醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)課件：第13、14章

第13章分枝桿菌屬教學(xué)目的與要求（一）分枝桿菌屬共性和種類。（二）掌握結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)染色、致病物質(zhì)、免疫特點(diǎn)、結(jié)核菌素試驗(yàn)與防治原則。

（三）麻風(fēng)分枝的形態(tài)、染色和致病性。細(xì)長略彎曲的桿菌,有分枝生長的趨勢細(xì)胞壁含有大量的脂質(zhì)抗酸染色（+）致病性與菌體成分有關(guān)，引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽腫分枝桿菌共同特點(diǎn)分枝桿菌的分類

分類生長特性主要對人致病的分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌生長緩慢結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌Ⅰ組生長緩慢、光產(chǎn)色堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌Ⅱ組生長緩慢、暗產(chǎn)色瘰癘分枝桿菌Ⅲ組生長緩慢、不產(chǎn)色鳥-胞內(nèi)分枝桿菌Ⅳ組生長快速、偶發(fā)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌人工培養(yǎng)基上不生長第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis)第二節(jié)麻風(fēng)分枝桿菌(Mycobacteriumleprae)

一、生物學(xué)性狀

二、致病性

三、免疫性

四、微生物學(xué)檢查法

五、防治原則主線患者夏某，男，61歲，于5個月前開始無明顯誘因陣發(fā)性咳嗽，咳大量黃白色黏痰，無咯血及痰中帶血，無心慌及心前區(qū)疼痛，無頭痛、頭暈，但乏力盜汗，伴胸悶與活動后喘憋，飲食欠佳。近1個月上述癥狀有所加重，伴發(fā)熱，且午后明顯，體溫于38℃左右波動，發(fā)病后體重較前減輕3kg。查體：體溫37.5℃，雙肺呼吸音粗，右上肺可聞及濕性羅音。實(shí)驗(yàn)室檢查：血白細(xì)胞8.5×109/L，其中分葉核58%，淋巴細(xì)胞31%，單核5%，血沉為65mm/h。胸部CT顯示：右肺上葉可見大片狀、斑片狀陰影，內(nèi)有空洞，左肺可見多發(fā)斑片狀陰影。取咯痰行抗酸染色，鏡下可見紅色細(xì)長彎曲的桿菌。思考：引起本病可能的病原體是什么？還需做什么微生物學(xué)檢測以確診？該菌是如何傳播的？如何進(jìn)行特異性預(yù)防？

結(jié)核病的病原菌1882年德國細(xì)菌學(xué)家Koch證明全球性衛(wèi)生問題是艾滋病高發(fā)區(qū)人群的首要死因世界防治結(jié)核病日3月24日Mycobacteriumtuberculosis1993年WHO宣布結(jié)核病緊急狀態(tài)，這在WHO歷史上尚屬首次。

一般情況每秒鐘，一個人新感染結(jié)核桿菌。世界上三分之一的人目前已感染結(jié)核桿菌

我國居第二位。結(jié)核病是傳染性疾病中第一號殺手。Mycobacteriumtuberculosis形態(tài)與染色細(xì)長略彎，有時(shí)呈分枝狀；莢膜，無芽胞、鞭毛抗酸染色陽性一、生物學(xué)性狀Mycobacteriumtuberculosis★培養(yǎng)特性專性需氧生長緩慢營養(yǎng)要求高（羅氏培養(yǎng)基）不發(fā)酵糖類一、生物學(xué)性狀Mycobacteriumtuberculosis★耐干燥：黏附在塵埃上保持傳染性8－10d，在干燥的痰液中可存活6－8個月。耐酸堿：3％鹽酸、6％硫酸、4％氫氧化鈉作用30min不受影響耐一般消毒劑：對1:13000的孔雀綠有抵抗力

三耐抵抗力一、生物學(xué)性狀Mycobacteriumtuberculosis★怕濕熱：液體中62－63℃15分鐘或煮沸

怕紫外線：直接日光照射數(shù)小時(shí)即被殺滅怕酒精、石炭酸、來蘇兒怕抗癆藥四怕Mycobacteriumtuberculosis抵抗力一、生物學(xué)性狀★毒力變異：

牛型結(jié)核桿菌經(jīng)13年230代培養(yǎng)，制成卡介苗（減毒活菌苗），廣泛用于預(yù)防接種。L型變異：

結(jié)核桿菌經(jīng)青霉素、環(huán)絲氨酸、溶菌酶、異煙肼作用變成L型結(jié)核菌。耐藥性變異：

MDR-TBMycobacteriumtuberculosis變異性一、生物學(xué)性狀★致病因素?zé)o內(nèi)毒素、無外毒素、無侵襲性酶脂質(zhì)：索狀因子

磷脂蠟質(zhì)D

硫酸腦苷脂蛋白質(zhì)多糖二、致病性與免疫性Mycobacteriumtuberculosis★

索狀因子(cordfactor):分枝菌酸與海藻糖結(jié)合的糖脂。使結(jié)核分枝桿菌在液體培養(yǎng)基相互黏連平行排列呈索狀，破壞線粒體膜，影響細(xì)胞呼吸，抑制白細(xì)胞游走和引起慢性肉芽腫。Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性磷脂：促進(jìn)單核細(xì)胞增生，抑制蛋白酶的分解，引起結(jié)核結(jié)節(jié)、干酪樣壞死蠟質(zhì)D：是一種肽糖脂與分枝菌酸的復(fù)合物，佐劑，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)硫酸腦苷脂：抑制吞噬細(xì)胞中吞噬體與溶酶

體的融合Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性結(jié)核菌素(tuberculin):誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體，但無保護(hù)作用，與蠟質(zhì)D一起注入體內(nèi)引起變態(tài)反應(yīng)。分枝桿菌生長素（mycobictin）：

將環(huán)境中的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)到菌體內(nèi)與宿主機(jī)體競爭鐵。Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性所致疾病肺部感染：原發(fā)感染繼發(fā)感染肺外感染：腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖器官等

全身播散性結(jié)核

消化道結(jié)核

皮膚結(jié)核二、致病性與免疫性Mycobacteriumtuberculosis

1.原發(fā)感染

多見于兒童。隨飛沫和塵埃通過呼吸道進(jìn)入肺泡。胞內(nèi)寄生,結(jié)核結(jié)節(jié)、干酪性壞死、空洞。

原發(fā)灶內(nèi)結(jié)核桿菌可經(jīng)淋巴管擴(kuò)散到肺門淋巴結(jié)。90%隨著機(jī)體免疫力的建立，原發(fā)灶大多可纖維化和鈣化而自愈（常有潛伏、L型）。

極少數(shù)免疫力低下者經(jīng)淋巴、血流擴(kuò)散至全身，導(dǎo)致全身粟粒性結(jié)核或結(jié)核性腦膜炎。Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性

多見于成年人。大多為內(nèi)源性感染，極少由外源性感染所致。

由于機(jī)體已形成對結(jié)核分枝桿菌的特異性細(xì)胞免疫，對再次侵入的結(jié)核分枝桿菌有較強(qiáng)的局限能力，故繼發(fā)感染的特點(diǎn)是病灶局限，一般不累及鄰近的淋巴結(jié)，主要表現(xiàn)為慢性肉芽腫性炎癥，形成結(jié)核結(jié)節(jié)，發(fā)生纖維化或干酪樣壞死。病變常發(fā)生在肺尖部位。

2.繼發(fā)感染二、致病性與免疫性Mycobacteriumtuberculosis肺外感染

免疫力低下患者常見于腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖系統(tǒng)少數(shù)形成全身粟粒性結(jié)核或播散性結(jié)核二、致病性與免疫性Mycobacteriumtuberculosis結(jié)核桿菌豚鼠皮下注射再次10－14d局部潰爛不愈，附近淋巴結(jié)腫大，細(xì)菌擴(kuò)散至全身結(jié)核桿菌皮下注射豚鼠局部迅速產(chǎn)生淺潰爛，易愈合。免疫和變態(tài)反應(yīng)Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性結(jié)核菌素蛋白蠟質(zhì)D機(jī)體（巨噬細(xì)胞移動抑制因子被激活）注入產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)不產(chǎn)生免疫結(jié)核桿菌rRNA注入機(jī)體（結(jié)核桿菌生長抑制因子被激活）產(chǎn)生免疫不產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)完整結(jié)核桿菌注入激活以上兩種細(xì)胞因子產(chǎn)生免疫產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性細(xì)胞免疫：屬傳染免疫（infectionimmunity），又叫帶菌免疫，即只有結(jié)核桿菌在體內(nèi)才會有免疫力，一旦體內(nèi)結(jié)核菌被殺滅，免疫也隨之消失。

致敏T淋巴細(xì)胞：殺死有結(jié)核桿菌的靶細(xì)胞，同時(shí)釋放多種淋巴因子，吸引NK、T、Mφ等聚集炎癥部位，增強(qiáng)這類細(xì)胞的直接或間接殺菌活性。Mφ：吞噬消化、抑制繁殖、阻止擴(kuò)散甚至徹底消滅。以細(xì)胞免疫為主Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性★超敏反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌的蛋白質(zhì)與蠟質(zhì)D共同刺激T淋巴細(xì)胞，形成遲發(fā)型超敏反應(yīng)狀態(tài)。體內(nèi)致敏的T淋巴細(xì)胞再次遇到結(jié)核分枝桿菌時(shí)，即釋放出淋巴因子，引起強(qiáng)烈的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，形成以單核細(xì)胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)，容易發(fā)生干酷樣壞死，甚至液化形成空洞。

Mycobacteriumtuberculosis二、致病性與免疫性★是應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來測定機(jī)體對結(jié)核桿菌是否能引起變態(tài)反應(yīng)的一種試驗(yàn)。結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)Mycobacteriumtuberculosis★舊結(jié)核菌素（oldtuberculin，OT）：主要成分是通過將結(jié)核菌接種于甘油肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4-8周加熱濃縮過濾而成。純蛋白衍化物（purifiedproteinderivative，PPD）:

OT純?nèi)却姿徇^濾而成。試劑Mycobacteriumtuberculosis常規(guī)試驗(yàn)：OT或PPD

5單位皮內(nèi)注射前臂內(nèi)側(cè)硬結(jié)直徑48－72h方法Mycobacteriumtuberculosis陽性：0.5-1.5cm：感染過結(jié)核桿菌，或BCG接種成功。強(qiáng)陽性：＞1.5cm：可能有活動性結(jié)核病。陰性：＜0.5cm：未感染過結(jié)核；感染初期；老年人；嚴(yán)重結(jié)核患者或正患有其他傳染??；獲得性細(xì)胞免疫低下者意義Mycobacteriumtuberculosis★選擇卡介苗接種效果或免疫效果的測定。嬰幼兒結(jié)核病診斷的參考。測定腫瘤患者的非特異性細(xì)胞免疫功能。未接種卡介苗人群中結(jié)核病的流行病學(xué)調(diào)查。應(yīng)用Mycobacteriumtuberculosis★三、微生物學(xué)檢查標(biāo)本取材涂片染色鏡檢：抗酸染色培養(yǎng)法：羅氏固體培養(yǎng)基動物試驗(yàn)細(xì)菌學(xué)基因診斷：PCR抗體診斷Mycobacteriumtuberculosis★四、特異性防治卡介苗預(yù)防接種對象：新生兒和結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性的兒童免疫時(shí)間：3-5年藥物治療早期、聯(lián)合、足量、規(guī)范使用抗結(jié)核藥物。常用藥物有異煙肼、利福平、鏈霉素、對氨水楊酸、乙胺丁醇等。Mycobacteriumtuberculosis★下列細(xì)菌中繁殖最慢的是：A.大腸埃希菌B.丙型鏈球菌C.腦膜炎奈瑟菌D.結(jié)核分枝桿菌E.肺炎鏈球菌結(jié)核分枝桿菌常用的培養(yǎng)基是：A.沙保弱培養(yǎng)基B.羅氏培養(yǎng)基C.皰肉培養(yǎng)基D.巧克力色培養(yǎng)基E.亞碲酸鉀培養(yǎng)基細(xì)胞壁含脂類最多的細(xì)菌是：A.結(jié)核分枝桿菌B.白喉棒狀桿菌C.衣氏放線菌D.霍亂弧菌E.幽門螺桿菌不以內(nèi)毒素或外毒素為致病物質(zhì)的細(xì)菌是：A.白喉棒狀桿菌B.炭疽桿菌C.結(jié)核分枝桿菌D.綠膿假單胞桿菌E.布氏桿菌第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis)第二節(jié)麻風(fēng)分枝桿菌(Mycobacteriumleprae)

一、生物學(xué)性狀

二、致病性

三、免疫性

四、微生物學(xué)檢查法

五、防治原則主線麻風(fēng)病的病原菌:慢性傳染病世界各地均有報(bào)道主要分布在亞、非和拉丁美洲主要侵犯神經(jīng)、皮膚與黏膜,晚期侵犯晚期可侵入深部組織和臟器，形成肉芽腫，家庭內(nèi)傳播多見Mycobacteriumleprae形態(tài)與染色細(xì)長略彎曲無芽胞，無莢膜，無鞭毛抗酸染色陽性典型的胞內(nèi)寄生菌

泡沫細(xì)胞（麻風(fēng)細(xì)胞）唯一不能人工培養(yǎng)的細(xì)菌Mycobacteriumleprae★Mycobacteriumleprae致病

結(jié)核樣型麻風(fēng)瘤型麻風(fēng)

界線類麻風(fēng)★微生物學(xué)診斷顯微鏡檢查PCRMycobacteriumleprae麻風(fēng)分枝桿菌的特性不包括：A.抗酸染色陽性B.專性需氧，在人工培養(yǎng)基中生長緩慢C.胞內(nèi)寄生D.以家庭內(nèi)傳播多見E.患者標(biāo)本中有麻風(fēng)細(xì)胞，有診斷和鑒別意義第14章嗜血桿菌屬教學(xué)目的與要求掌握流感嗜血桿菌的形態(tài)、染色、培養(yǎng)特性、所致疾病及預(yù)防

。嗜血桿菌屬（Haemophilus）

流感嗜血桿菌（H.influenzae）杜克嗜血桿菌（H.ducreyi）埃及嗜血桿菌（H.aegyptius）副流感嗜血桿菌（H.parainfluenzae）嗜沫嗜血桿菌（H.aphrophilus）

溶血性嗜血桿菌（H.paraphrophilus）

*原發(fā)感染：引起急性化膿性感染

化膿性腦膜炎、鼻咽炎、咽喉會厭炎、心包炎

化膿性關(guān)節(jié)炎等，嚴(yán)重的引起菌血癥，以小兒

多見。

*

繼發(fā)感染：多是內(nèi)源性感染，以成人多見。流行性感冒麻疹百日咳結(jié)核病繼發(fā)于臨床表現(xiàn)慢性支氣管炎中耳炎鼻竇炎流感嗜血桿菌所致疾病

：★H.influenzae一、生物學(xué)性狀

G－小桿菌，多形性，有毒菌株形成莢膜★培養(yǎng)基中需加入血液，以提供X因子和V因子

（巧克力色培養(yǎng)基）

X因子-血紅素

V因子-輔酶Ⅰ或輔酶Ⅱ

菌落光滑、無色透明、露滴狀

CO2培養(yǎng)

“衛(wèi)星現(xiàn)象”H.influenzae一、生物學(xué)性狀★抵抗力：弱，對熱和干燥均敏感根據(jù)