臨床微生物檢查課件 第18章-衣原體-11檢本

1衣原體(chlamydia)是一類嚴格在真核細胞內(nèi)寄生,有獨特發(fā)育周期,能通過細菌濾器的原核細胞型微生物.2衣原體的共同特征：G－,圓形或橢圓形.具有細胞壁,其組成與G－菌相似.有獨特的發(fā)育周期,二分裂方式繁殖.含有DNA和RNA兩種類型的核酸.對多種抗生素敏感.3分類:根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)和DNA同源性分為4個種:沙眼衣原體沙眼生物亞種性病淋巴肉芽腫亞種鼠亞種肺炎衣原體鸚鵡熱衣原體家畜衣原體4衣原體目衣原體科(Chlamydiaceae)假衣原體科(Parachlamydiaceae)Simkaniaceae科Waddliaceae科衣原體屬(Chlamydia)嗜性衣原體屬(Chlamydophila)沙眼衣原體(C.trachomatis)豬衣原體(C.suis)鼠衣原體(C.muridarum

)鸚鵡熱嗜性衣原體(C.psittaci)肺炎嗜性衣原體(C.pneumoniae)反芻動物嗜性衣原體(C.pecorum)流產(chǎn)嗜性衣原體(C.abortus)貓嗜性衣原體(C.felis)豚鼠嗜性衣原體(C.caviae)Simkania屬S.negevensisWaddia屬WSU86-1044假衣原體屬(Parachlamydia)P.acanthamoebae根據(jù)被檢株全長16SrRNA和23SrRNA同源性5湯飛凡教授首次采用雞胚接種于1955年分離出沙眼衣原體,肯定了沙眼的病原體,并且由他創(chuàng)建研究方法被廣泛采用,其它衣原體日后陸續(xù)被發(fā)現(xiàn).他是迄今為止發(fā)現(xiàn)重要病原體,并開辟了一個研究領(lǐng)域的唯一的中國微生物學(xué)家.6生物學(xué)性狀一、生活周期：以兩種發(fā)育類型存在：原體(elementarybody,EB)：小而致密,球形、卵圓形或梨形、中央有一致密的擬核,有細胞壁,是發(fā)育成熟的衣原體,存在于細胞外,具有感染性Giemsa染色呈紫色,Macchiavello染色呈紅色.7衣原體Chlamydiapneumoniae梨子形的原體（EBs）,左、吸附在巨噬細胞表面,右、進入細胞內(nèi)部的原體8網(wǎng)狀體(reticulatebody,RB;始體

initialbody,IB)大而疏松,圓形、卵圓形或不規(guī)則形,中央呈纖細的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),無致密的擬核,無細胞壁,代謝活潑,以二分裂方式繁殖,不能在細胞外存活,是繁殖型,無感染性.Macchiavello染色呈藍色；Giemsa染色呈藍色9衣原體的生活周期101112原體(EB)始體[網(wǎng)狀體(RB)]小大有致密的類核結(jié)構(gòu),有胞壁,發(fā)育成熟體大電子致密度較低,無胞壁Giemsa紫色,Macchiavello紅色Giemsa,Macchiavello均藍色高度感染性(有毒性)無感染性(無毒性)無繁殖能力代謝活潑,以二分裂方式繁殖胞外穩(wěn)定性強胞外穩(wěn)定性弱1314包涵體是指在易感細胞內(nèi)含繁殖的始體和子代原體的空泡.發(fā)育時期不同,包涵體的形態(tài)和大小都有差別.成熟的包涵體含有大量的原體根據(jù)包涵體的形態(tài),在細胞內(nèi)的位置、數(shù)目及染色性等對鑒別衣原體有一定意義沙眼衣原體的包涵體內(nèi)含有豐富的糖原：碘染色(＋).15非淋病性尿道炎分泌物涂片姬姆薩染色油鏡10×100見到一個大單核細胞,胞漿內(nèi)有球形和橢圓形的包涵體-衣原體16二、抗原成分衣原體LPS：屬特異性補體結(jié)合抗原外膜蛋白：包括屬、種、血清型或生物型等的抗原決定簇.17三、抵抗力鸚鵡熱衣原體比沙眼衣原體穩(wěn)定沙眼衣原體感染材料在35～37℃條件下,經(jīng)48h左右即失去活性,56℃5～6min滅活.對冷凍干燥有耐受(肺炎衣原體在4℃,24h感染性喪失＜50%.不能用甘油保存)紅霉素、四環(huán)素、強力霉素、利福平對衣原體有抑制作用18臨床意義致病機制內(nèi)毒素樣物質(zhì)：抑制細胞代謝,破壞細胞.主要外膜蛋白與吸附、侵入及阻止吞噬體和溶酶體融合有關(guān)Ⅳ型超敏反應(yīng).免疫力不強,易造成持續(xù)感染和反復(fù)感染.19一、沙眼衣原體感染：沙眼生物亞種(14個血清型)專門寄生于人,易感部位是粘膜的鱗柱狀上皮細胞血清型A、B、Ba、C：引起沙眼血清型B、Ba、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K：包涵體結(jié)膜炎和泌尿生殖道感染(性接觸傳播、非淋菌性泌尿生殖道感染)20感染眼結(jié)膜上皮細胞→增殖,包涵體→局部炎癥→早期流淚、有粘液膿性分泌物、結(jié)膜充血及濾泡增生→后期結(jié)膜瘢痕、眼瞼內(nèi)翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜損害→影響視力或致盲.21性病淋巴肉芽腫亞種(L1、L2、L2a、L34個血清型)——性病淋巴肉芽腫侵犯淋巴組織男性：腹股溝淋巴結(jié)化膿性炎癥;慢性淋巴肉芽腫.女性：會陰、肛門和直腸形成腸皮膚瘺管.22二、鸚鵡熱：分為A、B、C、D、E、F、M56和WC8個血清型和至少9個基因型.養(yǎng)禽業(yè)的職業(yè)病.存在于鳥類腸道,由糞便排出污染環(huán)境,以氣溶膠傳播,通過呼吸道侵入人體.典型臨床表現(xiàn)為非典型性肺炎.23三、肺炎衣原體感染(TWAR,1個血清型)：天然宿主是人.經(jīng)飛沫或呼吸道分泌物傳播.引起急性呼吸道疾病:肺炎,支氣管炎,咽炎等;也可引起慢性支氣管炎,哮喘等.肺炎衣原體慢性感染可能是冠心病心肌梗塞的重要危險因素.24沙眼衣原體微生物學(xué)檢查一.標本采集與處理1、眼和泌尿生殖道保證采集到足夠的上皮細胞.標本可置運送培養(yǎng)基中送檢(含蔗糖、磷酸鉀緩沖液、胎牛血清、抗生素等).2、性病淋巴肉芽腫：采集淋巴結(jié)膿液淋巴結(jié)抽取液活檢材料25二、直接檢出1、顯微鏡檢查：包涵體,碘染色鏡檢：參考價值(1)Giemsa染色：原體：紫紅色網(wǎng)狀體：藍色26沙眼衣原體包涵體含糖原,被碘液染為棕褐色(與其他衣原體鑒別)27(2)免疫熒光染色：每張標本片上不少于10～20個柱狀或鱗狀上皮細胞；每個高倍鏡視野有2～3個.直接法熒光抗體染色——上皮細胞內(nèi)典型包涵體抗衣原體LPS單克隆抗體——屬特異性抗沙眼衣原體MOMP(外膜蛋白)的單克隆抗體——種、型特異性28292、酶免疫檢測(EIA)：檢測標本中衣原體可溶性抗原3、核酸檢測：核酸探針.PCR(主要擴增16SrRNA、7.5kb質(zhì)粒、MOMP等基因片段)4、金標快速檢測法：標本中衣原體抗原.30三、分離培養(yǎng)與鑒定1、分離培養(yǎng)：(1)細胞培養(yǎng)選擇相應(yīng)敏感的細胞：McCoy細胞；HeLa-229/299細胞.培養(yǎng)方法：蓋玻片小瓶法、微量滴定板313233(2)雞胚培養(yǎng)：雞胚卵黃囊接種.每日觀察至13天.收獲卵黃囊膜——Gimenez染色.34

2、鑒定：細胞培養(yǎng)蓋玻片Giemsa染色Lugol碘液染色熒光抗體染色雞胚卵黃囊和小鼠分離材料免疫熒光法鑒定抗原補體結(jié)合試驗鑒定抗原35四、血清學(xué)診斷微量免疫熒光試驗(MIF)：主要用于沙眼、性病淋巴肉芽腫及沙眼衣原體引起的眼-生殖道綜合征等疾病的診斷.肺炎衣原體感染一.標本采集與處理咽拭子置運送培養(yǎng)基,冷藏送檢24h內(nèi)接種-70℃保存二、直接檢出

１．同沙眼衣原體

２．測ＴＷＡＲ株的核酸36三、分離培養(yǎng)與鑒定

1、分離培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)選擇相應(yīng)敏感的細胞：HEP-2細胞.2、鑒定：熒光抗體染色四、血清學(xué)診斷微量免疫熒光試驗3738鸚鵡熱衣原體一.標本采集與處理血液：加肉湯或營養(yǎng)液制成10%懸液痰：加含抗生素的肉湯或營養(yǎng)液→用力振搖成乳懸液→室溫1～2h→低速離心上清液接種.39二、直接檢出1、顯微鏡檢查：Giemsa染色2、測抗原：免疫熒光染色3、核酸檢測：40三、分離培養(yǎng)與鑒定1、分離培養(yǎng)：(1)細胞培養(yǎng)選擇相應(yīng)敏感的細胞：FL細胞；BHK細胞.41(2)雞胚培養(yǎng)：雞胚卵黃囊接種.每日觀察至13天.收獲卵黃囊膜——Gimenez染色.(3)小鼠