月季的花藥培養(yǎng)課件

月季的花藥培養(yǎng)課件演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六

花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開(kāi)花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六1964年，印度科學(xué)家在培養(yǎng)茂業(yè)曼陀羅的花藥時(shí)，首次獲得了由花藥中的花粉粒發(fā)育而來(lái)的單倍體植株。說(shuō)明生殖細(xì)胞和體細(xì)胞一樣，在離體條件下也具有發(fā)育成完整植株的潛能。自20世紀(jì)60年代以來(lái)，世界上已有250多種高等植物的花藥培養(yǎng)獲得成功。我國(guó)已經(jīng)培育成功近50種植物的花粉再生植株，如小麥、玉米、大豆、甘蔗、橡膠等。現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六知識(shí)回顧單倍體育種的過(guò)程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體翻倍植株（2N）特點(diǎn)：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六課題背景現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)2花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六花粉發(fā)育過(guò)程現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六

花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）4個(gè)小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個(gè)小孢子（單細(xì)胞花粉粒）

花粉粒（雙核）有絲分裂單核雙核現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六小孢子母細(xì)胞花粉母細(xì)胞小孢子減數(shù)分裂有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核有分絲裂精子營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞（小孢子四分體時(shí)期單核居中期單核靠邊期雙核期）現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六小孢子母細(xì)胞小孢子花粉囊花藥

花粉粒（雙核期）成熟花粉現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六活動(dòng)1：閱讀“被子植物的花粉發(fā)育”，回答下列問(wèn)題：

1．花粉是___倍體的_______細(xì)胞.

被子植物的花粉是在

中由

經(jīng)過(guò)

分裂形成的。

2．花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時(shí)期：

減數(shù)單生殖（）分裂（）分裂小孢子母細(xì)胞（2n）（）時(shí)期（n）單核（）期（n）雙核期（）細(xì)胞核（n）（）細(xì)胞核（n）（）細(xì)胞（n）（）細(xì)胞（n）（）個(gè)精子(n)單核（）期（n）（）分裂減數(shù)小孢子四分體靠邊有絲居中生殖營(yíng)養(yǎng)花粉管2生殖有絲花藥花粉母細(xì)胞現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六胚狀體——在組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過(guò)程亦與合子胚類似；神奇的人工種子現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六:通過(guò)胚狀體途徑形成小植株煙草花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同，就同一種植物來(lái)說(shuō)親本的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率也有直接影響。②選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。因?yàn)椴⒉皇侨魏螘r(shí)期的花粉都可以經(jīng)過(guò)培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過(guò)程中，只有某一個(gè)時(shí)期對(duì)離體刺激敏感。①選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。三、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇：現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六一般來(lái)說(shuō)，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的時(shí)期為單核靠邊期。選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動(dòng)，又給材料的消毒帶來(lái)困難，且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時(shí)期的選擇④其它時(shí)期選擇的缺點(diǎn)現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開(kāi)放的花蕾。盛開(kāi)的或略微開(kāi)放的花，都不宜選作實(shí)驗(yàn)材料。⑥選擇完全未開(kāi)放花蕾的原因完全未開(kāi)放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒⑤挑選單核期花藥的方法現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六⑦花藥培養(yǎng)時(shí)間一般月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會(huì)比較好，可提高花粉的誘導(dǎo)成功率?，F(xiàn)在是20頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六

花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的水平和配比起決定作用。⑴誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA；⑵誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA代之。

親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理、接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率都有一定的影響。2、培養(yǎng)基的組成：3、其他因素：現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？討論：現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六（一）材料選取2、通過(guò)鏡檢來(lái)確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：?jiǎn)魏似趶幕ɡ倏矗和耆撮_(kāi)放的

花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）

花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）四、實(shí)驗(yàn)操作現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六（二）材料的消毒5、無(wú)菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無(wú)菌水清洗3、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，否則接種后容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織。2、接種注意：（三）接種和培養(yǎng)現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。長(zhǎng)出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。③注意：如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開(kāi)。現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六在花藥培養(yǎng)中，特別是通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核融合造成的）。4、鑒定和篩選現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、選材是否恰當(dāng)

選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。應(yīng)學(xué)會(huì)通過(guò)顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。2、無(wú)菌技術(shù)是否過(guò)關(guān)

如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說(shuō)明某些操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問(wèn)題。3、接種是否成功

如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株?，F(xiàn)在是28頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)操作被子植物的花粉發(fā)育花粉其他因素影響因素花粉發(fā)育經(jīng)歷的時(shí)期月季的花藥培養(yǎng)材料與培養(yǎng)基材料的選取產(chǎn)生途徑結(jié)果分析與評(píng)價(jià)消毒接種和培養(yǎng)課堂小結(jié)現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目相同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無(wú)需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有32頁(yè)\編輯于星期六自主測(cè)評(píng)7．基因型為AaBb的水稻（24條染色體）的花藥通過(guò)無(wú)菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)形成試管苗。（1）愈傷組織是花粉細(xì)胞不斷分裂后形成的不規(guī)則的細(xì)胞團(tuán)，愈傷組織形成中，必須從培養(yǎng)基中獲得

、

和小分子有機(jī)物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（2）要促進(jìn)花粉細(xì)胞分裂生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中應(yīng)有

和

兩種激素。（3）愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，再由芽發(fā)育成葉和莖。這一過(guò)程必須給予光照，其原因是①_________________

②

。（4）試管苗的細(xì)胞核中含有

條脫氧核苷酸鏈。（5）