第三章高效液相色譜分析

13.1概述13.2HPLC儀器包括：高壓輸液裝置;進(jìn)樣系統(tǒng);分離系統(tǒng);檢測系統(tǒng);輔助系統(tǒng)13.3流動(dòng)相和固定相簡介13.4高效液相色譜方法各論分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜2023/3/271第一頁，共40頁。13.1概述高效液相色譜(HPLC)是以溶劑液體為流動(dòng)相的色譜方法。按照固定相不同可分為：液液分配色譜；吸附色譜(液固色譜)；離子交換色譜；尺寸排阻色譜(凝膠滲透色譜)。此外，還有親和色譜、平板色譜(薄層色譜)等。早期液相色譜，包括Tswett的工作，都是在直徑1~5cm,長50~500cm的玻璃柱中進(jìn)行的。為保證有一定的柱流速，填充的固定相顆粒直徑多在150~200m范圍內(nèi)。即使這樣，流速仍然很低(<1mL/min)，分析時(shí)間仍然很長！當(dāng)加壓增加流速(真空或空氣泵)時(shí)，盡管分析時(shí)間減少，但柱塔板高度Hmin也相應(yīng)增加了！或者說柱效下降了。為了解決分析時(shí)間及柱效問題，人們認(rèn)識(shí)到：最為有效地增加柱效的唯一方法是減小填充物的粒徑（3~10m

）！直到60年代，由于在高壓下操作的液壓設(shè)備、高效固定相以及高靈敏檢測器的出現(xiàn)及發(fā)展，才徹底解決了分析時(shí)間及柱效的問題。即所謂的高效液相色譜技術(shù)才真正得到廣泛應(yīng)用。2023/3/272第二頁，共40頁。1.高效液相色譜與經(jīng)典液相色譜方法 的比較高速：HPLC采用高壓輸液設(shè)備，流速大 增加，分析速度極快，只需數(shù)分 鐘；而經(jīng)典方法靠重力加料，完成 一次分析需時(shí)數(shù)小時(shí)。高效：填充物顆粒極細(xì)且規(guī)則，固定相涂 漬均勻、傳質(zhì)阻力小，因而柱效很 高?？梢栽跀?shù)分鐘內(nèi)完成數(shù)百種物 質(zhì)的分離。高靈敏度：檢測器靈敏度極高：UV—10-9g, 熒光檢測器—10-11g。2023/3/273第三頁，共40頁。2.HPLC與GC的比較分析對(duì)象及范圍：GC分析只限于氣體和低沸點(diǎn)的穩(wěn)定化合物，而這些物質(zhì)只點(diǎn)有機(jī)物總數(shù)的20%；HPLC可以分析高沸點(diǎn)、高分子量的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，這類物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的80%。流動(dòng)相的選擇：GC采用的流動(dòng)相中為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，對(duì)組分作用??；HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供選擇的機(jī)會(huì)多。它除了起運(yùn)載作用外，還可與組分作用，并與固定相對(duì)組分的作用產(chǎn)生競爭，即流動(dòng)相對(duì)分離的貢獻(xiàn)很大，可通過溶劑來控制和改進(jìn)分離。操作溫度：GC需高溫；HPLC通常在室溫下進(jìn)行。2023/3/274第四頁，共40頁。3.應(yīng)用由于HPLC分離分析的高靈敏度、定量的準(zhǔn)確性、適于非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定組分的分析，因此，在工業(yè)、科學(xué)研究，尤其是在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等方面應(yīng)用極為廣泛。如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、烴、碳水化合物、藥品、多糖、高聚物、農(nóng)藥、抗生素、膽固醇、金屬有機(jī)物等分析，大多是通過HPLC來完成的。右圖是各種HPLC方法的應(yīng)用范圍及對(duì)象極性增加不溶于水溶于水非極性離子非離子極性吸附反向分配分配正向分配離子交換尺寸排阻凝膠滲透凝膠過濾分子量2023/3/275第五頁，共40頁。13.2HPLC儀器2023/3/276第六頁，共40頁。2023/3/277第七頁，共40頁。2023/3/278第八頁，共40頁。HP1100Chem-StationSystem2023/3/279第九頁，共40頁。2023/3/2710第十頁，共40頁。HPLC儀器包括：高壓輸液裝置;進(jìn)樣系統(tǒng);分離系統(tǒng);檢測系統(tǒng);此外還配有梯度淋洗、自動(dòng)進(jìn)樣和數(shù)據(jù)處理裝置。其工作過程如圖所示。2023/3/2711第十一頁，共40頁。He儲(chǔ)液瓶分布器過濾2m高壓泵入口檢查出口檢查脈流消除抽氣過濾器反壓調(diào)節(jié)壓力計(jì)注樣閥分離柱到檢測器2023/3/2712第十二頁，共40頁。1.高壓輸液系統(tǒng)1）貯液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶劑過濾器(Ni合金)， 其孔很約2m，可防止顆粒物進(jìn)行泵內(nèi)。2）脫氣：超聲波脫氣或真空加熱脫氣。溶劑通過脫氣 器中的脫氣膜，相對(duì)分子量小的氣體透過膜 從溶劑中除去。3）高壓泵：對(duì)輸液泵的要求：密封性好、輸液流量穩(wěn) 定無脈動(dòng)、可調(diào)范圍寬、耐腐蝕。輸液泵種類：恒壓型和恒流型。恒壓泵(類似于風(fēng)箱)可迅速獲得高壓，適于柱的勻漿填充。但因泵腔體積大，在往復(fù)推動(dòng)時(shí)，會(huì)引起脈動(dòng)，且輸出流量隨色譜系統(tǒng)阻力（主要是柱填充物）變化而變化，現(xiàn)已較少使用。恒流型溶劑流量恒定，與柱填充情況無關(guān)，使用較多。有機(jī)械注射式和機(jī)械往復(fù)式兩種。應(yīng)用最多的是機(jī)械往復(fù)式恒流泵(見下圖。每分鐘往復(fù)25~100次，因此脈動(dòng)小。對(duì)流量變化敏感的檢測器也會(huì)有噪聲干擾，此時(shí)可連接一脈動(dòng)阻尼器)。2023/3/2713第十三頁，共40頁。4）梯度淋洗裝置：在分離過程中逐漸改變流動(dòng)相組成的裝置。如果只有一個(gè)泵，可采用低壓混合設(shè)計(jì)（將兩種或以上的溶劑按一定比例混合，再由高壓泵輸出）；如果有兩個(gè)或以上泵，調(diào)節(jié)各自的流量，在高壓下混合。馬達(dá)往復(fù)式拉動(dòng)密封溶劑球閥脈動(dòng)阻尼器到色譜柱機(jī)械往復(fù)柱塞泵示意圖2023/3/2714第十四頁，共40頁。2.進(jìn)樣系統(tǒng)與GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所產(chǎn)生的峰形展寬相對(duì)要小些。即，HPLC的展寬多因一些柱外因素引起。這些因素包括：進(jìn)樣系統(tǒng)、連接管道及檢測器的死體積。進(jìn)樣裝置包括兩種。1）隔膜注射進(jìn)樣：使用微量注射器進(jìn)樣。裝置簡單、死體積小。但進(jìn)樣量小且重現(xiàn)性差。2）高壓進(jìn)樣閥：目前最常用的為六通閥。由于進(jìn)樣量可由樣品管控制，因此進(jìn)樣準(zhǔn)確，重復(fù)性好，如圖。裝入樣品出口進(jìn)樣采樣環(huán)泵入溶劑進(jìn)色譜柱2023/3/2715第十五頁，共40頁。2023/3/2716第十六頁，共40頁。3.色譜柱1）對(duì)色譜柱的要求：內(nèi)壁光滑的優(yōu)質(zhì)不銹鋼柱，柱接頭的死體積盡可能小。柱長多為15~30cm，內(nèi)徑為4~5mm(尺寸排阻色譜柱常大于5mm，制備色譜柱內(nèi)徑更大)；2）柱的填充：主要采用勻漿法。根據(jù)使用勻漿試劑的性質(zhì)不同可分為：平衡密度法：即使溶劑密度和填充顆粒密度相近，此時(shí)顆粒沉降速度趨于0。常用的勻漿試劑有四氯乙烯、四溴乙烷和二碘甲烷等；非平衡密度法：當(dāng)采用粘度較大的試劑，如CCl4，CH3OH,丙酮，二氧雜環(huán)已烷、THF等。填充方法：填充時(shí)，按上述方法制作勻漿液，用流動(dòng)相充滿色譜柱及其延長管中，然后將勻漿液倒入勻漿填充器，在較高壓力下迅速將其注入色譜柱內(nèi)。要求填充速度快(防凝聚、沉降或結(jié)塊)、且無空氣進(jìn)入(影響填充均勻性)。2023/3/2717第十七頁，共40頁。4.檢測器液相色譜檢測器包括紫外吸收、熒光發(fā)射、示差折光和安培檢測器等。1）紫外檢測器其檢測原理和UV-Vis方法一樣。只是，此時(shí)所采用的吸收池為微量吸收池，通常其光程為2-10mm,體積約為1~10L。

HPLC分析中，約有80%的物質(zhì)可以在254nm或280nm處產(chǎn)生紫外吸收。因此該類檢測器應(yīng)用很廣。

在選擇測量波長時(shí)注意：溶劑必須能讓所選擇的光透過，即所選波長不能小于溶劑的最低使用波長。石英窗接色譜柱UV光電倍增管廢液2023/3/2718第十八頁，共40頁。波長可的松氟美松皮質(zhì)酮快速掃描—光電二極管陣列（PDA）檢測所獲得的三維色譜-光譜圖2023/3/2719第十九頁，共40頁。2）熒光檢測器許多有機(jī)物具熒光活性，尤其是芳香族化合物具有很強(qiáng)的活性。熒光檢測器是一種選擇性很強(qiáng)的檢測器，其靈敏度比UV檢測器高2~3個(gè)數(shù)量級(jí)。3）示差折光檢測器原理：利用兩束相同角度的光照射溶劑相和樣品+溶劑相，利用二者對(duì)光的折射率不同，其中一束（通常是通過樣品+溶劑相）光因?yàn)榘l(fā)生偏轉(zhuǎn)造成兩束光的強(qiáng)度差發(fā)生變化，將此差示信號(hào)放大并記錄，該信號(hào)代表樣品的濃度。為通用型檢測器，靈敏度為10-7g/mL。但對(duì)溫度變化敏感，且不適于梯度淋洗。光源調(diào)零光學(xué)零參比樣品平面鏡透鏡光電轉(zhuǎn)換記錄儀放大器遮光板2023/3/2720第二十頁，共40頁。4）安培檢測器由恒電位儀和一薄層反應(yīng)池（體積為1~5L）組成。如圖。該檢測器是利用待測物流入反應(yīng)池時(shí)在工作電極表面發(fā)生氧化或還原反應(yīng)，兩電極間就有電流通過，此電流大小與待測物濃度成正比。采用安培檢測器時(shí)，流動(dòng)相必須含有電解質(zhì)，且呈化學(xué)隋性。它最適于與反相色譜匹配。但此檢測器只能檢測具有電活性的物質(zhì)。接參比電極和對(duì)電極接色譜柱Teflon塑料塊1cm工作電極(Pt,Au,碳糊)2023/3/2721第二十一頁，共40頁。5）電導(dǎo)檢測器電導(dǎo)檢測器主要用于離子色譜的檢測。其原理是基于待測物在一些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)（電阻的倒數(shù)）變化來測量電離物質(zhì)的含量。電導(dǎo)檢測器的主要部件是電導(dǎo)池。其響應(yīng)受溫度影響較大，因此需要將電導(dǎo)池置于恒溫箱中。另外，當(dāng)pH>7時(shí)，該檢測器不夠靈敏。其它檢測器還包括：MS、IR、Evaporativelightscatteringdetector(光散射)、極譜等。2023/3/2722第二十二頁，共40頁。13.3HPLC流動(dòng)相和固定相簡介一、流動(dòng)相與GC流動(dòng)相不同，HPLC流動(dòng)相為溶劑，它既有運(yùn)載作用，又和固定相一樣，參予對(duì)組分的競爭，因此溶劑的選擇對(duì)分離十分重要。理想的溶劑應(yīng)有下列特性：1）對(duì)待測物具一定極性和選擇性；2）使用UV檢測器時(shí)，溶劑截止波長要小于測量波長(為什么？)； 使用折光率檢測器，溶劑的折光率要與待測物的折光率有較大 差別；3）高純度。否則基線不穩(wěn)或產(chǎn)生雜峰，同時(shí)可使截止波長增加；4）化學(xué)穩(wěn)定性好；5）適宜的粘度。粘度過高，柱壓增加；過低，易產(chǎn)生氣泡。二、固定相載體由于各種HPLC分離方法的流動(dòng)相均為液體，因此，HPLC通常是按照固定相載體或固定液的不同來分類的。2023/3/2723第二十三頁，共40頁。1.按承受壓力分剛性固體：SiO2為基質(zhì)，耐壓為7.0×108~1.0×109Pa?？芍瞥芍睆健⑿螤詈涂紫渡疃炔煌念w粒；主要用于吸附、分配和鍵合色譜；硬膠：以聚合物為基質(zhì)(常用苯乙烯與二乙烯苯交聯(lián)而成)，耐壓上限為3.5×108Pa,主要用于離子交換和尺寸排阻色譜。2.按孔隙深度分表面多孔型：以實(shí)心玻璃珠為基體，在基體表面覆蓋一層多孔活性材料(如硅膠、氧化鋁、離子交換劑、分子篩、聚酰胺等)。表面多孔型固定相的顆粒大(易裝柱)、多孔層厚度小且孔淺(滲透性好，出峰快)；但交換容量小。適于常規(guī)分離分析。全多孔型：全部由硅膠或氧化鋁微粒聚集而成，因顆粒極細(xì)，因而孔徑小、傳質(zhì)快、柱效高。特別適于復(fù)雜混合物的分離。3.按分離原理分：分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜等2023/3/2724第二十四頁，共40頁。13.4高效液相色譜方法各論按分離原理可將HPLC分為分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜和親和色譜等。現(xiàn)在作分別介紹。一、分配色譜1.原理：根據(jù)各待測物在互不相溶的兩溶液中的溶解度不同，因而具不同的分配系數(shù)。在色譜柱中，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，這種分配平衡需進(jìn)行多次，造成各待測物的遷移速率不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的過程。2.流動(dòng)相:HPLC分析中，為防止固定相的流失，流動(dòng)相與固定液應(yīng)盡量不互溶，或者說二者的極性相差越大越好。因此，根據(jù)流動(dòng)相與固定相極性的差別程度，可將液液色譜分為正相分配色譜（流動(dòng)相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分分離）和反相分配色譜（流動(dòng)相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分分離）。2023/3/2725第二十五頁，共40頁。3.固定相原則上，用于GC的固定相也可用于HPLC作固定相。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有機(jī)種，按極性由高到低為：,’-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEM)、三甲撐二醇(TMG)、十八烷(C18)、角鯊?fù)?SQ)。

根據(jù)涂漬方法的不同，可將固定相分為機(jī)械涂漬型和化學(xué)鍵合型，后者應(yīng)用更為廣泛。1）機(jī)械涂漬固定相：將固定液通過機(jī)械混合的方法涂漬到表面多孔型(0.5-1.5%涂布量)或全多孔型載體(5-10%涂布量)上形成的液液色譜固定相。該種固定相最大的不足是固定液易流失、分離穩(wěn)定性及重現(xiàn)性差，不適合梯度淋洗。

為減少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的前置柱，該柱涂有與分析柱相同但有更高含量的固定液，使流動(dòng)相進(jìn)入分析柱之前，預(yù)先被固定液飽和。2023/3/2726第二十六頁，共40頁。2）化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相是通過化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合在載體表面所形成的柱填充劑，具有穩(wěn)定、流失小、適于梯度淋洗等特點(diǎn)。這種固定相分離機(jī)理既不是簡單的吸附，也不是單一的液液分配，而是二者兼而有之。化學(xué)鍵合的表面覆蓋度決定哪種機(jī)理起主要作用。對(duì)多數(shù)鍵合相來說，以分配機(jī)理為主。通常，化學(xué)鍵合相的載體主要是硅膠（表面有硅醇基）：Si-O-R：對(duì)熱不穩(wěn)定、遇水、乙醇等強(qiáng)極性會(huì)水解，使酯鏈斷裂，因此只適于以不含水或醇的流動(dòng)相。Si-R(或Si-N)：不水解，熱穩(wěn)定性比硅酸脂好。但所用的格式反應(yīng)不方便。使用水溶液作流動(dòng)相時(shí)，其pH應(yīng)在4-8之間。Si-O-Si-R：不水解，熱穩(wěn)定性好，在pH2-8范圍內(nèi)對(duì)水穩(wěn)定。2023/3/2727第二十七頁，共40頁。Aschematicstructureofsilicagel...2023/3/2728第二十八頁，共40頁。正相鍵合色譜法固定相極性大硅膠（-OH或雙-OH），硅膠（-CN）流動(dòng)相極性小烴類+適量極性溶劑（CHCl3,CH3OH,CH3CN)分析對(duì)象多用于極性或中等極性化合物的分離，還可用于分離異構(gòu)體、極性不同的化合物以及不同類型的化合物反相鍵合色譜法固定相極性小硅膠（C18），硅膠（苯基）流動(dòng)相極性大甲醇-水，乙腈-水，水和無機(jī)鹽的緩沖液分析對(duì)象多用于多環(huán)芳烴（PAHs）等低極性化合物分離；改變流動(dòng)性配比，也可分離極性化合物3.正相和反相鍵合色譜法正相鍵合色譜中，隨流動(dòng)相極性增加，組分分配比k增加。在HPLC分析中，有時(shí)要在流動(dòng)相中加入適量的鹽(碳酸銨、四烷基銨鹽)或酸，為什么？答：都是為防止峰形拖尾。加入鹽類是為了減少待測物與鍵合相表面的殘留硅醇基作用；加入酸是抑制酸類待測物的離解，使其以游離酸在柱內(nèi)分離。何為正相色譜，何為反相色譜？2023/3/2729第二十九頁，共40頁。正相色譜低極性流動(dòng)相反相色譜高極性流動(dòng)相中等極性流動(dòng)相中等極性流動(dòng)相時(shí)間時(shí)間時(shí)間時(shí)間待測物極性：A>B>C正、反相色譜中極性和保留時(shí)間的關(guān)系2023/3/2730第三十頁，共40頁。時(shí)間，min固定相：C1固定相：C8固定相：C18硅膠-烷基鍵合相中烷基鏈長對(duì)反相色譜分離的影響1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯可見：反相鍵合色譜中，鍵合相碳鏈越長，分離效果越好。2023/3/2731第三十一頁，共40頁。二、離子交換色譜此法是利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)相結(jié)合，測定各類陰、陽離子的分離分析方法。它既適于無機(jī)離子，也適于有機(jī)物分離，如蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸等。1.原理：利用不同等測離子對(duì)固定相的親和能力（或離子交換能力）的差別來實(shí)現(xiàn)分離的。待測離子與離子交換樹脂固定相上帶電荷基團(tuán)或游離的離子發(fā)生可逆交換反應(yīng)：對(duì)陽離子，滯留順序?yàn)椋篎e3+,Ba2+,Pb2+,Sr2+,Ca2+,Ni2+,Cd2+,Cu2+,Co2+,Zn2+,Mg2+,UO22+,Tl+,Ag+,Cs+,Rb+,K+,NH4+,Na+,H+,Li+

對(duì)陰離子，滯留順序?yàn)椋簷幟仕岣?SO42-,C2O42-,I-,HSO4-,NO3-,CrO42-,Br-,SCN-,Cl-,HCOO-,CH3COO-,OH-,F-

2023/3/2732第三十二頁，共40頁。2.固定相按離子交換劑類型分四種：

按固定相制作方法可分為：多孔型離子交換樹脂(包括微孔型和大孔型)；表面多孔型(包括薄膜型）離子交換樹脂；離子交換鍵合型。類型官能團(tuán)陽離子交換劑強(qiáng)陽離子交換劑-SO3-弱陽離子交換劑-CO2-陰離子交換劑強(qiáng)陰離子交換劑-NR3+弱陰離子交換劑-NH2+2023/3/2733第三十三頁，共40頁。1）多孔型：聚苯乙烯+二乙烯苯交聯(lián)，分微孔型和大孔型。交換基團(tuán)多—交換容量大，穩(wěn)定。但易溶脹，傳質(zhì)慢、柱效低、分析速度慢。2）表面多孔型：薄膜型=惰性核+樹脂薄層(1-2m)多孔型=惰性核+硅膠微球+樹脂薄層?？朔硕嗫仔碗x子交換樹脂的不足，但交換容量低，柱子易超負(fù)荷。3）離子交換鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)將離子交換基團(tuán)鍵合到惰性載體表面。載體可以是薄殼玻珠，也可以是多孔硅膠微粒。使用后者為載體，可得到性能穩(wěn)定、耐壓、高柱效的柱子。微孔型大孔型微孔微孔薄膜型表面多孔型離子交換層惰性核惰性核離子交換劑硅膠層涂覆2023/3/2734第三十四頁，共40頁。3.流動(dòng)相離子交換色譜流動(dòng)相為鹽類緩沖溶液(有一定pH和離子強(qiáng)度)，通過改變pH、緩沖劑類型、離子強(qiáng)度、加入有機(jī)試劑和配位劑等條件來控制分配比k，改變交換劑的選擇性，進(jìn)而影響樣品待測物的分離。pH值：影響酸或堿的離解平衡，控制組分離子形式所占的分?jǐn)?shù)。當(dāng)組分以分子形式存在時(shí)，則不被保留；離子分?jǐn)?shù)越高，保留值越大。常用的有檸檬酸鹽、磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽和氨水等。離子強(qiáng)度I：對(duì)保留值的影響比pH更大。組分保留值受流動(dòng)相中鹽類總濃度控制。增加外加陰或陽離子將增加它們對(duì)—R+或—R-的競爭能力，使組分保留值減小。通過加入不同種類的鹽，可影響柱的選擇性，因?yàn)椴煌镔|(zhì)對(duì)交換劑的親和能力不同。有機(jī)溶劑：外加有機(jī)溶劑通常減小組分的保留值。其極性越小，保留值越小。常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、乙腈和二氧雜環(huán)已烷等。配離子L：當(dāng)大量L、組分X隨流動(dòng)相進(jìn)入柱后，發(fā)生配位劑交換：RM-L+XRM-X+L該法用于分離各種氨基酸或堿類。思考：離子交換色譜法中，流動(dòng)相常以無機(jī)鹽的緩沖液為流動(dòng)相。請(qǐng)問緩沖液的pH值及離子強(qiáng)度對(duì)分離各有何影響？2023/3/2735第三十五頁，共40頁。三、離子色譜離子色譜(IC)是70年代發(fā)展的新方法。其分離原理與離子交換色譜原理一樣，只是流出的各種離子用電導(dǎo)檢測器檢測。但由于流動(dòng)相都是強(qiáng)電解質(zhì)，其電導(dǎo)率比待測離子約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，這種強(qiáng)背景電導(dǎo)會(huì)完全掩蓋待測離子信號(hào)。為解決此問題，1975年Small提出，在離子交換柱之后，再串結(jié)一根抑制柱。該柱裝填與分離柱電荷完全相反的離子交換樹脂。通過分離柱后的樣品再經(jīng)過抑制柱，使具有高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變?yōu)榈捅尘半妼?dǎo)的流動(dòng)相，從而可用電導(dǎo)檢測器檢測各種離子的含量。例如：分析陽離子時(shí)，以無機(jī)酸為流動(dòng)相，抑制柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，則發(fā)生下列反應(yīng)： R+—OH+HCl(流動(dòng)相)——R+—Cl-+H2OR+—OH+MCl(待測物)——R+—Cl+M+OH- 可見，不僅大量酸轉(zhuǎn)化為低電導(dǎo)的水，而且待測離子轉(zhuǎn)化為具有更大淌度的堿。該法的不足之處在于：抑制柱要定期再生、譜峰在經(jīng)過抑制柱后會(huì)展寬，降低分離度。因此有人提出了使用電導(dǎo)率很