液相色譜培訓(xùn)二：理論基礎(chǔ)

液相色譜培訓(xùn)二、理論基礎(chǔ)1、基本概念2、基本參數(shù)1、基本概念1.1、色譜圖(chromatogram)--樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線(elutionprofile)。1.2、基線(baseline)--經(jīng)流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時間軸。1.3、噪音(noise)--基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。1、基本概念1.6、拖尾因子(tailingfactor，T)，用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetryfactor)或不對稱因子(asymmetryfactor)。1.7、峰寬（peakwidth，W)-峰兩側(cè)拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。1.8、峰高(peakheight，h)-峰的最高點至峰底的距離。1.9、峰面積(peakarea，A)-峰與峰底所包圍的面積。1、基本概念1.10、半峰寬（peakwidthathalf-height，Wh/2)-峰高一半處的峰寬。Wh/2＝2.355σ1.11、標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation，σ)-正態(tài)分布曲線x＝±1時（拐點）的峰寬之半。正常峰的拐點在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小，分散程度小、極點濃度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。2、基本參數(shù)2.1、定性參數(shù)（保留值）2.1.1、死時間(deadtime，t0)--不保留組分的保留時間。即流動相（溶劑）通過色譜柱的時間。2.1.2、死體積(deadvolume，V0)--由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。2、基本參數(shù)2.2、柱效參數(shù)2.2.1、理論塔板數(shù)(theoreticalplatenumber，N)--用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。N取決于固定相的種類、性質(zhì)（粒度、粒徑分布等）、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。2、基本參數(shù)N與柱長成正比，柱越長，N越大。用N表示柱效時應(yīng)注明柱長，如果未注明，則表示柱長為1米時的理論塔板數(shù)。（一般HPLC柱的N在1000以上。）2.2.2、理論塔板高度(theoreticalplateheight，H)--每單位柱長的方差。實際應(yīng)用時往往用柱長L和理論塔板數(shù)計算。2、基本參數(shù)2.3、相平衡參數(shù)2.3.1、分配系數(shù)(distributioncoefficientK)—在一定溫度下，化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的濃度之比。隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。在同一色譜條件下，樣品中K值大的組分在2、基本參數(shù)2.3.2、容量因子(capacityfactor，k)--化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的量之比。因此容量因子也稱質(zhì)量分配系數(shù)。容量因子的物理意義：表示一個組分在固定相中停留的時間（t'R）是不保留組分保留時間（t0）的幾倍。k＝0時，化合物全部存在于流動相中，在固定相中不保留，t'R＝0；k2、基本參數(shù)越大，說明固定相對此組分的容量越大，出柱慢，保留時間越長。容量因子與分配系數(shù)的不同點是：K取決于組分、流動相、固定相的性質(zhì)及溫度，而與體積Vs、Vm無關(guān)；k除了與性質(zhì)及溫度有關(guān)外，還與Vs、Vm有關(guān)。由于t'R、t0較VsVm易于測定，所以容量因子比分配系數(shù)應(yīng)用更廣泛。2、基本參數(shù)2.3.3、選擇性因子(selectivityfactor，α)--相鄰兩組分的分配系數(shù)或容量因子之比。要使兩組分得到分離，必須使α≠1。α與化合物在固定相和流動相中的分配性質(zhì)、柱溫有關(guān)，與柱尺寸、流速、填充情況無關(guān)。從本質(zhì)上來說，α的大小表示兩組分在兩相間的平衡分配熱力學(xué)性質(zhì)的差異，即分子間相互作用力的差異。2、基本參數(shù)是降低塔板高度，提高柱效。②增加選擇性。一般可以采取以下措施來改變選擇性：