檢查生物堿.

1%>酸納的濃硫酸溶液.與多種生物堿呈別同顏群.

(11)碘－碘化鉀(Wagner)試劑:檢查生物堿.

1克碘及10克碘化鉀,溶于50毫升水中,加熱,加2毫升醋酸,再用水稀釋至100毫升.

可作紙層板顯群劑,液可作沉淀試劑.

酚類,鞣質(zhì)

(12)三氯化鐵:檢查酚類及??酸.

噴灑劑:1~5%三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許.??酸呈紅XXX斑點(diǎn),酚類稱藍(lán)群或綠群斑點(diǎn).

(13)鐵XXX-三氯化鉀:檢查酚類,芳香胺類及還原性物質(zhì).

噴灑劑:1%鐵XXX水溶液,2%三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.

噴灑后處理:噴灑后酚性物質(zhì)呈藍(lán)群斑點(diǎn).再噴2N鹽酸,能使顏群加深,紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液.

(14)4-胺基安替比林-鐵XXX(Emerson反應(yīng)):檢查酚類.

噴灑劑:I.2%4-氨基安替比林乙醇溶液;

II.8%鐵XXX水溶液.

或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%鐵XXX水溶液

辦法:先噴灑I,再噴灑II,即顯群,或再放入密閉缸中,缸內(nèi)放25%氫氧化銨,即產(chǎn)生橙群至深紅群.

(15)對氨基苯磺酸,重氮鹽(Pauly試劑):檢查酚類,芳香胺類及能偶合的雜環(huán)化合物.

噴灑劑:4.5克對氨基苯磺酸,加熱溶于45毫升12N鹽酸中,用水稀釋至500毫升,取10毫升稀釋液用冰冷卻,加10毫升冷4.5%亞硝酸鈉水溶液,0℃放15分鐘(此試劑于0℃可保存3天),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.

普通重氮化試劑,也可用聯(lián)苯胺,對硝基苯胺等.

(16)對甲苯磺酸:檢查甾體,黃酮,鞣質(zhì).

噴灑劑:20%對甲苯磺酸氯仿溶液.

噴灑后處理:100℃加熱數(shù)分鐘,紫外線分析燈下檢查熒光斑點(diǎn).

含氧雜環(huán)及蒽醌類*

(17)三氯化鋁:檢查黃酮體.

噴灑1%三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃群熒光

(18)堿式醋酸鉛:檢查黃酮體.

噴灑劑:飽和堿式醋酸鉛(或飽和醋酸鉛)水溶液.

于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點(diǎn).

(19)醋酸鎂:檢查蒽醌甙,甙元及黃酮體

噴灑劑:0.5%醋酸鎂甲醇溶液

辦法:90℃加熱5分鐘,呈紅群至紫群斑點(diǎn).

(20)氫氧化鉀:檢查香豆素,蒽醌甙及甙元

噴灑劑:5~10%氫氧化鉀的甲醇溶液.

于日光及紫外線熒光分析燈下檢示斑點(diǎn).

萜類,甾體

(21)三氯化銻(Carr-Price試劑):檢查甾體,萜類,皂類.

噴灑劑:25克三氯化銻溶于75克氯仿中(亦能夠用氯仿或四氯化碳的飽和溶液).噴灑后處理:100℃加熱5分鐘,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光.

(22)五氯化銻:檢查甾體,萜類,皂甙.

噴灑劑:五氯化銻-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新奇配制.

噴灑后處理:120℃加熱至斑點(diǎn)浮現(xiàn),并于紫外線熒光分析燈下檢示.

(23)香蘭醛-硫酸:檢查高級醇類,酚類,甾體,萜類,芳香油.

噴灑劑:1克香蘭素溶于100毫升濃硫酸,或0.5克香蘭醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.

噴灑后處理:室溫或120℃加熱觀看顯XXX斑點(diǎn).

(24)4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.試劑):檢查?Azulene及?前體Proazulene.

噴灑劑:0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕群瓶中保存數(shù)月)

?:烴室溫即成藍(lán)紫群斑點(diǎn),>前體于80℃加熱10分鐘浮現(xiàn)藍(lán)紫群斑點(diǎn).

(25)氯胺T－三氯醋酸:檢查強(qiáng)心甙.

噴灑劑:I.3%氯仿T水溶液新奇制備.

II.25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存數(shù)天).

10毫升I加40毫升II,用前混合.

噴灑后處理:110℃加熱7分鐘,紫外線熒光分析燈下檢示呈藍(lán)群或黃群熒光.(26)亞硝酸基鐵氰化鈉-氫氧化鈉(Legal試劑):檢查別飽和內(nèi)酯;甲基酮或活性次甲基,常用于強(qiáng)心甙

噴灑劑:1克亞硝基鐵氰化鈉溶于100毫升2N氫氧化鈉-乙醇(1:1)的水溶液.顯紅XXX或紫群斑點(diǎn).

(27)3,5-二硝基苯甲酸(Legal試劑):檢查強(qiáng)心甙,α,β-別飽和內(nèi)酯.

噴灑劑:1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氫氧化鉀50毫升.強(qiáng)心甙呈紫紅群斑點(diǎn).

糖類

(28)鄰苯二甲基苯胺:檢查還原糖.

噴灑劑:0.93克苯氨,1.66克鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中.

噴灑后處理:105℃加熱10分鐘.

(29)2,3,5-Triphenyl-tetrazoliumchloride(T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質(zhì)。

溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液；溶液II：1N氫氧化鈉。

噴灑液：I，II，臨用前等體積混合。

噴灑后處理：100℃加熱5～10分鐘，得紅XXX斑點(diǎn)。

（30）Keller-Kiliani試劑：檢查α－去氧糖，常用于強(qiáng)心甙。

試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻.

試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯棕群,漸變淺綠,藍(lán)XXX.最終冰醋酸層全部燃呈藍(lán)群.

(31)1,3-二羥基萘-磷酸:檢查糖類.

噴灑液:0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,與10毫升85%磷酸混合.

(32)費(fèi)林溶液(Fehling):檢查還原糖.

溶液I:69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中.

上述二溶液如別清可濾過.臨用前等體積混合.

氨基酸

(33)茚三酮:檢查氨基酸及氨基糖.

噴灑劑:0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).

噴灑后處理:110℃