二氫吡啶鈣拮抗劑作用機(jī)制

二氫吡啶類(lèi)鈣拮抗劑的分析藥學(xué)院藥物分析教研室【大綱要求】1、掌握二氫吡啶類(lèi)鈣拮抗劑類(lèi)代表藥物的體內(nèi)過(guò)程2、熟悉二氫吡啶類(lèi)鈣拮抗劑類(lèi)代表藥物的體內(nèi)分析方法硝苯地平尼群地平尼莫地平氨氯地平主要代表性藥物主要的理化性質(zhì)較強(qiáng)的紫外吸收特性，沒(méi)有熒光特性一般顯中性，含有N原子的顯弱堿性不穩(wěn)定性，見(jiàn)光易分解光學(xué)特性體內(nèi)過(guò)程口腹易吸收、半衰期短、達(dá)峰時(shí)間較快血漿蛋白結(jié)合率高一般經(jīng)肝臟代謝，代謝產(chǎn)物一般沒(méi)有活性含量分析方法同位素標(biāo)記法熒光分析法氣相色譜法液相色譜法色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法

樣品的制備：往往采用簡(jiǎn)單的液液萃取法進(jìn)行，萃取溶劑多為苯、乙酸乙酯和氯仿等，取萃取后的有機(jī)層，揮干用流動(dòng)相溶解后直接進(jìn)樣分析。熒光測(cè)定法硝苯地平＋三氯化鈦＋鄰苯二甲醛＝熒光物質(zhì)用乙酸乙酯進(jìn)行液液萃?。╬H=7)，測(cè)定硝苯地平用氯仿進(jìn)行液液萃?。╬H=2)，測(cè)定硝苯地平的代謝產(chǎn)物氣相色譜分析色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱OV-1OV-17柱溫：225℃～270℃檢測(cè)器：電子捕獲檢測(cè)器ECD人血漿中尼群地平的GC法測(cè)定色譜條件：DB-1毛細(xì)管柱（25m×0.328mm,I.D.,0.5μm)載氣：高純氮?dú)鈾z測(cè)器:ECD進(jìn)樣溫度：260℃檢測(cè)溫度：300℃升溫方式：程序升溫255℃（6.2min)－270℃（5min）分流進(jìn)樣：40：14℃/min

樣品的前處理：取內(nèi)標(biāo)，加血樣，混合后加入1mol/mL的NaOH0.5ml，混合，加入乙醚-環(huán)己烷（1：1），窩旋，離心，取有機(jī)相用氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)眉状既芙夂筮M(jìn)樣分析。人血漿中尼莫地平的毛細(xì)管氣相色譜ECD檢測(cè)及藥代動(dòng)力學(xué)

樣品制備：加入1μg/ml的尼群地平，再加入1mol/lNaOH0.5ml，混勻后，用乙酸乙酯－正己烷（1：1）萃取，4000rpm離心，取有機(jī)相吹干后用甲醇溶解后進(jìn)樣分析。色譜條件：OV-101毛細(xì)管柱（25m×0.2mm,I.D.,0.5μm)載氣：高純氮?dú)鈾z測(cè)器:ECD進(jìn)樣溫度：260℃氣化室溫度：270℃檢測(cè)溫度：300℃升溫方式：恒溫洗脫分流進(jìn)樣：33：12.025.0100.0回收率日間日內(nèi)82.3％88.4％89.28.5％7.0％1.1％8.8％7.5％2.9％高效液相色譜法一般進(jìn)行的是反相液相色譜法一般使用紫外檢測(cè)器或電化學(xué)檢測(cè)器一般多選用含有緩沖液的甲醇或乙腈為流動(dòng)相可選用同類(lèi)藥物或安定類(lèi)藥物為內(nèi)標(biāo)RP-HPLC法測(cè)定血漿中的硝苯地平

樣品制備取待測(cè)血漿600μl，置于10ml具塞離心管中，加地西泮內(nèi)標(biāo)物溶液（300ng/ml）200ul,氨水120μl,渦旋振蕩1min,再加入提取溶劑[無(wú)水乙醚－正己烷（3：1）]4ml，渦旋振蕩20min，離心（3000r/min）10min，置-20oC的冰箱中冷凍2h，上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至另一離心管中，于50oC水浴中用氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?0％乙腈200μl,渦旋混合、離心（1500r/min）10min，取15μl進(jìn)樣（低濃度則進(jìn)樣30μl）。色譜條件色譜柱為L(zhǎng)unaC18(250*4.6mm,5um)；保護(hù)柱為AlltechC18(30*2mm,40um)。流動(dòng)相為乙腈－水－二乙胺－磷酸（51：49：0.12：0.10，V/V），流速1.2ml/min。柱溫45oC。紫外監(jiān)測(cè)器，波長(zhǎng)238nm，進(jìn)樣量15～30μl。RP-HPLC法測(cè)定尼群地平樣品制備避光操作。取體液1μl或組織勻漿4ml，置15ml具塞離心管中，精密加入地爾硫卓?jī)?nèi)標(biāo)物溶液（1g/L甲醇）10.2ml，加50mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（pH9.8）1ml,搖勻，加環(huán)己烷－異丙醇（96.5：3.5，V/V）5ml提取，離心（4000r/min）15min,取有機(jī)相于水浴中用氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)苡?00μl流動(dòng)相，吸取10μl進(jìn)樣分析。色譜條件色譜柱為YWGC18(150*4.6mm,5μm)。流動(dòng)相為甲醇：50mmol/L磷酸鹽緩沖溶液70：30，V/V），磷酸調(diào)pH至6.8；流速1.0ml/min。柱溫：室溫。紫外監(jiān)測(cè)器，波長(zhǎng)236nm；進(jìn)樣量10μl。

HPLC電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定血漿或血清中尼卡地平及其代謝產(chǎn)物

樣品制備取待測(cè)血漿樣品200μl，加入pH1.0的Tris緩沖液和內(nèi)標(biāo)物布替林，用甲基叔丁基醚提取，離心后分離有機(jī)相，取100μl進(jìn)樣。色譜條件色譜柱為S5SCX硅膠柱（125x5.0mm，5μm）。流動(dòng)相：甲醇，含20mmol/L高氯酸銨。流速：2.0ml/min。檢測(cè)：電化學(xué)檢測(cè)器，玻碳電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，工作電位+1.1V。液相色譜－質(zhì)譜－質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定人血漿中的氨氯地平

樣品制備在暗室中取血漿1.0ml置10ml具塞試管中，依次加入流動(dòng)相100μl,內(nèi)標(biāo)物溶液（41－羥基普羅帕酮溶液80ng/ml，用流動(dòng)相溶解）100μl，1mol/LnaOH溶液100ul,渦旋30s。加乙醚－二氯甲烷（2：1）3ml提取，往復(fù)振蕩10min，離心5min，分取有機(jī)相于40oC空氣流中吹干。殘留物加100μl流動(dòng)相溶解，取20μl進(jìn)樣。色譜條件色譜柱：ZorbaxXDBC8柱（150mm*4.6mmID,5μm）。流動(dòng)相：乙腈－水－甲酸（75：35：1），流速：0.4ml/min。柱溫為20oC。質(zhì)譜條件離子源為ESI源，源電壓4.5kV；加熱毛細(xì)管溫度150oC；鞘氣為氨氣，流速621kPa；輔助氣（N2）流速23au;碰撞氣（Ar）壓力1.9Pa。碰撞誘導(dǎo)解離（CID）電壓20V(氨氯地平)和40V(內(nèi)標(biāo)物)；正離子方式檢測(cè)；掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM），用于定量分析的二級(jí)碎片離子分別為m/z238(氨氯地平)和m/z11