生物樣本庫(kù)建立與管理

生物標(biāo)本庫(kù)

(biologicalspecimenbank,BSB):是指標(biāo)準(zhǔn)化地收集、保存用于各種研究的正?；虿±順?biāo)本，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。

第一頁(yè)，共22頁(yè)。重要性

人體生物樣本為聯(lián)系日益發(fā)現(xiàn)的分子（基因、蛋白等）信息與臨床疾病關(guān)系的橋梁。尤其應(yīng)用于：鑒定、驗(yàn)證藥物靶點(diǎn)；研究疾病發(fā)病機(jī)制；疾病相關(guān)分子標(biāo)記物篩選；分子分型與個(gè)性化治療等。標(biāo)準(zhǔn)化生物樣品庫(kù)是基因組、功能基因組等生命科學(xué)研究與生物醫(yī)藥研發(fā)的關(guān)鍵源頭，是眾多重要基因、蛋白等科研成果快速產(chǎn)業(yè)化、應(yīng)用到臨床（分子分型檢測(cè)、診斷與疾病的預(yù)測(cè)、預(yù)防及個(gè)性化治療等的重要保證，毫無(wú)疑問的也是生命科學(xué)與生物醫(yī)藥技術(shù)自主創(chuàng)新體系中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)與保證。第二頁(yè)，共22頁(yè)。有調(diào)查顯示，多數(shù)公眾對(duì)于利用外科手術(shù)切除組織進(jìn)行腫瘤發(fā)病機(jī)制或分子標(biāo)志物的研究持肯定態(tài)度，并認(rèn)為這是對(duì)手術(shù)切除組織的最好利用。在一項(xiàng)對(duì)住院、門診、急診5000例患者的隨機(jī)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，89.3％的患者同意將其樣本的遺傳信息用于研究，但要求采用匿名形式。美國(guó)的Vanderbilt大學(xué)醫(yī)學(xué)中心2005年啟動(dòng)了一項(xiàng)旨在將準(zhǔn)備丟棄的患者血樣再收集以建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)計(jì)劃。該計(jì)劃估計(jì)，未來5年內(nèi)可收到30萬(wàn)份以上的患者血樣，以進(jìn)行疾病的基因型與表型相關(guān)性分析。越是大規(guī)模的人群遺傳學(xué)研究越是需要大樣本的生物資源，故得到社會(huì)公眾的認(rèn)可很有必要。目前，許多國(guó)家的大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)已建立組織樣本庫(kù)與數(shù)據(jù)庫(kù)，但因遺傳信息屬個(gè)人隱私，應(yīng)當(dāng)受到保護(hù)，也招致不少擔(dān)憂。1998至2002年間就曾有8個(gè)國(guó)際機(jī)構(gòu)提出建立以群體為基礎(chǔ)的遺傳資源庫(kù)計(jì)劃，主要內(nèi)容是收集與儲(chǔ)存血液及組織等生物樣本，并收集與這些樣本相關(guān)聯(lián)的醫(yī)學(xué)與生活方式等信息。該計(jì)劃的共同目標(biāo)是通過此項(xiàng)計(jì)劃的實(shí)施，闡明某些疾病的遺傳易感性和基因的復(fù)雜性，從而達(dá)到改善人類健康與醫(yī)學(xué)診療水平的目的。但由于倫理學(xué)、涉及個(gè)人隱私等原因，該計(jì)劃在一些國(guó)家擱淺。公眾對(duì)于腫瘤組織庫(kù)建立的認(rèn)知程度第三頁(yè)，共22頁(yè)。生物樣本庫(kù)政策法規(guī)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

倫理規(guī)范ISO標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室安全臨床實(shí)驗(yàn)室倫理運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOPs）

質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)樣本采集樣本處理樣本質(zhì)量檢驗(yàn)樣本儲(chǔ)存樣本運(yùn)輸DNA質(zhì)量鑒定、RNA質(zhì)量鑒定、蛋白質(zhì)質(zhì)量鑒定知情同意書質(zhì)量審查樣本運(yùn)輸樣本轉(zhuǎn)移協(xié)議倫理委員會(huì)倫理審查第四頁(yè)，共22頁(yè)。ISO15189:2003醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求CNAS-CL02醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則ISO/IEC17025:2005檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求CNAS-CL01檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則ISO9001:2008/GBT19001-2008質(zhì)量管理系統(tǒng)要求GB/T1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則ISO標(biāo)準(zhǔn)第五頁(yè)，共22頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室安全GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

CNAL/AC30-2005實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則WS/T233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則GB50346-2004生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范第六頁(yè)，共22頁(yè)。臨床實(shí)驗(yàn)室GB/T20468-2006臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制指南GB/T20469-2006臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)總則GB/T20470-2006臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)要求WS/T102-1998臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類與代碼WS/T224-2002真空采血管及其添加劑WS/T225-2002臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理WS/T227-2002臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求WS/T228-2002定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià)WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)應(yīng)用WS/T249-2005臨床實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則WS/T250-2005臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的要求WS/T251-2005臨床實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則WS/T255-2005臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考測(cè)量實(shí)驗(yàn)室第七頁(yè)，共22頁(yè)。赫爾辛基宣言涉及人類為研究對(duì)象的生物醫(yī)學(xué)研究了國(guó)際倫理方針指南關(guān)于DNA序列申請(qǐng)專利的聲明：專利關(guān)于早期發(fā)布原始序列數(shù)據(jù)有關(guān)專利申請(qǐng)問題的聲明關(guān)于DNA取樣的聲明：控制與獲取世界人類基因組與人權(quán)宣言涉及人體的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）人類基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則關(guān)于利益共享的聲明關(guān)于基因治療的聲明關(guān)于人類基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的聲明國(guó)際涉及人類的生物醫(yī)學(xué)研究倫理準(zhǔn)則人類遺傳數(shù)據(jù)國(guó)際宣言綱要人體生物醫(yī)學(xué)研究國(guó)際倫理指南倫理第八頁(yè)，共22頁(yè)。物流術(shù)語(yǔ)液氮生物容器中國(guó)民用航空危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理規(guī)定危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則運(yùn)輸?shù)诰彭?yè)，共22頁(yè)。血液樣本采集操作規(guī)程組織樣本采集操作規(guī)程樣本采集生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存研究成功的關(guān)鍵要求在采集和儲(chǔ)存過程中不能受到“污染”

儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)第十頁(yè)，共22頁(yè)。DNA提取和純化操作規(guī)程RNA提取和純化操作規(guī)程蛋白質(zhì)提取和保存操作規(guī)程細(xì)胞系建立操作規(guī)程血液樣本處理操作規(guī)程樣本處理第十一頁(yè)，共22頁(yè)。條碼標(biāo)簽設(shè)定使用規(guī)范樣本儲(chǔ)存不同生物樣本對(duì)于低溫儲(chǔ)存的溫度要求腫瘤組織庫(kù)建立中一個(gè)非常重要的問題是生物樣本對(duì)于儲(chǔ)存溫度的要求。多數(shù)科學(xué)家認(rèn)為。低溫有利于長(zhǎng)期保存生物大分子的完整性，如經(jīng)高溫加工處理的石蠟包埋組織塊內(nèi)的RNA分子會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重降解。理論上講，組織儲(chǔ)存溫度越低越好。理想的組織儲(chǔ)存環(huán)境是大型液氮罐，但并非所有醫(yī)療中心均有這樣的設(shè)備，因此，目前仍以低溫冰箱儲(chǔ)存為主。由于多數(shù)機(jī)構(gòu)手術(shù)取材地點(diǎn)與組織標(biāo)本庫(kù)并不在同一樓內(nèi)，組織標(biāo)本的轉(zhuǎn)移、運(yùn)輸也需一定時(shí)間，故各單位可酌情配備一些不太昂貴的組織儲(chǔ)存設(shè)備。如活檢組織在-20℃環(huán)境中至少可保存6個(gè)月：在-40℃的環(huán)境中則可保存3年；若將組織保存在高濃度甘油中，則在-10℃～0的條件下也可保存2年。若將組織保存在高濃度甘油中，再儲(chǔ)存于-80℃的低溫冰箱中，則可長(zhǎng)期保存，但這些組織不適用于RNA等研究。此外，組織標(biāo)本庫(kù)建立中提倡采用不間斷性電源設(shè)備，以確保標(biāo)本庫(kù)內(nèi)標(biāo)本在短時(shí)斷電情況下不會(huì)受到影響。腫瘤組織樣本一般在離體后應(yīng)盡快收集，并保存于-80℃的深低溫冰箱內(nèi)：血液樣本與其他臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)一起采集，采集后先置于4℃冰箱內(nèi)保存，盡量在3～5h內(nèi)離心，分離血清、血漿，最長(zhǎng)不得超過12h。分離獲得的血清、血漿則需儲(chǔ)存于-40℃的環(huán)境中，血清或血漿分離時(shí)一般予2500r／min離心15min。血液的離心沉淀物或提取后的DNA樣本可長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-145℃下。將組織樣本存放于-196℃的液氮中則可儲(chǔ)存多年，但若置于-80℃下，則其生物大分子活性保持時(shí)間會(huì)明顯縮短。第十二頁(yè)，共22頁(yè)。低溫凍存被公認(rèn)為是組織與器官長(zhǎng)期保存最有效的方法之一。其原理是通過降低細(xì)胞的代謝率起到保護(hù)組織細(xì)胞的作用。但樣本庫(kù)內(nèi)的生物樣本是否可被持續(xù)使用還依賴于對(duì)儲(chǔ)存樣本的質(zhì)量控制，該項(xiàng)工作主要由病理學(xué)家進(jìn)行。病理學(xué)家需對(duì)提取的組織先進(jìn)行病理切片觀察．若其中腫瘤成分超過75％則認(rèn)為質(zhì)量良好，如不足65％則應(yīng)從研究中剔除。對(duì)樣本得以儲(chǔ)存的病例應(yīng)進(jìn)行定期臨床隨訪，以便獲得疾病治療效果、臨床進(jìn)展及是否生存等重要資料。從有關(guān)單位獲得的知情同意書看，92％的患者同意出院以后接受隨訪。當(dāng)前發(fā)展起來的分子生物學(xué)新技術(shù)大多要求研究樣本中的核酸或蛋白質(zhì)保存完好，故對(duì)于組織樣本質(zhì)量要求很高。目前，國(guó)內(nèi)外大型腫瘤組織庫(kù)以采用一80℃深低溫冰箱儲(chǔ)存為主，但在這樣的低溫環(huán)境下生物大分子活力究竟能保存多久仍無(wú)定論。眾多研究顯示，長(zhǎng)期凍存對(duì)于DNA大分子的穩(wěn)定性影響不大，甚至石蠟包埋組織塊中的DNA也可進(jìn)行分子生物學(xué)分析。RNA分子則易被廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)、皮膚、唾液、汗液及周圍環(huán)境中的RNA酶所降解。使用液氮保存是保存RNA活性的最理想方法，當(dāng)溫度降至液氮溫度時(shí)，細(xì)胞組織中所有的生物化學(xué)、生物物理過程均處于停止?fàn)顟B(tài)但限于空間及經(jīng)費(fèi)等原因，大型液氮儲(chǔ)藏罐或液氮冰箱尚難以推廣普及。對(duì)于組織RNA的質(zhì)量分析主要依據(jù)28S與18S的比值進(jìn)行，比值如在2左右認(rèn)為質(zhì)量好，比值小于l則認(rèn)為RNA已降解。有關(guān)長(zhǎng)期低溫凍存對(duì)于蛋白質(zhì)分子的影響還缺乏系統(tǒng)性研究報(bào)道，需各生物樣本庫(kù)在今后的質(zhì)量控制分析研究中不斷積累經(jīng)驗(yàn)加以闡明。生物樣本長(zhǎng)期保存的質(zhì)量控制第十三頁(yè)，共22頁(yè)。倫理委員會(huì)知情同意書分為兩部分。第一部分知情部分：1．項(xiàng)目的介紹項(xiàng)目名稱、研究者、申辦者、撰寫版本號(hào)或日期。聲明受試者參加的項(xiàng)目是一個(gè)試驗(yàn)性研究工作。闡明研究的目的。描述試驗(yàn)的過程。說明研究中受試者將參與的時(shí)間和期限。隨訪的次數(shù)和過程。入選標(biāo)準(zhǔn)/排除標(biāo)準(zhǔn)。2．說明參與本研究可能帶來的益處：受試者本人及社會(huì)群體3．應(yīng)說明研究的保密性，受試者的記錄將被妥善保管，作保密處理，但同時(shí)也應(yīng)告知受試者資料有可能會(huì)接受有關(guān)部門(倫理委員會(huì)、食品藥品監(jiān)督管理局)的監(jiān)察，但不得對(duì)外披露其內(nèi)容。4．明確試驗(yàn)過程中聯(lián)系醫(yī)生的姓名和聯(lián)系辦法，他將回答受試者所有關(guān)于試驗(yàn)的問題，并能當(dāng)受試者出現(xiàn)緊急情況時(shí)及時(shí)聯(lián)系。5．闡明受試者的權(quán)利（自由參加和退出、知情、同意），參加試驗(yàn)是自愿的，即使中途退出試驗(yàn)也不會(huì)有權(quán)益上的損失或影響治療。6．研究者或指定的研究人員將對(duì)受試者作詳細(xì)說明，以使其充分了解以上內(nèi)容，給受試者充分時(shí)間考慮并作出是否參加研究的決定。7．該試驗(yàn)方案經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施，試驗(yàn)過程中有任何違反研究方案的情況，受試者可以直接向倫理委員會(huì)咨詢。第二部分同意部分：1．我已認(rèn)真閱讀該知情同意書，研究人員已經(jīng)向我做了詳盡說明并解答了我的關(guān)問題，我已充分知曉以上內(nèi)容，同意參加研究。受試者簽字(印刷體)(手寫體)，日期(手寫體)，受試者法定代理人簽字(必要時(shí)),(印刷體)。2．我或我的研究人員已向該受試者充分解釋和說明了本研究的目的、操作過程以及受試者參加該試驗(yàn)可能存在的風(fēng)險(xiǎn)和潛在的利益，并滿意地回答了受試者的所有有關(guān)問題。主要研究者或研究者指定的研究人員(對(duì)受試者進(jìn)行告知者)簽名(印刷體)(手寫體)日期。知情同意書第十四頁(yè)，共22頁(yè)。1．科學(xué)、醫(yī)學(xué)和法律詞匯要明確準(zhǔn)確，前后一致；

2．語(yǔ)句短小精煉，避免長(zhǎng)句；

3．段落短小，觀點(diǎn)明確；

4．盡量使用陳述句，人稱代詞應(yīng)該明確身份；

5．使用清晰易讀的字體打印，一般使用5號(hào)字體；

6．內(nèi)容使用的語(yǔ)言應(yīng)該簡(jiǎn)明易懂，具有可讀性，一般應(yīng)適合初中畢業(yè)者的閱讀能力；

7．避免使用簡(jiǎn)寫字或首字母縮寫的詞匯；

8．避免使用有開脫研究者或研究機(jī)構(gòu)責(zé)任的語(yǔ)言；不稱“病人”或“患者”，知情同意書中的所有參加試驗(yàn)的志愿者稱為“受試者”.知情同意書的撰寫要求范例第十五頁(yè)，共22頁(yè)。倫理委員會(huì)由國(guó)內(nèi)外倫理研究者，律師，醫(yī)生，科研工作者等共同組成。倫理委員會(huì)成員應(yīng)有足夠的權(quán)力和獨(dú)立性，他們參與到樣本庫(kù)建設(shè)的每一個(gè)子項(xiàng)目中來，重點(diǎn)探討樣本庫(kù)建設(shè)的子項(xiàng)目對(duì)社會(huì)倫理帶來的影響，并給與合理適當(dāng)?shù)慕ㄗh。解決樣本庫(kù)建設(shè)和利用過程中的倫理法律問題，并為國(guó)家制定相關(guān)法律法規(guī)和決策提供依據(jù)。由于倫理學(xué)是一門不斷發(fā)展的學(xué)科，倫理和法律委員會(huì)的工作也會(huì)隨著樣本庫(kù)項(xiàng)目的建設(shè)逐漸深入。倫理委員會(huì)審核意見書第十六頁(yè)，共22頁(yè)。1、所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。2、組織標(biāo)本或血液等體液標(biāo)本獲取前需經(jīng)患者知情同意。3、需向手術(shù)室與病理室遞交收集標(biāo)本的申請(qǐng)，并標(biāo)注標(biāo)本留取與存放的注意事項(xiàng)。4、確保手術(shù)切除標(biāo)本離體后在最短時(shí)間內(nèi)行低溫凍存。5、手術(shù)切除的大體標(biāo)本應(yīng)先由病理醫(yī)師檢查外觀。并作初步測(cè)量記錄，然后再切取組織。6、患者生物樣本應(yīng)當(dāng)優(yōu)先確保外科病理診斷需求，標(biāo)本直徑≤1cm時(shí)不宜切取組織凍存，只能用4％甲醛溶液固定后進(jìn)行組織切片診斷：對(duì)于直徑>1cm的腫瘤。則分別切取腫瘤和盡量遠(yuǎn)離腫瘤的正常區(qū)域(視外科手術(shù)切除范圍而定，空腔器官手術(shù)可取距切緣至少3cm以上的非腫瘤組織)：同時(shí)，應(yīng)留取一部分組織采用4％甲醛溶液固定后作組織切片．以供凍存標(biāo)本的質(zhì)控分析。標(biāo)本庫(kù)建立的基本工作流程第十七頁(yè)，共22頁(yè)。7、高質(zhì)量的組織樣本庫(kù)要求病變組織從手術(shù)離體到冷凍保存的時(shí)間間隔不應(yīng)超過30min。這對(duì)于保持生物大分子DNA、RNA和蛋白質(zhì)的完整性及對(duì)激素受體等研究十分重要。8、切取的組織最好先放人液氮罐內(nèi)，然后轉(zhuǎn)入深低溫冰箱內(nèi)儲(chǔ)存。9、所有入庫(kù)組織或血液等體液樣本均應(yīng)同時(shí)收集患者的各種臨床病理學(xué)等詳盡個(gè)人信息。10、建立電子化數(shù)據(jù)庫(kù)及用戶友好型閱讀與輸入界面，但因患者信息屬需要保護(hù)的隱私，故信息庫(kù)的使用與管理需經(jīng)授權(quán)。11、標(biāo)本與數(shù)據(jù)信息要編號(hào)管理，美國(guó)等國(guó)的大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)的標(biāo)本庫(kù)已采用條形碼管理體制，更加科學(xué)及電子化。12、各單位可根據(jù)自身研究與學(xué)科建設(shè)需要制定收集標(biāo)本的種類，如可建立多腫瘤標(biāo)本庫(kù)、頭頸部腫瘤標(biāo)本庫(kù)、肝膽胰腫瘤標(biāo)本庫(kù)、胃腸道腫瘤標(biāo)本庫(kù)、乳腺癌或卵巢癌標(biāo)本庫(kù)等。國(guó)外各標(biāo)本庫(kù)在建立初期主要收集大量腫瘤及對(duì)應(yīng)的正常組織，之后逐步增加體液如血液、尿液及腦脊液等樣本.標(biāo)本庫(kù)建立的基本工作流程第十八頁(yè)，共22頁(yè)。生物樣本和相關(guān)數(shù)據(jù)的使用1)制定明確的生物樣本使用指導(dǎo)原則，包括臨床數(shù)據(jù)的共享，應(yīng)符合倫理和相關(guān)法規(guī)。同時(shí)應(yīng)考慮利用生物樣本開展科學(xué)研究的特殊性，指導(dǎo)原則應(yīng)具有一定的靈活性。2)確保課題研究者能及時(shí)、公正、合理的使用生物樣本和相關(guān)的臨床資料，無(wú)須承擔(dān)過多的行政管理費(fèi)用。樣本的使用按下列程序進(jìn)行:研究計(jì)劃的科學(xué)性評(píng)價(jià)；研究者簽署有關(guān)生物樣本和相關(guān)資料的保密協(xié)議；樣本轉(zhuǎn)運(yùn)協(xié)議；研究者或課題組的科學(xué)記錄；研究符合倫理和法規(guī)；能夠支付所使用生物樣本的費(fèi)用。除此之外，也應(yīng)對(duì)使用生物樣本和資料與預(yù)期研究結(jié)果的相關(guān)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于樣本使用不當(dāng)或過量使用的問題也應(yīng)考慮，通過協(xié)調(diào)解決。指導(dǎo)原則適用于所有新采集和現(xiàn)存的樣本。使用生物樣本支付成本費(fèi)用是合理的，收取的費(fèi)用應(yīng)僅限于補(bǔ)償和推廣應(yīng)用的費(fèi)用。如果生物樣本庫(kù)由于資金缺乏或其他原因不能進(jìn)行生物樣本的保存并提供高質(zhì)量的樣本供使用，就必需關(guān)閉。對(duì)已保存的樣本應(yīng)按指導(dǎo)原則進(jìn)行處理。要明確樣本采集工作人員的職責(zé)的權(quán)力，并通過法規(guī)授予相應(yīng)的權(quán)限，樣本使用應(yīng)避免特權(quán)，尤其是使用樣本和資料必須按指導(dǎo)原則執(zhí)行，包括監(jiān)