乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討

乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測乙型肝炎（下稱乙肝）免疫學(xué)標(biāo)志物問世以來，由于其簡便、靈敏、特異性高的優(yōu)點，成為基層醫(yī)院對乙肝診斷分型療效觀察的主要手段，但由于其自身方法學(xué)上的限制，不同血清物質(zhì)變化及實驗室因素易造成各種錯誤結(jié)果。第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討1、樣本采集與處理的影響

1.1標(biāo)本嚴重溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴重溶血標(biāo)本禁用。

第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三對乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討1.2塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空采血管。并使用非抗凝標(biāo)本。

第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討1.3標(biāo)本凝固不全，正常血液采集后30min-2h開始凝固，18-24h血塊完全收縮。在工作中，有時為了快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊或附著在酶標(biāo)板孔壁內(nèi)使酶標(biāo)記物不易洗掉，易造成假陽（陰）性結(jié)果。因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管。第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討2、試劑的影響

2.1乙肝兩對半試劑廠家較多，不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別。資料顯示，不同廠家試劑的特異性和敏感性也不盡相同，有的廠家酶標(biāo)板孔間A值差＞15%，標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用劣質(zhì)試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性，選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討2.2不同方法學(xué)的檢測試劑會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實際工作中常用ELISA法檢測乙肝病毒表面抗原（HBsAg）結(jié)果為陰性，而化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外，還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測存在差異，建議選擇試劑廠家對試劑的制備應(yīng)該考慮亞型及濃度的問題。第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討

3、操作技術(shù)的影響

3.1加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性，直接影響檢測結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊，加大了交叉污染的機會，建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。

第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討3.2溫浴影響。96孔酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)特別，易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴格要求，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異。干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討

3.3洗滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié)，手洗條件一致性較差，對結(jié)果影響較大，半自動與全自動洗板機使用不當(dāng)也會影響結(jié)果。血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出結(jié)晶易使洗板機針孔全阻塞或半阻塞，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底，導(dǎo)致“花板”造成假陽性或假陰性。所以操作洗板機過程中要不時觀察洗板機針孔內(nèi)洗液的通暢狀況，及時糾正，洗板機不用時應(yīng)用去離子水清洗幾遍。。

第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討3.4肉眼判斷結(jié)果時，顯色淺不易觀察，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須使用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果，以保證結(jié)果一致性第11頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討4、HOOK效應(yīng)影響隨著ELISA一步法的應(yīng)用，一些標(biāo)本中抗原含量過高，產(chǎn)生HOOK效應(yīng)，影響檢測結(jié)果。采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減少HOOK反應(yīng)的發(fā)生。

第12頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討5、干擾物質(zhì)的影響有學(xué)者認為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子（RF）、甲胎蛋白（AFP）因子。某些自身抗體都會影響結(jié)果造成假陽性［4］。

第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討6、藥物的影響高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)。第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果影響因素的探討

為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1-2周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成分，形成一過性HBsAg陽性。這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。有方法能夠把它檢出，如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個月內(nèi)不應(yīng)作HBsAg檢測。總之，乙肝兩對半檢測必須排除各種影響因素的干擾，其能為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三由于乙肝病毒有一定的潛伏期，一般為6周到6個月，在這個時間段內(nèi)一般是檢查不出來的，因此，乙肝五項檢查時間至少應(yīng)該在接觸乙肝病毒后的6周后，另外，乙肝五項檢查不宜過于頻繁，而不同人群對乙肝五項在什么時候檢查最好也是不一樣的：第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三1.對于沒有感染乙肝病毒者，一般是三到五年檢查一次乙肝五項，最主要的就是看看體內(nèi)有沒有抗體，沒有抗體的話要及時注射乙肝疫苗。第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三2.對于無癥狀乙肝攜帶者來說，一般是每隔半年檢查一次，或者是在肝功能檢測有異常時進行乙肝五項檢查。第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三

3.對于正在接受治療的乙肝病人，乙肝五項檢查在醫(yī)生的指導(dǎo)建議下進行檢查，如果肝功能異?；蛞腋尾《綝NA陽性的患者最好3個月檢查一次乙肝五項。第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三4.嬰兒檢查乙肝五項時間，第一針注射后2周只有18%的人產(chǎn)生抗體，一個月后可達41%;注射第二針后80-90%的受種者可產(chǎn)生抗體，六個月后注射第三針，96%的人抗體陽轉(zhuǎn)，并保持幾年不變，專家建議寶寶可以在全程注射完乙肝疫苗后的20天之后去檢查兩對半。第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙肝五項檢查結(jié)果及臨床意義第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三乙肝五項臨床意義一、1，3，5：俗稱乙肝大三陽說明患者是慢性乙肝，有傳染性。二、1.5：急性乙肝感染階段或者是慢性乙肝表面抗原攜帶者，傳染性弱些。三、1，4，5：乙肝已趨向恢復(fù)，屬于慢性攜帶者，傳染性弱，長時間持續(xù)此種態(tài)可轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟?。四?，5：既往感染過乙肝，現(xiàn)在仍有免疫力，屬于不典型恢復(fù)期，也可能為急性乙肝感染期。五、4，5;既往有乙肝感染，屬于急性感染恢復(fù)期，也少數(shù)人仍有傳染性。六、5:過去有乙肝感染或現(xiàn)在正處于急性感染。七、2；以前打過乙肝疫苗或以前感染過乙肝。八、2，4，5：急性乙肝恢復(fù)期，以前感染過乙肝。九、1：急性感染早期或者慢性乙肝表面抗原攜帶者傳染性弱。十、1，4：慢性乙肝表面抗原攜帶者易轉(zhuǎn)陰或者是急性感染趨向恢復(fù)。十一、1，3;早期乙肝惑染或者慢性攜帶者，傳染性強。第23頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三一、乙肝五項常見結(jié)果感染模式 HBsAg