急性有機(jī)磷中毒動(dòng)物機(jī)能指標(biāo)的動(dòng)態(tài)觀察與測(cè)定課件

急性有機(jī)磷中毒動(dòng)物機(jī)能指標(biāo)的動(dòng)態(tài)觀察與測(cè)定

指導(dǎo)老師：林明棟余劍平組員：陳春宇陳達(dá)標(biāo)黃利軍李慶志

一課題背景知識(shí)回顧近年來，急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）患者逐年增多，對(duì)AOPP的防治成了國內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)課題。有機(jī)磷酸酯類進(jìn)入機(jī)體后，與血漿膽堿酯酶（AChE）生成難以水解的磷?；憠A酯酶，使AChE失去水解ACh的能力，導(dǎo)致不同程度的中毒表現(xiàn)。一課題背景知識(shí)回顧有機(jī)磷中毒時(shí)對(duì)AChE的抑制作用已闡明，但中毒過程中逐步出現(xiàn)的M樣，MN樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的輕、中、重度中毒表現(xiàn)。通常只是以測(cè)定的AChE值為判定AOPP的中毒程度及指導(dǎo)搶救用藥的常規(guī)方法。目前臨床上的傳統(tǒng)搶救方法是抗膽堿藥阿托品和膽堿酯酶復(fù)能劑氯磷定配伍。二探索性研究成果階段性匯報(bào)（一）實(shí)驗(yàn)方案①材料及方法（一）試劑0.1%硫酸阿托品、5%敵百蟲、1%肝素、2.5%解磷定、75%酒精、膽堿酯酶試劑盒（南京建成生物研究所）、血糖試紙①材料及方法（二）儀器血糖儀（SureStep）、恒溫水浴、分光光度計(jì)、離心機(jī)、微量移液管（50-200μL、200-1000μL）、試管架、一次性小試管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、燒杯（150ml）、玻璃棒、保溫瓶、試劑瓶、測(cè)瞳尺（可用游標(biāo)卡尺代替）、刀片、棉球①材料及方法（四）動(dòng)物模型建立預(yù)實(shí)驗(yàn)：a. 取家兔2只，編號(hào)，稱重。觀察呼吸等各項(xiàng)指標(biāo)；b. 將其中一個(gè)兔固定于兔箱內(nèi)，以醮有酒精的棉球擦拭兔耳緣靜脈，使血管擴(kuò)張，充血明顯時(shí)，用刀片橫斷耳緣靜脈，取一小滴滴到血糖試紙上測(cè)定正常情況下血糖，然后讓血液自然滴入試管（管中預(yù)先滴入2滴肝素，自然干燥后備用）中，供測(cè)正常膽堿酯酶活性用（測(cè)定膽堿酯酶活性備用血取出來后馬上放進(jìn)冰水中冷凍，保持酶活性，待整個(gè)實(shí)驗(yàn)全部血樣取完后統(tǒng)一測(cè)定酶活性）。c. 按照2.0ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)從耳緣靜脈處注射5%敵百蟲，觀察記錄表所示各項(xiàng)指標(biāo)，中毒癥狀明顯時(shí)按照b步驟中的方法取血測(cè)定血糖和備血測(cè)定膽堿酯酶；d. 出現(xiàn)重度中毒現(xiàn)象時(shí)，立即給家兔注射0.1%硫酸阿托品1ml/kg、當(dāng)癥狀出現(xiàn)明顯緩解時(shí)取血測(cè)定血糖、備血測(cè)定膽堿酯酶活性；e. 換用另外一只家兔，按照同樣的方法步驟（d步驟注射2.5%解磷定）進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。f. 測(cè)定膽堿酯酶活性（步驟參考試劑盒使用說明書）；通過預(yù)實(shí)驗(yàn)過程主要摸索清楚出現(xiàn)中毒的大概時(shí)間、中毒的癥狀，以便適當(dāng)?shù)卮_定取血測(cè)定點(diǎn)，并熟悉操作；g. 按照前面的步驟和預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索出來的取血點(diǎn)，分成阿托品急救組和解磷定急救組（每組4個(gè)家兔，雌雄各半）進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。中毒及解救體征變化趨勢(shì)給敵百蟲后家兔呼吸變得急促，瞳孔變小，唾液分泌增多，排便增多。幾分鐘后，家兔四肢開始癱軟，行動(dòng)不便并出現(xiàn)肌顫。隨著中毒時(shí)間延長，以上觀察指標(biāo)變化更為明顯。瞳孔繼續(xù)變小，并有發(fā)散現(xiàn)象；唾液大量增多，部分家兔淚腺分泌增多；排便頻繁且逐漸呈稀糊狀；呼吸更為急促，部分家兔可聞及濕羅音。肌顫明顯加劇，四肢癱軟。其精神狀況逐漸變差，目光渙散，最后意識(shí)模糊，甚至完全喪失。阿托品解救瞳孔迅速變大；唾液和淚腺分泌較前明顯減少，排便減少，呈稀糊狀；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其呼吸急促，可聞及明顯濕羅音。肌顫較前減緩，但沒有消失，四肢仍然完全癱軟無力，不能站立；精神狀況逐漸恢復(fù)，意識(shí)清醒。解磷定解救呼吸較前平緩，未聞及濕羅音；唾液和淚腺分泌減少，排便減少；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其瞳孔大小基本不變，但發(fā)散現(xiàn)象消失；精神狀況有所改善，但總體情況比第一組的差。注射足量解磷定后，肌顫馬上消失，部分家兔后期再次出現(xiàn)輕微肌顫。其行動(dòng)能力有所恢復(fù)CHE活力變化血糖變化SPSS結(jié)果結(jié)果分析癥狀部分急性有機(jī)磷中毒癥狀復(fù)雜多樣，輕度者以M樣癥狀為主，中度者可同時(shí)出現(xiàn)M樣和N樣癥狀。嚴(yán)重者除M樣和N樣癥狀外，還有顯著的CNS癥狀。模型的建立是給大劑量的敵百蟲使得家兔經(jīng)歷由M到CNS樣癥狀的變化然后解救。N樣癥狀隨著中毒程度加深，乙酰膽堿將激活機(jī)體中的N受體，產(chǎn)生N樣癥狀。N受體有N1和N2兩種亞型，前者存在于自主神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元，后者存在于骨骼肌運(yùn)動(dòng)終板。骨骼肌運(yùn)動(dòng)終板N1受體被激動(dòng)時(shí)表現(xiàn)為肌束顫動(dòng)，常先從眼瞼、顏面等處小肌肉開始，逐漸波及全身，最后又轉(zhuǎn)為肌無力，并可導(dǎo)致肌肉麻痹，嚴(yán)重時(shí)可因呼吸肌麻痹而死。交感神經(jīng)節(jié)受乙酰膽堿刺激時(shí)，其節(jié)后交感神經(jīng)纖維末梢釋放兒茶酚胺使血管收縮，引起血壓增高、心跳加快和心律失常。CNS作用一般有機(jī)磷酸酯易揮發(fā)、脂溶性高，可通過血腦屏障而產(chǎn)生CNS作用。常呈雙相反應(yīng)，通常中毒早期以CNS興奮為主，表現(xiàn)為躁動(dòng)不安、幻覺、譫妄甚至抽搐、驚厥。后期轉(zhuǎn)為抑制，出現(xiàn)意識(shí)模糊、共濟(jì)失調(diào)、反射消失、昏迷等癥狀。嚴(yán)重中毒晚期，則出現(xiàn)呼吸中樞麻痹所致的呼吸抑制，甚至呼吸停止和血管運(yùn)動(dòng)中樞抑制引起的血壓下降甚或循環(huán)衰竭，危及生命。CHE活力部分中毒：靜脈注射，有機(jī)磷與血液中的酶結(jié)合迅速，所以很快便到達(dá)重度中毒水平（30%）阿托品解救：CHE活性降低到10%左右，猜想是M受體被阻斷，乙酰膽堿的蓄積量進(jìn)一步升高，機(jī)體應(yīng)激性地從血液中轉(zhuǎn)運(yùn)一定量的CHE到神經(jīng)接頭處，以分解突然增多的乙酰膽堿，故測(cè)得血液中CHE活性下降。而后，血液中CHE含量降低將促進(jìn)其在機(jī)體內(nèi)的合成，從而使得酶活性恢復(fù)到注射阿托品前的水平。解磷定解救：恢復(fù)膽堿酯酶活力，直接上升。阿托品解救：M受體被阻斷，使得N樣受體激活而沒有與之拮抗的M樣作用。血糖持續(xù)升高。癥狀緩解之后，機(jī)體功能的紊亂緩解，血糖降回正常水平。解磷定解救：膽堿酯酶活性恢復(fù)很大程度，迅速分解最先到達(dá)的M樣受體接頭處的ACHE，使得血糖急劇上升。后逐步擴(kuò)散到神經(jīng)接頭處，乙酰膽堿的堆積狀況得到改善，機(jī)體功能恢復(fù)，血糖回落。結(jié)論血糖作為動(dòng)態(tài)檢測(cè)指標(biāo)是可行的。主要參考文獻(xiàn)陳克敏主編.實(shí)驗(yàn)生理科學(xué)教程.北京：科學(xué)出版社.2001林明棟主編.比較機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué).中山大學(xué)醫(yī)學(xué)教務(wù)處.2008陳凱.60例有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的心電圖分析與臨床觀察.JournalofPracticalElectrocardiologyJS（2006)Vol.15,No.1

何軍山盧新華曹慧芳李軍周志雄.有機(jī)磷農(nóng)藥中毒對(duì)小鼠糖代謝影響的實(shí)驗(yàn)研究.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué).2003年2月第lO卷第l期徐華.淺談3種不同方法測(cè)定血糖效果的分析.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥.2006年第2期相其雁王明山.急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者血清淀粉酶及血糖檢測(cè)的臨床意義.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志.2007年9月第10卷第9期王玉萍王緒玲李慧張巡森何風(fēng)生.三種血液膽堿酯酶測(cè)定方法的比較.衛(wèi)生研究.2002年2月第31卷第1期楊杰.急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者24h動(dòng)態(tài)心電圖分析.ChineseJournalofClinicalPractica