實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)六酵母菌形態(tài)觀察顯微計(jì)數(shù)法

實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)六酵母菌形態(tài)觀察顯微計(jì)數(shù)法第1頁(yè)/共16頁(yè)實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)六酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞鑒定微生物顯微鏡直接計(jì)數(shù)法第2頁(yè)/共16頁(yè)

一、目的要求1.學(xué)習(xí)自制水浸片法觀察酵母菌的方法2.觀察酵母菌形態(tài)和出芽生殖方式3.學(xué)習(xí)并掌握區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的染色方法4.了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能

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二、實(shí)驗(yàn)原理1.酵母菌可以用單純的水制成水浸片觀察，也可以用染色液制成水浸片觀察。2.美蘭是一種無(wú)毒性染液，有兩種形態(tài)還原型：無(wú)色氧化性：藍(lán)色活細(xì)胞因新陳代謝而有強(qiáng)還原力使美蘭從氧化型變?yōu)檫€原型；死細(xì)胞無(wú)此能力，而被美蘭染成藍(lán)色。以此可以區(qū)分死活細(xì)胞。3.測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。

第4頁(yè)/共16頁(yè)血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽構(gòu)成3個(gè)平臺(tái).中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)。第5頁(yè)/共16頁(yè)血球計(jì)數(shù)板第6頁(yè)/共16頁(yè)計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是25×16：計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)大方格（大方格用三線隔開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格；另一種是16×25：一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。第7頁(yè)/共16頁(yè)每毫升菌液中的菌數(shù)

=——×25（16）×10×1000×BA：5個(gè)中方格中的酵母菌數(shù)B：稀釋倍數(shù)A5第8頁(yè)/共16頁(yè)

三、實(shí)驗(yàn)材料1.菌種：啤酒酵母2.染色液：0.1%呂氏堿性美藍(lán)3.器材：載玻片，顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片、吸水紙、計(jì)數(shù)器、滴管、擦鏡紙。第9頁(yè)/共16頁(yè)（一）.酵母菌個(gè)體形態(tài)觀察用美蘭浸片法觀察啤酒酵母?jìng)€(gè)體形態(tài)及死活細(xì)胞區(qū)別四、內(nèi)容及方法第10頁(yè)/共16頁(yè)

1、在載玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培養(yǎng)液，蓋上蓋玻片，（勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再移動(dòng)蓋玻片）2、將制好的水浸片放置2分鐘后鏡檢。先用低倍鏡觀察，然后換用高倍鏡觀察釀酒酵母的形態(tài)和出芽情況，同時(shí)可以根據(jù)是否染上顏色來(lái)區(qū)別死、活細(xì)胞。3、染色半小時(shí)后，再觀察一下死細(xì)胞數(shù)是否增加。4、染色一小時(shí)后，再觀察一下死細(xì)胞數(shù)是否增加。第11頁(yè)/共16頁(yè)（二）、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法1.鏡檢計(jì)數(shù)室，熟悉計(jì)數(shù)器的使用方法2.對(duì)稀釋5倍的啤酒酵母懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)3.注意：（1）血球計(jì)數(shù)板必須洗干凈，勿刷（2）注意勿損壞計(jì)數(shù)器第12頁(yè)/共16頁(yè)計(jì)數(shù)原則：1、稀釋濃度要合適，每個(gè)小方格5-10個(gè)酵母菌2、壓線的酵母菌，一般計(jì)上和右3、對(duì)于出芽的菌體，如果芽體超過(guò)母體的一半，算2個(gè)菌第13頁(yè)/共16頁(yè)

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.酵母?jìng)€(gè)體形態(tài)，芽體（繪圖）2.計(jì)算死活細(xì)胞的比率，說(shuō)明呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時(shí)間對(duì)死活細(xì)