細(xì)菌檢驗技術(shù)

第一節(jié)細(xì)菌形態(tài)檢驗技術(shù)第一頁，共92頁。一、細(xì)菌染色標(biāo)本鏡檢（一）染色標(biāo)本檢查的基本程序

1、涂片2、干燥3、固定4、染色染料種類：堿性染料、酸性染料、中性染料，堿性染料最常用

第二頁，共92頁。（1）單染法用一種染料進(jìn)行染色，可觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)和排列，但不能用于鑒別細(xì)菌。如：亞甲藍(lán)染色法（2）復(fù)染法用兩種或兩種以上的染料進(jìn)行染色，不僅可以觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)和排列。還可用于鑒別細(xì)菌，又稱為鑒別染色。鑒別染色—革蘭染色抗酸染色第三頁，共92頁。

復(fù)染法的一般步驟

初染－→媒染－→脫色－→復(fù)染第四頁，共92頁。5、鏡檢顯微鏡：光學(xué)顯微鏡所用放大倍數(shù)：10×100＝1000所用鏡頭：油鏡頭鏡油：香柏油或石蠟油香柏油折光率（n＝1.515）與玻片折光率（n＝1.52）接近顯微鏡使用完畢須擦拭鏡頭。第五頁，共92頁。（二）革蘭染色法

1、染液組成：結(jié)晶紫染液、盧戈碘液、95％乙醇、稀釋復(fù)紅

第六頁，共92頁。2、染色方法標(biāo)本涂片，固定結(jié)晶紫初染（1分鐘）→碘液媒染（1分鐘）→95%乙醇脫色（30秒）→復(fù)紅復(fù)染（3-5分鐘）→第七頁，共92頁。3、染色結(jié)果蘭陽性菌（G+）——紫色；革蘭陰性菌(G-)——紅色。第八頁，共92頁。第九頁，共92頁。4、染色原理（1）滲透學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)G﹢菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性屏障，當(dāng)乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，復(fù)紅復(fù)染后呈紅色。第十頁，共92頁。第十一頁，共92頁。（2）化學(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸鎂鹽有關(guān)（3）等電點學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)第十二頁，共92頁。5、臨床意義鑒別細(xì)菌選擇用藥理解細(xì)菌的致病作用第十三頁，共92頁。6、影響因素（1）操作因素★涂片的厚薄★脫色時間的長短（2）染液因素★盧戈碘液放置時間過長★95％乙醇揮發(fā)★結(jié)晶紫與草酸銨混合時間太長（3）細(xì)菌因素：★細(xì)菌種類、★細(xì)菌菌齡第十四頁，共92頁。（三）抗酸染色法用于鑒別抗酸桿菌和非抗酸桿菌步驟：1、苯酚復(fù)紅加溫染色2、鹽酸酒精脫色3、亞甲藍(lán)復(fù)染結(jié)果：抗酸桿菌為紅色非抗酸桿菌為藍(lán)色第十五頁，共92頁。（四）其他染色法1、特殊結(jié)構(gòu)染色法第十六頁，共92頁。2、負(fù)染色法第十七頁，共92頁。3、熒光染色第十八頁，共92頁。二、細(xì)菌不染色標(biāo)本鏡檢應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動力和運動方式常用方法：壓滴法、懸滴法、暗視野映光法第十九頁，共92頁。壓滴法載玻片細(xì)菌懸液蓋玻片第二十頁，共92頁。懸滴法鏡檢第二十一頁，共92頁。3、暗視野聚光法4、相差顯微鏡檢查法第二十二頁，共92頁。（二）影響因素1、操作因素2、玻片因素3、光線強(qiáng)度第二十三頁，共92頁。第二節(jié)細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)第二十四頁，共92頁。一、基本條件（一）接種環(huán)與接種針用于取菌、接種及分離細(xì)菌的器具1、接種針用于挑去單個菌落、穿刺接種及斜面接種2、接種環(huán)用于劃線分離培養(yǎng)、純種接種、挑取菌落和菌液以及制備細(xì)菌涂片。3、接種前后都應(yīng)對接種環(huán)和接種針進(jìn)行滅菌第二十五頁，共92頁。（二）紅外接種環(huán)滅菌器利用紅外線產(chǎn)熱進(jìn)行滅菌第二十六頁，共92頁。（三）培養(yǎng)皿制備固體培養(yǎng)基常用的器皿，用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)。第二十七頁，共92頁。附：微生物檢驗常用玻璃儀器的準(zhǔn)備

1、玻璃器材的種類及用途2、玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備玻璃器皿在清洗、干燥后必須經(jīng)正確的包裹和加塞后才能進(jìn)行滅菌處理。第二十八頁，共92頁。

3、玻璃器材的清洗★新購置的玻璃器材：1％～2％鹽酸浸泡－→清水清洗★用過的無污染器皿：洗滌劑洗刷－→清水清洗細(xì)菌污染的器材：消毒滅菌后再洗刷★盛培養(yǎng)基試管和平皿：高壓滅菌－→趁熱倒出－→洗滌劑洗刷－→清水沖洗★吸管：3％來蘇浸泡－→清水沖洗★玻片和蓋玻片：3％來蘇和清潔液浸泡－→清水沖洗；染色后的玻片，應(yīng)肥皂水煮沸10min再洗滌★含油脂的器皿：單獨滅菌第二十九頁，共92頁。（四）培養(yǎng)箱1、電熱恒溫培養(yǎng)箱2、二氧化碳培養(yǎng)箱3、厭氧培養(yǎng)箱第三十頁，共92頁。（五）培養(yǎng)基培養(yǎng)基：是指人工配制的適合細(xì)菌生長繁殖的綜合營養(yǎng)基質(zhì)。1、培養(yǎng)基的成分及作用營養(yǎng)物質(zhì)：肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、雞蛋和動物血清、生長因子、無機(jī)鹽水凝固劑：瓊脂、明膠抑制劑指示劑第三十一頁，共92頁。2、培養(yǎng)基的種類（1）按培養(yǎng)基的物理性狀分類液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和接種純種細(xì)菌。半固體培養(yǎng)基：含0.3％～0.5％瓊脂，用于觀察細(xì)菌的動力。固體培養(yǎng)基：含2％～2.5％瓊脂，多用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)。第三十二頁，共92頁。（2）按培養(yǎng)基的用途分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基：培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，如普通平板營養(yǎng)培養(yǎng)基：能滿足營養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長，如血平板鑒別培養(yǎng)基：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)菌，如克氏雙糖培養(yǎng)基（KIA）選擇培養(yǎng)基：具有選擇性抑制作用，用于選擇性的培養(yǎng)目的菌，如SS平板增菌培養(yǎng)基：促進(jìn)目的菌的生長，適用于含菌量較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯。厭氧培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)厭氧菌第三十三頁，共92頁。3、培養(yǎng)基制備的一般程序調(diào)配溶化矯正pH過濾澄清分裝滅菌檢定培養(yǎng)基滅菌★基礎(chǔ)培養(yǎng)基：121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘★含糖培養(yǎng)基：113℃滅菌15分鐘★雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌3天3次★不耐高溫的液體成分：濾過除菌保存第三十四頁，共92頁。二、細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)（一）無菌技術(shù)1、細(xì)菌檢驗的操作需在無菌室或超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行。2、無菌室、超凈工作臺使用前后需進(jìn)行消毒。3、細(xì)菌檢驗使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌4、無菌試管、燒瓶、吸管的使用5、標(biāo)本的采集6、廢棄物的處理8、個人防護(hù)第三十五頁，共92頁。（二）細(xì)菌接種與分離技術(shù)

1、細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境第三十六頁，共92頁。2、細(xì)菌接種法（1）平板劃線接種法：

目的：使混合的細(xì)菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以便獲得純菌。

方法：1）分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本2）連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本第三十七頁，共92頁。分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三十八頁，共92頁。連續(xù)劃線法第三十九頁，共92頁。（2）液體培養(yǎng)基接種法（3）穿刺接種法:用于觀察細(xì)菌動力（4）斜面接種法（5）傾注培養(yǎng)法:用于細(xì)菌計數(shù)（6）涂布接種法：見于藥敏試驗第四十頁，共92頁。（三）細(xì)菌的培養(yǎng)方法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：★培養(yǎng)溫度：35℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）★培養(yǎng)時間：18～24h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱、化學(xué)法厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等第四十一頁，共92頁。三、細(xì)菌的生長現(xiàn)象

（一）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象混濁沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌菌膜：多見于厭氧菌第四十二頁，共92頁。細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象第四十三頁，共92頁。（二）細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長，穿刺線邊緣模糊。無鞭毛細(xì)菌：只沿穿刺線生長，穿刺線邊緣清晰。第四十四頁，共92頁。細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有動力現(xiàn)象無動力現(xiàn)象第四十五頁，共92頁。（三）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落★定義：指單個細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)?！锞涮卣鳎捍笮　⑿螤?、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性★菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。第四十六頁，共92頁。菌落第四十七頁，共92頁。菌落與菌苔第四十八頁，共92頁。第三節(jié)細(xì)菌生化鑒定技術(shù)第四十九頁，共92頁。

細(xì)菌的生化反應(yīng)：細(xì)菌具有各自獨特的酶系統(tǒng)，因而在代謝過程中對底物的分解能力不同，所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不同，這些代謝產(chǎn)物各具有不同的生物化學(xué)特點，利用生物化學(xué)的方法來檢驗這些代謝產(chǎn)物，可用于鑒別和鑒定細(xì)菌，這種用生化反應(yīng)測定方法稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)。第五十頁，共92頁。一、碳水化合物的代謝試驗糖發(fā)酵試驗葡萄糖氧化／發(fā)酵試驗（O/F試驗）甲基紅試驗V-P試驗七葉苷水解試驗Β－半乳糖苷滲透酶試驗第五十一頁，共92頁。（一）糖發(fā)酵試驗原理：不同細(xì)菌可分解不同的糖多糖－→單糖－→丙酮酸－→酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)－→pH↓－→指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微量發(fā)酵管試劑：酚紅、溴甲酚紫等結(jié)果:培養(yǎng)基呈酸性變色（紅黃）應(yīng)用：觀察細(xì)菌對糖的分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定第五十二頁，共92頁。糖發(fā)酵試驗結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述酸性變色、有氣泡分解××糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣酸性變色、無氣泡分解××糖產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣培養(yǎng)基不變色不分解××糖第五十三頁，共92頁。糖發(fā)酵試驗第五十四頁，共92頁。（二）葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗1、原理：細(xì)菌分解葡萄糖的過程中對氧的需求不同，分為氧化、發(fā)酵和產(chǎn)堿三型單糖－→丙酮酸－→酸性產(chǎn)物－→pH↓－→指示劑呈酸性變色2、培養(yǎng)基：HL葡萄糖培養(yǎng)基3、試劑：石蠟

4、結(jié)果：兩管均不變色：產(chǎn)堿型石蠟管變色：發(fā)酵型非石蠟管變色：氧化型5、應(yīng)用：腸桿菌和非發(fā)酵菌的鑒別第五十五頁，共92頁。（三）甲基紅試驗原理：細(xì)菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基pH維持在4.4以下，加入甲基紅（4.4-5.4）后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應(yīng)。此為甲基紅試驗陽性。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水試劑：甲基紅試劑結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+培養(yǎng)基不變色：－應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌第五十六頁，共92頁。葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅甲基紅試驗第五十七頁，共92頁。甲基紅試驗第五十八頁，共92頁。（四）伏－普試驗（V-P試驗）原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結(jié)合，生成紅色化合物。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+培養(yǎng)基不變色：－應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌第五十九頁，共92頁。葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅V－P試驗脫酸第六十頁，共92頁。葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅脫酸第六十一頁，共92頁。（五）B-半乳糖苷酶試驗1、原理：有些細(xì)菌產(chǎn)生的B-半乳糖苷酶可分解鄰硝基酚B-半乳糖苷（ONPG）產(chǎn)生鄰硝基苯酚（黃色）2、培養(yǎng)基：1%乳糖肉湯瓊脂3、試劑：甲苯、ONPG4、結(jié)果：加入ONPG后，菌懸液黃色：+菌懸液無色：-5、應(yīng)用：遲緩發(fā)酵乳糖細(xì)菌的快速檢測第六十二頁，共92頁。（六）七葉苷水解試驗1、原理：某些細(xì)菌可以分解七葉苷七葉苷葡萄糖+七葉素黑色沉淀2、培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基3、結(jié)果：培養(yǎng)基黑色：+培養(yǎng)基不變色：-4、應(yīng)用：D群鏈球菌和其他鏈球菌的鑒別Fe2+第六十三頁，共92頁。二、蛋白質(zhì)類代謝試驗靛基質(zhì)試驗硫化氫試驗?zāi)蛩孛冈囼灡奖彼崦摪痹囼灠被崦擊让冈囼灥诹捻?，?2頁。（一）靛基質(zhì)試驗原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。培養(yǎng)基：蛋白胨水試劑：靛基質(zhì)試劑（含對二甲基氨基苯甲醛）結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+培養(yǎng)基液面為黃色：－應(yīng)用：用于腸道桿菌的鑒定第六十五頁，共92頁。靛基質(zhì)試驗原理色氨酸酶色氨酸靛基質(zhì)（吲哚）

玫瑰靛基質(zhì)（玫瑰吲哚）對二甲基氨基苯甲醛第六十六頁，共92頁。靛基質(zhì)試驗第六十七頁，共92頁。（二）硫化氫試驗原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色絡(luò)合物。培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基結(jié)果：培養(yǎng)基變黑：陽性不變黑：陰性應(yīng)用：常用于腸道桿菌的鑒定第六十八頁，共92頁。第六十九頁，共92頁。（三）尿素酶試驗原理：產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基試劑：酚紅指示劑結(jié)果：培養(yǎng)基變紅：+培養(yǎng)基不變色－應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒定第七十頁，共92頁。尿素酶試驗原理尿素尿素酶氨+CO2培養(yǎng)基pH升高酚紅呈堿性變色（紅）第七十一頁，共92頁。(四)苯丙氨酸脫氨實驗原理：細(xì)菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，可使培養(yǎng)基中的苯丙氨酸脫氨，形成苯丙酮酸，后者與三氯化鐵作用，形成綠色化合物。培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂試劑：10％三氯化鐵結(jié)果：加入試劑后培養(yǎng)基呈現(xiàn)綠色為陽性應(yīng)用：多用于腸道桿菌的鑒定第七十二頁，共92頁。苯丙氨酸脫氨試驗原理苯丙氨酸苯丙氨酸脫氨酶苯丙酮酸10％三氯化鐵綠色化合物第七十三頁，共92頁。（五）氨基酸脫羧酶試驗1、原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶，可使氨基酸脫羧成胺和二氧化碳，胺溶于水使培養(yǎng)基顯堿性2、培養(yǎng)基：氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基（糖、氨基酸）3、指示劑：為溴甲酚紫5.2（黃）-6.8（紫）4、結(jié)果：培養(yǎng)基變紫色：+培養(yǎng)基為黃色：-5、應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒別第七十四頁，共92頁。三、碳源利用試驗

（一）枸櫞酸鹽利用試驗原理：某些細(xì)菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽作為唯一氮源，細(xì)菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應(yīng)。培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基（淡綠色）試劑：溴麝香草酚藍(lán)（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍(lán)色）結(jié)果：培養(yǎng)基變藍(lán)：+培養(yǎng)基不變色：－應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒別第七十五頁，共92頁。枸櫞酸鹽利用試驗原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH升高溴麝香草酚藍(lán)呈堿性變色培養(yǎng)基變藍(lán)培養(yǎng)基第七十六頁，共92頁。（二）丙二酸鹽利用試驗1、原理：某些細(xì)菌可利用丙二酸為唯一碳源，分解丙二酸為碳酸鈉，碳酸根水解是培養(yǎng)基顯堿性2、培養(yǎng)基：丙二酸鈉培養(yǎng)基3、指示劑：溴麝香草酚藍(lán)（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍(lán)色）4、結(jié)果：培養(yǎng)基變藍(lán)色：+培養(yǎng)基不變色：-5、應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌屬之間的鑒別第七十七頁，共92頁。四、酶類試驗（一）觸酶（過氧化氫酶）試驗1、原理：有的細(xì)菌有觸酶，能催化過氧化氫生成水和氧，氧分子，出現(xiàn)氣泡。2、方法：取細(xì)菌少許，滴加3%Ｈ２Ｏ２試劑１－２滴。３、結(jié)果：一分鐘內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡：＋一分鐘內(nèi)不出現(xiàn)氣泡：－４、應(yīng)用：用于革蘭陽性球菌的初步分類第七十八頁，共92頁。（二）氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）試驗１、原理：某些細(xì)菌的氧化酶，可以將二甲基對苯二胺或四甲基對苯二胺氧化生成紅色醌類化合物２、用潔凈濾紙條粘取被檢細(xì)菌菌落，或直接將試劑直接滴在被檢細(xì)菌菌落上３、結(jié)果：出現(xiàn)紅色：＋不出現(xiàn)紅色：－４、應(yīng)用：用于腸道桿菌科和假單胞菌的鑒別。第七十九頁，共92頁。（三）凝固酶試驗１、原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白。２、方法：（１）玻片法：用于結(jié)合凝固酶試驗用未稀釋的兔血漿和生理鹽水各滴載玻片兩端。挑少許分別與之混合。（２）試管法：用于游離凝固酶試驗取三支潔凈試管，其中一支加入０.５ｍｌ１:４稀釋兔血漿，其余兩支分別加入陰陽性對照，各加入０.５ｍｌ待檢菌。

第八十頁，共92頁。３、結(jié)果：出現(xiàn)凝集：＋不出現(xiàn)凝集：－４、應(yīng)用：主要用于葡萄球菌的鑒定第八十一頁，共92頁。（四）ＤＮＡ酶試驗１、原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生ＤＮＡ酶，能分解ＤＮＡ，使長鏈ＤＮＡ變成寡鏈ＤＮＡ長鏈可被酸沉淀，寡鏈ＤＮＡ可溶于酸。２、培養(yǎng)基：DNA瓊脂平板3、方法：將細(xì)菌接種在DNA平板，培養(yǎng)后HCl覆蓋平板4、結(jié)果：菌落周圍出現(xiàn)透明圈：+菌落周圍無變化：-5、應(yīng)用：用于葡萄球菌、沙雷菌和變形桿菌的鑒定。第八十二頁，共92頁。（五）硝酸鹽還原試驗1、原理：2、培養(yǎng)基：硝酸鹽培養(yǎng)基3、結(jié)果：試劑出現(xiàn)紅色：+試劑不出現(xiàn)紅色：-4、應(yīng)用：用于腸桿菌科細(xì)菌、假單胞菌和厭氧菌的鑒別。硝酸鹽亞硝酸鹽亞硝酸重氮磺酸細(xì)菌醋酸對氨基苯磺酸N-a萘胺偶氮苯磺酸（紅色）a-萘胺第八十三頁，共92頁。五、其他試驗（一）復(fù)合生化試驗1、克氏雙糖鐵（KIA）試驗（1）原理：KIA中含有牛肉膏、酵母浸膏、蛋白胨、乳糖、葡萄糖、枸櫞酸胺鐵、酚磺酞指示劑。乳糖是葡萄糖的十倍。1）若細(xì)菌只分解葡萄糖，只能產(chǎn)生少量的酸，在培養(yǎng)8-11小時內(nèi)，分解葡萄糖的產(chǎn)生的酸可使培養(yǎng)基底層和斜面變黃色，18-24小時后，斜面所含氨基酸發(fā)生降解，中和斜面的酸，是斜面變紅色（堿色），底層仍為黃色（酸色）第八十四頁，共92頁。2）若細(xì)菌能分解乳糖，則可以中和斜面的堿，使整個培養(yǎng)基呈黃色。3）若細(xì)菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生H2S，H2S與枸櫞酸銨鐵反應(yīng)，產(chǎn)生黑色沉淀。（2）結(jié)果：斜面堿性/底層堿性：不發(fā)酵糖類斜面堿性/底層酸性：發(fā)酵葡萄糖斜面堿性/底